Лабораторная работа. Количественное определение креатина в моче.

Ход работы: В три пробирки внести по 0,2 мл 37% раствора соляной кислоты, в 1-ю и 2-ю пробирки добавить по 0,2 мл исследуемой мочи, разбавленной в 5 раз дистиллированной водой. Смесь в пробирке 2-й нагреть 3 мин на кипящей водяной бане, затем охладить. Во все три пробирки внести по 0,6 мл насыщенного р-ра пикриновой кислоты и по 1мл 12,5% раствора едкого натрия. Инкубировать 10 мин при комнатной температуре, добавить по 6 мл воды.

Растворы колориметрировать против контроля (пробирка 3-я) в кювете с рабочим слоем 10 мм (фильтр зеленый). Ниже в таблице приведены данные для построения калибровочной кривой, полученные в опытах со стандартным раствором креатинина.

На основании этих данных построить график зависимости оптической плотности от концентрации растворов креатинина и с помощью графика определите содержание креатинина в исследуемой пробе:

Пробирка 1-ая – содержание креатинина;

Пробирка 2-ая – содержание креатинина + креатина.

По разнице между пробами 1-й и 2-й можно рассчитать содержание креатина.

Полученные результаты сравните с нормальными показателями. Может ли служить показателем патологии мышц изменение содержания креатина, креатинина в моче? Ответ аргументировать.

Самостоятельно выполните следующие задания:

1. В постабсорбтивный период уровень глюкозы в крови снижается. Какова роль печени в поддержании нормогликемии в этой ситуации? Ответ проиллюстрируйте схематичным изображением конкретного молекулярного механизма.

2.В период длительного голодания для поддержания нормогликемии в печени интенсивно протекает глюконеогенез. Чем обьяснить в этой ситуации увеличение скорости мочевинообразования в печени?

3. Какова роль печени в желчеобразовании? Назовите субстрат и фермент образования желчных кислот.

4. В абсорбтивный период (рост уровня инсулина) в печени активно идет синтез холестерина. Назовите основные соединения, которые снижают активность регуляторного фермента синтеза холестерина (гидроксиметилглютарил-КоА-редуктазы).

Какова роль печени в выведении холестерина из организма?

5. Назовите процессы в печени, которые могут нарушаться при дефиците липотропных факторов. Назовите патологический процесс, который является следствием этих нарушений.

6. При длительном углеводном голодании возможно истощение буферных оснований крови. Какова роль печени в развитии этого эффекта? Опишите молекулярный механизм.

7. Печень часто называют – «орган-альтруист», т.к. в печени образуются жизненнонеобходимые соединения, которые печень синтезирует на экспорт. Назовите эти вещества и вспомните их значение.

8. Используя таблицу №24 «Клинико-биохимическая характеристика желтух» (кН.:«Биохимия для врача» стр. 259), проверьте свои знания по биохимическим показателям крови, мочи кала в норме при желтухе.

9. Изменится ли активность аланинаминотрансферазы сыворотки крови при остром инфекционном поражении печени. Вспомните место этого фермента в метаболизме. С какой целью определяют активность АСТ и АЛТ в биохимических лабораториях лечебных учреждений?

10. Определите понятие «диспротеинемия». Какова возможная причина этого состояния? С помощью какова теста можно обнаружить диспротеинемию?

11. Поверьте свои знания: При продолжительной мышечной работе:

а. Повышается уровень инсулина в крови; б. Ускоряется глюконеогенез из лактата в печени; в. Ускоряется глюконеогенез из глицерина в печени; г. В мышцах происходит распад гликогена; д. В печени происходит распад гликогена.

12. В клетках скелетных мышц при выполнении срочной физической работы происходит:

а. Повышение проницаемости мембран клеток для глюкозы под влиянием инсулина;

б. Распад цАМФ, катализируемый фосфодиэстеразой;

в. Активация гликогенфосфорилазы путем ее фофсфорилирования;

г. Переход гликогенфосфорилазы в неактивную форму путем фосфорилирования;

д. Активация аденилатциклазы в клетке.

13. Потребность мышцы в АТФ при сокращении может возрасти примерно в 1000 раз (запаса АТФ в клетке хватит на 0,5 с работы). В этом случае потребление кислорода отстает от потребности в АТФ и ее поставщиком становится гликолиз. Какой продукт является аллостерическим активатором гликолиза, через какой фермент реализуется его действие?

13. Почему при гипоксии возникает регидность мышц?

14. Креатинин обнаруживается в слюне человека, причем его количество коррелирует с содержанием в крови. Обьясните какую роль играет его непосредственный предшественник в организме. Для этого:

а. Назовите это соединение, назовите его химическую природу, место синтеза и функции.;

б. Назовите для каких целей определяют содержание креатина и креатинина в крови и моче.