Методические указания к ЛПЗ № 7.

О Р Г А Н О И Д Ы К Л Е Т К И.

М Е М Б Р А Н Н Ы Е О Р Г А Н О И Д Ы.

ЛИЗОСОМЫ. МИТОХОНДРИИ (2 ч.)

		ЦЕЛЕВАЯ УСТАНОВКА Знать: строение и функциональное значение лизосом и митохондрий.   Уметь: «читать» микропрепараты, иллюстрирующие строение лизосом и митохондрий, а также электронограммы, давать характеристику функционального значения этих органоидов клетках.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

К САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЕ НА ЗАНЯТИИ

 

Задание 1. ОЗНАКОМЬТЕСЬ С МЕТОДОМ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИЗОСОМ В КЛЕТКАХ.

Алгоритм работы

1. Рассмотрите при малом увеличении микроскопа препарат печени, обработанный цитохимическими методами на кислую фосфатазу.

2. Найдите в цитоплазме гепатоцитов черно-коричневые зерна, соответствующие местам проявления активности фермента.

3. Постарайтесь найти купферовские клетки (сплошь окрашенные в черно-коричневый цвет с неразличимыми ядрами).

4. Выполните схематический рисунок микропрепарата. Обозначьте на нем места активности фермента (1), купферовские клетки (2).

5. Объясните причины различий в интенсивности окраски гепатоцитов и клеток эндотелия капилляров печени.

6. Сделайте вывод о функциональной роли этих клеток в органе (см. Приложение) на основе выявленной микрокартины.

 

Отчетные требования: правильно выполненный цитохимический препарат и верное его «прочтение», вывод.

Задание 2. ИЗУЧИТЕ СТРОЕНИЕ ЛИЗОСОМ ПО МИКРОФОТОГРАФИЯМ.

Алгоритм работы

1. Рассмотрите две микрофотографии, иллюстрирующие ультраструктуру лизосом.

2. Определите на них первичные и вторичные лизосомы, а также аутолизосомы.

 

== Из Ченцова, 1977 Из Ролан с соавт., 1978

3. Опишите эти типы лизосом (см. Приложение).

4. Сделайте вывод о функциональной роли этих органоидов.

Отчетные требования: ориентирование по фотографии, правильное описание ультраструктуры лизосом, вывод.

Задание 3. ОЗНАКОМЬТЕСЬ С МЕТОДАМИ ВЫЯВЛЕНИЯ МИТОХОНДРИЙ И ИХ СТРУКТУРОЙ В ОПТИЧЕСКОМ МИКРОСКОПЕ.

Алгоритм работы

1. Подготовьте микроскоп к работе.

2. Рассмотрите при малом увеличении микроскопа приготовленный вами ранее препарат печени крысы (фиксация кальций-формолом, окраска по Альтману).

3. Найдите наиболее светлый участок. Переведите револьвер на иммерсионную систему.

4. Рассмотрите выделенный участок под иммерсией.

5. Найдите митохондрии, которые на желтоватом фоне цитоплазмы выделяются красно-розовые одиночные округлые тельца.

6. Зарисуйте микрокартину в альбом, сделав следующие обозначения: ядро (1), ядрышко (2), цитоплазма (3), митохондрии (4).

 

Отчетные требования: правильно приготовленный и «прочитанный» препарат, рисунок в альбоме с верными обозначениями структур.

Задание 4. ИЗУЧИТЕ УЛЬТРАСТРУКТУРУ МИТОХОНДРИЙ.

Алгоритм работы

1. Рассмотрите микрофотографию ультраструктуры митохондрий в клетках околоушной слюнной железы крысы.

Из Ченцова, 1977

 

2. Опишите фотографию (см. Приложение).

3. Самостоятельно опишите микрофотографию (из Ролан с соавт., 1978) митохондрий клеток.

 

 

Приложение к заданию 1.

Реакция на кислую фосфатазу является одним из тестов на лизосомы. Наиболее удобно проводить эту реакцию на клетках печени, т.к. гепатоциты, а особенно эндотелиальные клетки капилляров этого органа всегда содержат лизосомы.

После проведения специальных цитохимических реакций на определение щелочной фосфатазы в цитоплазме гепатоцитов обнаруживаются зерна черно-коричневого цвета. Эти зерна соответствуют местам активности фермента. Этих зерен в клетках печени немного, и они четко выделяются на фоне светлой плазмы и соответстуют лизосомам.

Купферовские же клетки (эндотелиальные клетки капилляров) целиком окрашиваются в черно-коричневый цвет, т.к. «забиты» лизосомами. В этих клетках невозможно различить ядер, в то время как в гепатоцитах ядра хорошо окрашиваются, хотя их окраска не связана с данным ферментом.

Осадок, который выпадает в лизосомах, т.е. в местах активности фермента, представляет собой сернистый свинец. Он выпадает в результате деятельности определяемого гидролитического фермента.

Приложение к заданию 2.

На фотографии представлен участок цитоплазмы гепатоцита со скоплениями лизосом.

Для этих органоидов характерно то, что их окружает одинарная мембрана, а ультраструктура их крайне полиморфна. Хорошо видны первичные (протолизосомы) и вторичные лизосомы (телолизосомы).

Протолизосомы как правило меньших размеров по сравнению с телолизосомами. По мере дифференцировки протолизосом в них появляются мелкие вакуоли, которые видны на фоне электронноплотного содержимого.

Кроме лизосом на фотографии видны митохондрии, имеющие типичное строение.

На второй микрофотографии представлена аутолизосома, протоплазма которой содержит фрагменты клеток (участки мембранных органоидов) в процессе переваривания.

Приложение к заданию 3.

При малом увеличении в печени видны крупные клетки, имеющие многоугольную форму. Между рядами этих клеток нередко встречаются широкие кровеносные капилляры тонкими стенками.

При рассмотрении гепатоцитов под иммерсией в цитоплазме, на желтоватом фоне четко выступают красно-розовые митохондрии, имеющие округлую форму. Митохондрии рассеяны в цитоплазме в виде одиночных тел, они редко образуют скопления. Среди зернистых митохондрий изредка попадаются короткие палочки. Митохондрии могут выстраиваться в короткие цепочки из нескольких зерен.

 

Приложение к заданию 4.

Функция клеток исчерченного отдела любых слюнных желез связана с фильтрацией солей и воды из кровеносных капилляров. Цитоплазма таких клеток содержит значительное количество палочковидных митохондрий.

Электронная микрофотография демонстрирует участки базальной части цитоплазмы двух клеток. В центре фотографии расположены палочковидные митохондрии. Они имеют многочисленные пластинчатые кристы, идущие в поперечном направлении. Число крист – это показатель активности митохондрий: чем больше крист, тем активнее функционирует органоид. Такого рода митохондрии отличаются высоким потенциалом окислительного форфорилирования.

На второй фотографии приведены митохондрии с кристами в виде трубочек (клетки коркового слоя надпочечника крысы).

Последняя (третья) фотография иллюстрирует митохондрии с параллельными кристами (клетки соединительной ткани яичника хомячка).