Раздел 4. ГЖХ метод анализа «летучих» ядов

Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) основан на разделении летучих веществ между подвижной фазой (газ) и неподвижной фазой (жидкость, нанесённая в виде тонкой плёнки на твёрдый носитель).

Газовый хроматограф состоит из следующих основных блоков:

1. Баллон с газом носителем

2. Регулятор расхода газа-носителя

3. Дозатор

4. Термостаты для дозатора, колонки и детектора

5. Колонка

6. Детектор

7. Самописец

 

 

Качественными характеристиками вещества являются параметры удерживания: время удерживания (абсолютное неисправленное и исправленное, относительное), удерживаемый объём, индекс удерживания Ковача. Количественными характеристиками являются площадь пика и его высота.

Хроматограмма, полученная в изотермических условиях

 

 

 

А - момент ввода пробы; Б - пик несорбируемого компонента; t₀ –время удерживания несорбируемого компонента; t_уд1 , t_уд2, t_уд3 – времена удерживания компонентов 1,2,3; ώ- ширина основания треугольника;b_0,5- ширина пика на полувысоте.

Расчёт концентрации определяемого вещества проводят методом нормировки, абсолютной калибровки, относительной калибровки, методом внутреннего стандарта и добавки.

ГЖХ определение спиртов алифатического ряда алкилнитритным методом.

Условия хроматографирования:

хроматограф с детектором катарометром;

металлическая колонка спиральной формы размером 150х0,4; твердый носитель: диатомитовый кирпич ИНЗ 600, модифицированный серебром;

неподвижная жидкая фаза: ПЭГ 2000/20%/;

температура термостатов колонок и детектора 60^оС, температура дозатора – комнатная;

газ-носитель - гелий, скорость гелия 28мл/мин

ток катарометра 100 мА,

делитель 265;

скорость ленты самописца 0,6 см/мин.

Качественное определение.

В три пенициллиновых флакона помещают по 0,5мл 50% раствора трихлоруксусной кислоты. В первый добавляют контрольную смесь спиртов алифатического ряда, во второй – 0,5 мл крови, в третий –0,5 мл мочи. Флаконы закрывают фиксирующимися пробками и в каждый шприцем вводят по 0,3 мл 30% раствора нитрита натрия. Флаконы встряхивают в течение 1 минуты и шприцем из каждого отбирают по 1 мл парогазовой фазы, вводят в колонку хроматографа и хроматографируют. При введении пробы из контрольного флакона появляются пики по числу компонентов смеси.

Порядок выхода алкилнитритов из колонки хроматографа:

1. Несорбирующиеся газы

2. Метилнитрит.

3. Этилнитрит.

4. Изопропилнитрит.

5. Пропилнитрит.

6. Изобутилнитрит.

7. Бутилнитрит.

8. Изоамилнитрит.

9. Амилнитрит.

При введении проб из второго и третьего флаконов, в случае наличия в них «летучих» ядов, появляются соответствующие пики. Определяют время удерживания (абсолютное исправленное) спиртов в контрольной смеси и в пробах. Сравнивают их и делают вывод о наличии (или отсутствии) спиртов в пробах крови и мочи.

Количественный анализ

Готовят эталонные растворы определяемого спирта с концентрациями 0,5;1;2; 4 и 6 промилле. В две серии по семь пенициллиновых флаконов помещают по 0,5 мл 50% раствора трихлоруксусной кислоты и по 1 мл смеси равных объёмов: №1 -0,3%_о спирта и 4%_о пропанола (если пропанол присутствует в объектах, используют изопропанол), №2 -1%_о спирта и 4%_о пропанола, №3 - 2%_о спирта и 4%_о пропанола, №4 – 4%_о спирта и 4%_о пропанола, №5 -6%_о спирта и 4%_о пропанола, №6 - крови и 4%_о пропанола, №7 - мочи и 4%_о пропанола.

Все флаконы закрывают фиксирующимися пробками, в каждый вводят по 0,3 мл 30% нитрита натрия и флаконы встряхивают в течение 1 минуты. Затем шприцем из каждого флакона отбирают по 1 мл парогазовой фазы и вводят в колонку хроматографа. Измеряют высоты пиков, определяют отношения высот пиков определяемого спирта к высотам пиков пропилнитрита. По полученным данным строят калибровочный график и рассчитывают концентрацию определяемого спирта в исследуемых объектах.

Степень алкогольного опьянения этиловым спиртом определяют по таблице в Приложении, вывод о фазе метаболизма делают по соотношению концентрации этанола в крови и в моче.