Произвести посев выделенной чистой культуры бактерий на среды « пестрого

ряда» для изучения биохимических свойств.

Чистую культуру исследуемого микроба засевают петлей в среды «пестрого» ряда. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18—24 ч или более длительно. В том случае, если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды: при разложении углевода до кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляется пузырек газа в поплавке. Если используются среды с полужидким агаром, то образование газа регистрируется по разрыву столбика. При отсутствии ферментации цвет среды не меняется. Поскольку бактерии ферментируют ■не все, а только определенные для каждого вида углеводы, входящие в состав сред Гисса, наблюдается довольно пестрая картина, поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором называют «пестрым» рядом (рис. 30).

Для определения протеолитических ферментов производят посев культуры бактерий уколом в столбик 10—20% желатина, пептонную воду. Посевы в желатине инкубируют при 20—22°С в течение нескольких дней. При наличии протеолитических ферментов бактерии разжижают желатин, причем в этом месте образуется фигура, напоминающая воронку или елочку.

В посевах в пептонную воду определяют продукты расщепления пептона после инкубирования в течение 2—3 сут при 37° С —ставят реакции на аммиак, индол, сероводород и др.

Реакция на аммиак. Узкую полоску лакмусовой бумаги укрепляют под пробкой так, чтобы она не соприкасалась с питательной средой. Посинение бумаги свидетельствует о наличии аммиака.

17. учет проводиться с целью определения спектра ферментативной активности.

После посева бактерий, если они ферментируют углеводы, наблюдают появление красной расцветки, которая свидетельствует об изменении рН в кислую сторону (образование кислоты), а порой из поплавка вытесняется жидкость. Тогда делают вывод об образовании газа. Следовательно, возможны три варианта при учете результатов посева на середовише Гисса: микроорганизмы не ферментируют субстрату (негативный ответ) или бактерии раскладывают углеводы (позитивный ответ) с образованием кислоты без газа или кислоты и газа. На основании изучения морфологических, культуральных, биохимических, антигенных, биологических и других свойств микробов делают окончательный вывод об идентификации.

18.учет результатов роста на стреде Ресселя. Посев делают как на поверхность так и в глубь среды. после инкубации регистрируют реакцию в косяке и столбике, наличие или отсутствие газообразования.

19.Р-я оринтеровочной аглютинации Реакция широко применяется для серологической идентификации выделенных микробов, а также при постановке ускоренных серологических реакций.

Постановка реакции:

Пастеровской пипеткой наносят на предметное стекло каплю сыворотки в нужных разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24-часовой агаровой живой культуры или каплю диагностикума. Постановка реакции должна сопровождаться контролем антигена и контролем сыворотки. Учет реакции производят через 5-10 минут.

Компоненты:

1. Антигены неизвестного вида;

2. Известная иммунная сыворотка;

3. Физиологический раствор.

Положительный результат – хлопьевидный осадок. Отрицательный – жидкость остается равномерномутной.

20. Основной раствор комплемента (1:10) разливают в ряд пробирок в количестве от 0,05 до 0,5 мл. и через ихн довести объем жидкости в каждой пробирке до 1,5 мл. 37 градусов, 45 мин. термостат. потом добавляют гемолитическую систему(эритроциты барана и гемолитическая сыворотка) и выдерживают еще 30 мин. определяют титр- наименьшее его количество, вызывающее полный гемолиз. рабочая доза комплемента в рск должна быть выше титра на 20-30%

21ОУХТЕРЛОНИ. определяют –преципитацией в агаре. выделенную культуру в виде «бляшки» или штрихом засеивают на поверхность агаровой среды в чашке Петри, рядом с полоской фильтровальной бумаги, пропитанной антидефтерийной антитоксической сывороткой(расположенной по диаметру чашки) Если культура токсигенна, то через 24-48 часов диффундирующий в пит. Среду токсин в местах, где он встречаеться с сывороткой, также диффундирующий в агар, образут линии преципитпции белого цвета.

22Микобактерии туберкулезаМикроскопия. Метод гемогенизации. Суточное кол-во мокроты выливают во флакон+ равный объем гидроксида натрия,плотно закрываю резиновой пробкой,встряхивают сильно до полной гомогенизации(10-15) мин.Макроту,утратившую вязкость центрифугируют,надосадочную жидкость сливают в дез.р-р,осадок нейтрализ. Добавлением 2-3 кап. 10%-й HCI, 30%-й уксус. к-ты. Из осадка готовят мазки и окрашивают по Цилю-Нильсону.

М. tuberculosis (палочка Коха) — тонкая, прямая или слегка изогнутая палочка, размером 1-10*0,2-0,6 мкм, со слегка закруглёнными концами (рис. 22-1). В молодых культурах палочки более длинные, а в старых склонны к ветвлению. Бактерии туберкулёза способны образовывать L-формы, сохраняющие способность к инфицированию, а также фильтрующиеся формы.Капсул не имеют, но образуют микрокапсулу. Методом Циля-Нильсена окрашиваются в ярко-красный цвет. Содержат кислотонеустойчивые гранулы (зёрна Муха), располагающиеся в цитоплазме.

Культуральные свойства возбудителя туберкулеза Туберкулёзные палочки могут расти как в аэробных, так и факультативно анаэробных условиях. Повышенное содержание СО2 (5-10%) способствует более быстрому росту. Оптимальная температура 37-38 °С; рН 7,0-7,2. Нуждаются в присутствии белков, глицерина, факторов роста (биотин, никотиновая кислота, рибофлавин и др.), ионов (Mg2+ K+, Na+ Fe2+) и др. Для выращивания бактерий туберкулеза наиболее часто применяются глицериновые, картофельные с жёлчью, яичные, полусинтетические и синтетические среды. Наиболее оптимальна среда Лёвенштайна-Йёнсена. На средах туберкулёзные палочки обычно образуют R-колонии; под влиянием антибактериальных препаратов бактерии могут диссоциировать с образованием мягких и влажных S-колоний. В жидких средах палочки туберкулеза образуют сухую морщинистую пленку (на 7-10-е сутки), поднимающуюся на края пробирки; среда остаётся прозрачной. В жидких средах выявляют корд-фактор — важный дифференциальный признак вирулентности. Наличие корд-фактора обусловливает сближение бактериальных клеток в микроколониях и их рост в виде серпантинообразных кос. На плотных средах рост палочек туберкулеза отмечают на 14-40-е сутки в виде сухого морщинистого налёта желто-, вато-кремового цвета. Зрелые колонии напоминают цветную капусту, крошковатые, плохо смачиваются водой и имеют приятный запах. Культуры плохо снимаются со среды, а при прокаливании трещат. Отличительная особенность М. tuberculosis— способность к синтезу значительного количества никотиновой кислоты (ниацина); ниациновый тест — важный метод дифференцировки микобактерий.