Иммунологические методы применяемые в экспериментальных и клинических исследованиях.

Иммунологические методы, применяемые как в экспериментальных, так и в клинических исследованиях, делятся по крайней мере на 8 групп.

I. Методы определения или детекции тех или иных веществ, характеризующихся наличием уже полученных специфичных антител против них. Эти методы принято называть в международной специальной литературе методами иммуноанализа. В соответствии с применяемыми технологиями визуализации взаимодействия антитела и антигена иммуноанализ подразделяется на:

а) методы агглютинации корпускулярных антигенов (непосредственная агглютинация антигена, гемагглютинация, латексагглютинация, нефелометрия);

б) методы с использованием технологии гемолиза (тесты фиксации комплемента, торможения фиксации комплемента, метод подсчета антителообразующих клеток по Йерне);

в) методы преципитации комплексов «антиген-антитело» в гелях (методы Оухтерлони, Элека, Манчини и др.);

г) иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ, иммунофлюоресцентный анализ – наиболее высокочувствительные и наиболее употребимые в настоящее время виды иммуноанализа.

II. Методы фракционирования - физическое разделение растворимых молекул или клеток иммунной системы:

а) выделение иммуноглобулинов высаливанием солями серной кислоты;

б) методы хроматографии (высокоэффективная; аффинная и др.);

в) центрифугирование в средах с градиентами плавучей плотности (выделение мононуклеарных клеток центрифугированием на фиколл-гепаке; выделение нейтрофилов седиментацией на растворе желатина, декстрана и др.);

г) электрофорез;

д) проточная цитофлюорометрия, в том числе с использованием тетрамерных комплексов.

III. Иммуногистохимические методы (иммунофлюоресцентная микроскопия; микроскопия препаратов тканей или клеток с фиксированными антителами, меченными ферментной меткой).

IV. Методы молекулярной биологии (полимеразная цепная реакция; иммуноблоттинг: Western-блот определяет белок, Southern-блот определяет ДНК, Northern-блот определяет РНК).

V. Генетические методы: а) методы направленного мутагенеза – «нокаут» и «нокин»; б) методы изучения экспрессии генов и методы картирования и исследования конкретных мутаций (технологии микроэрреев).

VI. Методы биотехнологии - клонирования молекул, ПЦР, методы получения рекомбинантных белков, клеток (гибридомные технологии), создание линий инбредных животных, биотехнологические методы получения и оценки вакцин.

VII. Методы изучения свойств нативных клеток иммунной системы в культурах in vitro (методы биологического тестирования цитокинов; методы оценки пролиферации клеток; методы исследования факторов транскрипции и др.).

VIII. Методы исследования функций и взаимодействия клеток in vivo (радиационные химеры; сканирование меченых клеток in vivo и др.).

7. Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Инфекционная болезнь. Стадии развития. Типы инфекционных заболеваний и их отличительные черты.
Инфекция (от лат. infectio — заражение) это совокупность приспособительных (адаптационных) ре­акций макроорганизма, развивающихся в результате взаимодействия с патогенными или условно-патогенными (при определенных ситуациях) микроорганизмами. Аналогич­ный процесс, вызываемый простейшими, называется инва­зией. Инфекция относится к универсальным биологиче­ским явлениям и встречается на всех уровнях и у всех форм органической материи. Взаимодействие микро- и макроорганизмов обусловливает развитие инфекционного процесса, который проявляется по-разному: от бессим­птомного носительства до тяжелого инфекционного забо­левания, иногда со смертельным исходом.

В развитии инфекционного процесса выделяют следующие стадии:

1. проникновение микроба в макроорганизм, адгезию к чувствительным клеткам и их колонизацию;

2. нарушение гомеостаза в результате жизнедеятельности и размножения микроба;

3. формирование защитных реакций макроорганизма, направленных на нейтрализацию микроба, его токсинов и ферментов агрессии;

4.восстановление гомеостаза и приобретение макроорганизмом невосприимчивости к повторному за­ражению этим микробом, т. е. формирование иммунитета.

По какому пути пойдет развитие инфекционного процесса, зависит от 3 основных факторов:

1.свойств микроорганизма и его количества;

2.степени восприимчивости макроорганизма-хозяина;

3.факторов внешней среды и социальных факторов.

• Инфекционный процесс — комплекс взаимных приспосо­бительных реакций в ответ на внедрение и размножение патоген­ного микроорганизма в макроорганизме, направленный на вос­становление нарушенного гомеостаза и биологического равнове­сия с окружающей средой. В результате инфекционного процес­са нередко развивается инфекционная болезнь, которая предста­вляет собой новое качество инфекционного процесса. Инфекци­онная болезнь в большинстве случаев заканчивается выздоров­лением и полным освобождением макроорганизма от возбудите­ля. Иногда возникает носительство живого возбудителя на фоне качественно измененного инфекционного процесса. Отличитель­ной чертой инфекционных болезней является их заразитель­ность, т.е. больной может быть источником возбудителей для здорового макроорганизма.

В соответствии с динамикой инфекционного процесса можно выделить начальные этапы (заражение), связанные с внедрением микроорганизма в макроорганизм, период адаптации в месте про­никновения или в пограничных областях. При благоприятных ус­ловиях для возбудителя происходит его распространение за пре­делы первичного очага (колонизация). Все эти события пред­ставляют собой инкубационный период инфекцион­ной болезни.

В конце инкубационного периода происходит генерализация инфекционного процесса и его переход либо в период п р о д р о-м ы, для которого характерны неспецифические признаки, об­щие для многих инфекционных болезней, либо непосредственно в период острых проявлений, когда можно обнаружить характерные для данной инфекционной болезни симптомы.

После окончания периода острых проявлений болезни начи­нается постепенное или, наоборот, быстрое (кризисное) ее завер­шение — период реконвалесценции, выздоров­ление и период реабилитации.

Инфекционный процесс, однако, далеко не всегда проходит все присущие ему периоды и может заканчиваться выздоровле­нием на ранних этапах. Нередко клинические проявления болез­ни отсутствуют и инфекционный процесс ограничивается суб­клиническим коротким течением.

Помимо острого циклического, т.е. имеющего опре­деленные фазы или периоды развития и течения, существуют ациклические инфекционные процессы (болез-ни), например сепсис, по-видимому, единственная нозологиче­ская форма, которую вызывают различные возбудители, в том числе и условно-патогенные.

Кроме острого инфекционного процесса (болезни), выделяют хронический инфекционный процесс (бо­ле з н ь), в том числе и первично-хроническую.

Существуют и другие типы инфекционного процесса: латент­ные и медленные вирусные инфекции, персистирующие вирус­ные инфекции (например, вирусные гепатиты); оппортунистиче­ские инфекционные процессы, вызываемые условно-патогенной флорой, особенно при различных нарушениях иммунитета (пер­вичные и вторичные иммунодефицитные состояния, СПИД); но-сительство возбудителей инфекции и инвазии (бактерио-, вирусо-, паразитоносительство); смешанные инфекционные процессы (бактерии—бактерии; бактерии—вирусы; вирусы—вирусы; па-разитарно-бактериальные и паразитарно-вирусные).

Особняком стоит группа инфекционных болезней, вызывае­мых не живым возбудителем, а продуктами его жизнедеятельно­сти, находящимися вне макроорганизма в различных структурах (пищевые продукты, сырье для них). В патогенезе этих состояний нет инфекционного процесса как такового, а присутствует лишь его составная часть — процесс интоксикации, тяжесть которого определяется видом и количеством токсина или комбинацией то­ксинов. В течении таких интоксикаций нет цикличности, так как нет участия живого микроорганизма. Тем не менее эту группу па­тологических состояний относят к инфекционной патологии че­ловека или животных в связи с наличием определенного этиоло­гического агента, формированием иммунитета (антитоксического, а поэтому неполноценного), а также возможностью развития инфекционного процесса, вызванного этим же возбудителем. К этой группе можно отнести, например, ботулизм, болезни, вызы­ваемые другими представителями токсинообразующих бактерий, некоторыми видами грибов.

Важнейшим методом изучения инфекционных болезней явля­ется эпидемиологический анализ, который пресле­дует по меньшей мере 10 целей:

1) описать виды проявлений ин­фекций в популяции;

2) распознать вспышки и необычные прояв­ления болезни;

3) содействовать лабораторному распознаванию возбудителя;

4) описать проявления асимптоматического течения инфекции;

5) повысить специфичность диагностики заболевания;

6) содействовать в понимании патогенеза;

7) идентифицировать и охарактеризовать факторы, которые участвуют в передаче ин­фекционного агента и развитии заболевания;

8) разработать и оценить клинически эффективность лечения;

9) развить и оце­нить первичную, вторичную и третичную профилактику и конт роль за индивидуумом;

10) описать и оценить профилактические мероприятия, проводимые в обществе.

Основными задачами эпидемиологического анализа являют ся исследование и контроль эпидемий и вспышек инфекционных заболеваний. Специфичность и чувствительность служат осново полагающими принципами при проведении любого лабораторно го исследования.

Инфекция (от лат. infectio — «загрязнение, зараже­ние» и mficio — «загрязняю») — внедрение и размно­жение в организме болезнетворных микроорганизмов, сопровождающиеся комплексом реактивных процессов; завершается инфекционным заболеванием, бактерионо­сительством или гибелью микробов. Источник возбу­дителя инфекции заражает здоровых при соприкосно­вении, через рот (с водой и пищей), воздух (с капелька­ми слюны и слизи), членистоногих переносчиков.
Инфекция представляет собой широкое общебиоло­гическое понятие, характеризующее проникновение патогенного возбудителя (вируса, бактерии и др.) в дру­гой более высокоорганизованный растительный или животный организм и последующее их антагонистичес­кое взаимоотношение.
^ Инфекционный процесс —это ограниченное во вре­мени сложное взаимодействие биологических систем микро- (возбудителя) и макроорганизма, протекающее в определенных условиях внешней среды, проявляющее­ся на субмолекулярном, субклеточном, клеточном, тка­невом, органном и организменном уровнях и закономер­но заканчивающееся либо гибелью макроорганизма, либо его полным освобождением от возбудителя.
^ Инфекционная болезнь — это конкретная форма проявления инфекционного процесса, отражающая сте­пень его развития и имеющая характерные нозологи-
ческие признаки. Инфекционные болезни — это обшир­ная группа болезней, вызванных патогенным возбуди­телем.
^ Инфекция анаэробная — инфекционный процесс, вызываемый микроорганизмами, которые обладают спо­собностью роста в бескислородной среде (анаэробы). Ха­рактеризуется быстрым образованием газов в поражен­ных тканях (газовая гангрена), их омертвением, тяжелой интоксикацией. Развивается, как правило, в тканях, ли­шенных нормального кровоснабжения. Особые формы анаэробной инфекции — ботулизм и столбняк.
Характерные черты инфекционных болезней:
специфичность этиологического агента;
контагиозность;
цикличность течения;
формирование иммунитета;
способность к массовому (эпидемическому) рас­пространению.
Периоды инфекционного заболевания.
Взаимодействие патогенного возбудителя и восприимчивого организма происходит в течении определённого временного промежутка и характеризуется цикличностью, т.е сменой фаз развития, нарастания и убывания проявлений инфекционного процесса. Поэтому в развитии инфекционноё болезни принято различать несколько последовательных периодов: инкубационный (латентный), начальный, разгара, выздоровление.
Инкубационный период – (от момента заражения до начала заболевания), как правило, не имеет клинических проявлений, лишь при некоторых заболеваниях (сыпном тифе, кори) и у немногих больных возникают самые общие и неопределённые симптомы, на основании которых при отсутствии эпидемиологических данных заподозрить инфекционную болезнь очень сложно.
Каждому инфекционному заболеванию свойственна своя длительность инкубационного периода. Она исчисляется от нескольких часов (грипп,ПТИ), до нескольких недель, месяцев(столбняк, бешенство, вирусных гепатитах) и лет (ВИЧ – инфекция).
Начальный период (продромальный) характеризуется большим количеством разнообразных признаков, которые в совокупности составляют клинический или клинико – лабораторный симптомокомплекс, позволяющий установить предварительный или окончательный диагноз болезни.
Период разгара. Полное развитие клинической картины заболевания. Продолжительность – от нескольких дней (грипп, корь) до нескольких недель и месяцев(брюшной тиф, вирусный гепатит, бруцеллёз, ВИЧ).
Выздоровление (реконвалистенции) – начинается с момента угасания клинических симптомов.
Исход болезни:

- выздоровление
-рецидив(повтор, возврат болезни)
- хронизация (переход в хроническую форму)
- формирование бактерионосительства
- формирование иммунитета
^ Классификация инфекционных болезней.
Широко используется в практике классификация инфекци­онных
болезней, предложенная Л. В. Громашевским (1941), учитывающая
механизмы передачи возбудителя и его ло­кализацию в организме. По
этим признакам инфекционные болезни можно разделить на четыре группы:

кишечные инфекции (с фекально-оральным механиз­
мом передачи);
инфекции дыхательных путей (с аэрозольным (аспира-ционным
механизмом передачи);
кровяные, или трансмиссивные, инфекции (с трансмис­
сивным механизмом передачи с помощью переносчиков-чле­
нистоногих);
инфекции наружных покровов (с контактным механиз­
мом передачи).