Произвести посев исследуемого материала из гнойного очага на МПА в чашке Петри.

Произвести посев исследуемого материала из гнойного очага на МПА в чашке Петри.

Материал, взятый петлей,наносят на пов-ть агара параллельными штрихами, чем достигается последовательное уменьшение концентрации бактерий вплоть до единичных клеток.

 

Другой способ состоит в приготовлении суспензии с малой концентрацией бактерий. Одну каплю суспензии наносят петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно втирают стерильным шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее пов-ти.

 

Посевы газоном производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей пов-ти среды.

 

10.Произвести пересев однородной изолированной колонии с МПА в чашке Петри на скошенный агар и среду Ресселя. Объяснить цель посева.

 

Среда Ресселя применяется при изучении б/х свойств энтеробактерий. Содержит питательный агар, лактозу, глюкозу и индикатор бромтимоловый синий. Приготавливают в пробирках по 6-8 мл в виде столбика со скошенной пов-ю. Цвет незасеянной среды травянисто-зеленый. Посев делают штрихом по скошенной пов-ти и уколом в глубину столбика. Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу до кислоты, вызывают изменение окраски столбика среды из первоначальной в желтую; скошенная поверхность при этом преобретает синий цвет. Лактозоположительные м/о (E/ coli) изменяют цвет скошенной части среды и столбика в желтый. М/о, образующие щелечь, изменяют цвет среды в синий. Газообразование отмечается в толще столбика среды.

 

 

11. Посев на среду Китт-Тароцци. Используется для накопления анаэробов. Среду перед посевом прогреть в кипящей водяной бане в10-20 минут, охладить. Сделать посев микробиологической петлей. Посевы заливают вазелиновым мслом и помещают в термостат. Посев в чашку Петри шпателем
Левой рукой приоткрывают крышку. Материал набирают, петлей или ув пипетку, наносят на поверхность МПА и втирают шпателем' по всей поверхности агара. При посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2-3 чашки для последовательного посева.
Посев в пробирку петлей
Полученные изолированные колонии служат для выделения чистой культуры микроба.
Осторожно приподняв крышку чашки, захватывают прокаленной и остуженной петлей одну отдельно расположенную колнию и вносят в пробирку с плотной питательной средой. Пробирку держат в наклонном положении в левой руке между большим и указательным пальцами. Правой рукой держат петлю с посевным материалом. Мизинцем, мякотью ладони правой руки вынимают пробку из пробирки, обжигают в пламени горелки ее край и вносят в нее петлю, посев производят: а) штрихами на поверхности агара;б) уколом в столбик агара.

Произвести учет результатов роста бактерий на средах Плоскирева и Эндо при

подозрении на дизентирию и колиэнтерит.

 

При дизентерии: лактозоотрицательные прозрачные бесцветные колонии.

При колиэнтерите: колонии имеют дискообразной форму, слегка выпуклые с ровными краями, малиново-красного цвета.

 

Произвести учет результатов роста потогенных стафилококков на кровяном и желточно-солевом агаре.

На желточно-солевом агаре: лецитиназная реакция, проявляющаяся в образовании вокруг колонии зоны помутнения с радужным венчиком в отраженном свете

На кровяном агаре: выпуклые, ровные непрозрачные колонии желтого или золотистого цвета.

 

ЦПД в культуре тканей

Исследуемый материал: испражнения, носоглоточный смывы. Заражают культуру клеток почек обезьян. В культуре вирус оказывает ЦПД. Идентифицируют вирус, проводя РН с типоспецифическими сыворотками и ИФА.

РН. Компоненты: вируссодержащий. материал и диагностическая сыворотка. Готовят разведения сывороток, добавляют вирусод. материал, заражают смесью культуру клеток. Пол. результат: отсутствие ЦПД вируса, бляшкообразования и изменения цвета.

ИФА: Компоненты: специфические АТ, вируссод. материал, АТ той же специфичности, конъюгат, хромогенный субстрат. Связывают специфические АТ с пластиком лунки планшета, вносят вируссод. материал, вносят АТ той же специфичности, конъюгат и субстрат. Пол. результат: изменение окраски субстрата.

32.Учут результатов ИФА Используют в качестве метки АТ ферментов, способных разлагать субстрат и приводить к образованию окрашенных продуктов(хромогена). Соединенные с ферментом АТ соединяются с гомологичными АГ. Сначала на твердой фазе адсорбируются АГ или АТ, а потом все компонентты реакции. Интенсивность окраски хромогена соответствует количеству образовавшихся комплексов АГ +АТ + фермент. АГ улавливается АТ, присоединенным к твердой фазе(пластиковые планшеты, пленки). В результате инкубации исследуемый АГ присоединяется к АТ и твердой фазе. Затем привязанный АГ выявляют с помощью меченых ферментом АТ против этого АГ-прямой вариант.При непрямом методе используются меченые ферментом антивидовые сыворотки. Количество присоединенного к твердой фазе фермента соответствует количеству АГ. Активность фермента оценивают по интенсивности окрашивания хромогена визуально или с помощью фотоэлектроколориметра.

33. Произвести учет РГА с целью определения титра вируса. Для постановки РГА готовят двукратные разведения вакцинного вируса от 1:2 до 1:4096. С этой целью во все лунки одного ряда полистероловой микропанели микротитратором разливают физиологи ческий раствор (0,05 или О,25 см3), в первую вносят в равном объеме вакцинный вирус трехкратно пипетируюти и переносят 0,05 или0,025 см3 во вторую лунку и т.д. Из последней лунки 0,05 или0,025 см3 удаляюти обезвреживают в 2%-ном растворе едкого натрия. После разведения вируса во все лунки вносят 0,7%-ную суспензию эритроцитов петуха в объеме, равном исходному объему физиологического раствора. Микропанели аккуратно встряхивают и оставляют при команатной температуре (18-20*С). Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле.

Для контроля эритроцитов на спонтанную гемагглютинацию оп ределения времени учета реакции в две лунки с физиологическим растворам (0,05 или 0,025 см3) добавляют равный объем эритроцитов. РГА оценивают положительно при оcедании эритроцитов в виде хорошо выраженного "зонтика", отрицательно - в виде "пуговки". За титр вируса принимают его наибольшее разведение, дающее четко выраженную агглютинацию в виде "зонтика". Получение нечетких ре зультатов может быть связано с изменившимся рН физиологического раствора.

34.Учет РТГА Берем 6 пробирок. последняя - контрольная (контроль эритроцитов). В каждую добавляем ИХН. Затем в каждую добавляем АГ. (диагностикум) (кроме шестой). Затем в первую добавляем сыворотку от больного и титруем. Потом на 30 мин. в термостат. Затем добавим во все эритроциты (одинаковое количество). Потом - 30 мин. термостат. Положительный результат - пуговка. Отрицательный - зонтик.

35учет ИФА. По ходу, так же, как и 32, но неточно.

Произвести посев исследуемого материала из гнойного очага на МПА в чашке Петри.

Материал, взятый петлей,наносят на пов-ть агара параллельными штрихами, чем достигается последовательное уменьшение концентрации бактерий вплоть до единичных клеток.

 

Другой способ состоит в приготовлении суспензии с малой концентрацией бактерий. Одну каплю суспензии наносят петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно втирают стерильным шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее пов-ти.

 

Посевы газоном производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей пов-ти среды.

 

10.Произвести пересев однородной изолированной колонии с МПА в чашке Петри на скошенный агар и среду Ресселя. Объяснить цель посева.

 

Среда Ресселя применяется при изучении б/х свойств энтеробактерий. Содержит питательный агар, лактозу, глюкозу и индикатор бромтимоловый синий. Приготавливают в пробирках по 6-8 мл в виде столбика со скошенной пов-ю. Цвет незасеянной среды травянисто-зеленый. Посев делают штрихом по скошенной пов-ти и уколом в глубину столбика. Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу до кислоты, вызывают изменение окраски столбика среды из первоначальной в желтую; скошенная поверхность при этом преобретает синий цвет. Лактозоположительные м/о (E/ coli) изменяют цвет скошенной части среды и столбика в желтый. М/о, образующие щелечь, изменяют цвет среды в синий. Газообразование отмечается в толще столбика среды.

 

 

11. Посев на среду Китт-Тароцци. Используется для накопления анаэробов. Среду перед посевом прогреть в кипящей водяной бане в10-20 минут, охладить. Сделать посев микробиологической петлей. Посевы заливают вазелиновым мслом и помещают в термостат. Посев в чашку Петри шпателем
Левой рукой приоткрывают крышку. Материал набирают, петлей или ув пипетку, наносят на поверхность МПА и втирают шпателем' по всей поверхности агара. При посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2-3 чашки для последовательного посева.
Посев в пробирку петлей
Полученные изолированные колонии служат для выделения чистой культуры микроба.
Осторожно приподняв крышку чашки, захватывают прокаленной и остуженной петлей одну отдельно расположенную колнию и вносят в пробирку с плотной питательной средой. Пробирку держат в наклонном положении в левой руке между большим и указательным пальцами. Правой рукой держат петлю с посевным материалом. Мизинцем, мякотью ладони правой руки вынимают пробку из пробирки, обжигают в пламени горелки ее край и вносят в нее петлю, посев производят: а) штрихами на поверхности агара;б) уколом в столбик агара.