Билет. 9. Культивирование вирусов в живых биологических системах.

Культивирование вирусов человека и животных проводят с целью лабораторной диагностики вирусных инфекций, для изучения вопросов патогенеза и иммунитета, получения диагностических и вакцинных препаратов. Поскольку вирусы являются абсолютными паразитами, то их культивируют или на уровне организма, или на уровне живых клеток, выращиваемых вне организма в искусственных условиях. В качестве биологических моделей для культивирования используют лабораторных и естественно-восприимчивых животных, развивающиеся куриные эмбрионы и культуры клеток.

Лабораторные животные (белые мыши, крысы, кролики, золотистые хомячки) и естественно-восприимчивые (молодняк сельскохозяйственных и непродуктивных животных, обезьяны и др. В настоящее время использование этой модели для диагностики ограничено из-за невосприимчивости животных ко многим вирусам. Следует отметить, что не все вирусы можно культивировать в организме лабораторных животных. Это зависит от чувствительности животных к вирусам. Например, вирус осповакцины человека репродуцируется в организме всех животных. Наоборот вирус оспы свиней репродуцируется только в организме этого вида животных. Факторы, влияющие на чувствительность животных к вирусам: 1.Чувствительность животных к вирусам зависит от возраста. Наиболее восприимчивы к ним молодые животные – мышата, крольчата и т.д., так как у них нет совершенной системы защиты организма. 2.На чувствительность животных к вирусам влияет и наличие неспецифических ингибиторов, которые выполняют защитную функцию организма. В организме молодых животных содержание ингибиторов мало, с возрастом их концентрация увеличивается и соответственно повышается сопротивляемость организма к вирусам. 3.Чувствительность к вирусам зависит от пола животных, наиболее чувствительны животные женского пола. Перед заражением всех животных выдерживают в карантине в течение 2–3х недель. Для культивирования вирусов используют только животных клинически здоровых, одного возраста и породы и из хозяйства, благополучного по инфекционным заболеваниям. В последние годы начали использовать для культивирования гнотобиотов (безмикробных (стерильных) животных). Метод заражения подопытных животных подбирают с учетом тропизма культивируемого вируса, например, для культивирования нейротропных вирусов, развивающихся в клетках нервной системы, животных заражают в головной мозг, для пневмотропных – интраназально или интратрахеально и т.д. Недостатки культивирования вирусов в организме животных: 1. Не все вирусы культивируются в организме лабораторных животных. 2.Лабораторные животные потенциально не свободны от различных скрытых инфекционных заболеваний. 3. Материальные затраты на кормление, содержание животных. Цели использования лабораторных животных: 1. Обнаружение и первичное выделение вируса из патматериала. 2. Накопление вирусной биомассы (биопроба). 3. Поддержание вируса в активном состоянии (пассаж).4. Титрование вирусов. 5. Получение гипериммунных сывороток. 6. Тест-объект в реакции нейтрализации.

Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах

Более совершенным методом является культивирование вирусов в куриных эмбрионах. Впервые оно применено Раусом в 1911 году на примере вируса саркомы белых мышей. Это наиболее доступный и удобный метод, как для первичного выделения вирусов, так и для последующего культивирования их в лаборатории.  Достоинства: возможность накопления вирусов в больших количествах, стерильность объекта, отсутствие скрытых вирусных инфекций, простота техники работы. Для культивирования вирусов используют живые куриные эмбрионы 5–15-дневного возраста. На размножение вирусов в них оказывает влияние температура инкубации яиц, метод заражения, возраст и количество введенного вируса. Цели использования куриных эмбрионов: 1. Обнаружение и первичное выделение вируса из патматериала. 2. Накопление вирусной биомассы (биопроба). 3. Поддержание вируса в активном состоянии (пассаж). 4. Титрование вирусов. 5. Получение эмбрион-вакцин. 6. Тест-объект в реакции нейтрализации. Способов заражения куриных эмбрионов: на хорион-аллантоисную оболочку (ХАО), аллантоисную полость, в амниотическую полость, желточный мешок, тело зародыша, кровеносные сосуды. Для культивирования можно использовать деэмбринированные яйца, когда удаляют эмбрион из яйца в период, когда к его скорлупе изнутри полностью прилегает ХАО. Если внутрь такого яйца добавить питательную среду, образуется своеобразная культура ткани, в которой может репродуцироваться вирус. Недостатки культивирования вирусов в куриных эмбрионах: 1.Куриные эмбрионы могут быть носителями других микроорганизмов (сальмонеллы, туберкулезная палочка), в том числе вирусов (лейкоза птиц, бронхит кур и др.) и противовирусных антител. 2.Не все вирусы культивируются в куриных эмбрионах.

Культивирование вирусов на культурах тканей и клеток. Культура клеток – это клетки многоклеточного организма, живущие и размножающиеся в искусственных условиях вне организма. Методика культивирования клеток особенно успешно стала развиваться после 40-х годов. Этому способствовали следующие обстоятельства: открытие антибиотиков, которые предотвращают бактериальное заражение культур клеток, открытие Эндерсом (1949) способности вирусов вызывать деструкцию клеток (цитопатический эффект), наконец, Дульбекко предложил методику трипсинизации тканей и получения однослойных культур клеток. Цели использования культур клеток: 1. Обнаружение и первичное выделение вируса из патматериала. 2. Накопление вирусной биомассы (биопроба).3. Поддержание вируса в активном состоянии (пассаж). 4. Титрование вирусов. 5. Получение культуральных вакцин. 6. Тест-объект в реакции нейтрализации.

В зависимости от техники приготовления и культивирования различают следующие типы культур клеток и тканей: 1) Культуры переживающих тканей:– растущие под слоем агара;– растущие в жидкой среде. 2)Культуры растущих тканей: – органные культуры; – однослойные культуры клеток; – культуры суспензированных клеток.

Наибольшее практическое применение получили однослойные культуры, растущие на поверхности стекла лабораторной посуды в виде монослоя клеток. Однослойные культуры клеток по числу жизнеспособных генераций в свою очередь подразделяют на: первичные, или первично-трипсинизированные, перевиваемые и полуперевиваемые.

Однослойные культуры клеток: 1)Первично-трипсинизированные клетки – клетки, полученные из органов или тканей организма, растущие в один слой. Клетки имеют диплоидный набор хромосом. Культуру клеток можно получить практически из любого органа или ткани человека, или животных (взрослого или эмбриона). Однако лучше удается получить из эмбриональных органов, так как клетки эмбрионов обладают более высокой потенцией роста. Для получения первичных клеток от здорового животного не позднее 2–3 часов после убоя берут соответствующие органы или ткани, измельчают их и обрабатывают ферментом (чаще трипсином). Трипсин разрушает межклеточное вещество, (затем трипсин удаляют при помощи цен-трифугирования) полученные отдельные клетки выращивают в питательной среде на внутренней поверхности стекла (пробирки, флакона, матраса) при 37 оС. Клетки прикрепляются к стеклу и начинают делиться. Обычно монослой формируется через 3–5 дней. При пассаже культуры получают субкультуры (от 2–5 пассажей). Недостаток первичных однослойных культур клеток: для приготовления новых культур необходимо всегда иметь органы от здоровых животных, могут содержать инфекционные контаминаты. 2)Перевиваемые культуры клеток – это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. Получают перевиваемые клетки из здоровых тканей, так и из опухолевых (первичных культур). Клетки имеют гетероплоидный набор хромосом. В настоящее время получено многочисленное количество перевиваемых линий клеток животного и человеческого происхождения: Hela (из раковой опухоли шейки матки негритянки по имени Елена), Hep (из карциномы гортани человека), KB (из раковой опухоли полости рта), ППТ (перевиваемая почка теленка), ППО (перевиваемая почка овцы), L (мышиные фибробласты) и другие.

Достоинства перевиваемых клеток :–приготовление значительно проще, т.е. лаборатория не зависит от ис-точников тканей, так как клетки пересеваются бесконечно; – выдерживают большие концентрации антибиотиков; – поддерживаются в стандартном состоянии; – эти культуры заранее можно проверить на наличие латентных вирусов и микрофлоры; – большинство перевиваемых клеток обладает более широким спектром чувствительности к вирусам. Недостатки перевиваемых клеток: – обладают свойством безграничного роста, как опухолевые клетки; – быстро наступают деструктивные изменения; – может происходить снижение или утрата чувствительности к вирусам. . Однако злокачественный характер клеток и соматические мутации, претерпеваемые нормальными клетками в процессе многочисленных генераций, ограничивают использование этого вида культур, в частности невозможно их применение в производстве вирусных вакцин. 3)Диплоидные культуры клеток – это морфологически однородная популяция клеток, стабилизированная в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни, сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной ткани, свободная от контаминантов. Диплоидные культуры клеток, так же, как и перевиваемые, получают из первичных культур клеток из различных тканей эмбриона человека (легкие, почки, кожно-мышечная ткань, сердце и др.) и животных (почка эмбриона КРС, свиней, почка хомяка и др.). В отличие от перевиваемых, имеют ограниченные возможности пассирования. Максимальное число пассажей 50±10, затем количество делящихся клеток резко уменьшается, и они гибнут. Однако, такие культуры живут длительно без смены питательной среды и имеют диплоидный набор хромосом. 3)Культуры суспензированных клеток растут и размножаются во взвешенном состоянии (на синтетических носителях) при постоянном интенсивном перемешивании среды. Они могут быть использованы для накопления большого количества вирусов, что используется для массового производства биопрепаратов. Некоторые вирусы лучше размножаются в органных культурах, которые представляют собой кусочки органов животного или человека, выращиваемых вне организма и сохранивших свойственную данному органу структуру.

Питательные среды для культивирования клеток. Различают естественные и искусственные (синтетические и полусинтети-ческие) питательные среды.

Естественные среды состоят из смеси солевого раствора (Хенкса, Эрла), сыворотки крови (животного или человека), тканевого (эмбрионального) экстракта (эмбрионов кур, коров, человека), коровьей амниотической жидкости и т.д. Количество каждого компонента в разных средах варьирует. Используют эти среды редко. В настоящее время применяют в основном искусственные питательные среды. К полусинтетическим питательным средам относят ферментативные гидролизаты различных белковых продуктов: чаще используют 5 %-ный раствор гидролизата лактальбумина, 5 %-ный раствор гемогидролизата. Из синтетических сред наиболее широкое применение нашли среда Игла и 199. В состав среды 199 входит 199 компонентов: 20 аминокислот, 17 витаминов, НК, липиды, минеральные соли, и другие. В состав среды Игла входят те же компоненты, в других соотношениях.

Во все питательные среды добавляют индикатор феноловый красный для определения концентрации водородных ионов (рН). При снижении рН среда желтеет, что позволяет определить ее закисление продуктами метаболизма клеток. Исходный цвет среды красный. Для уничтожения микрофлоры перед использованием в среды добавляют антибиотики: пенициллин и стрептомицин по 100 ЕД на 1мл. Для подавления плесени – нистатин по 100 мкг на 1 мл среды.

Все питательные среды делят на две группы: –                    ростовые, обеспечивающие жизнь и размножение клеток. Они содержат 2–10 % сыворотки крови, применяются в первые дни культивирования клеток; –поддерживающие, обеспечивающие жизнедеятельность клеток, но не размножение их. Они не содержат сыворотки крови, используются обычно после заражения культуры клеток вирусами.

О репродукции вирусов в культуре клеток, зараженных вируссодержащим материалом, можно судить на основании следующих феноменов: 1)ЦПД — патологические изменения морфологии клеток, вплоть до их гибели, возникающие в результате репродукции вирусов, и наблюдаемые под микроскопом. Проявления ЦПД: в одних случаях быстро вакуолизируется цитоплазма, разрушаются митохондрии, округляются и гибнут клетки, а в других — формируются гигантские многоядерные клетки (так называемые симпласты) или наблюдается явление клеточной пролиферации, которое в итоге заканчивается деструкцией клеток. ЦПД можно испльзовать не только для индикации вирусов, но и для их ориентировочной идентификации в культуре клеток. 2)Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по внутриклеточным включениям, которые образуются в ядре или цитоплазме зараженных клеток. Часто включения представляют собой скопления вирусных частиц или отдельных компонентов вирусов, иногда могут содержать клеточный материал. Выявляют включения с помощью светового или люминесцентного микроскопа после окрашивания зараженных клеток соответственно анилиновыми красителями или флюорохромами. Включения могут отличаться по, форме и численности. Характерные цитоплазматические включения формируются в клетках, инфицированных вирусом натуральной оспы (тельца Гварниери), бешенства (тельца Бабеша—Негри), а внутриядерные включения — при заражении аденовирусами или вирусами герпеса. 3)«Бляшки», или «негативные колонии», —ограниченные участки разрушенных вирусами клеток в сплошном монослое культур клеток. Они видны невооруженным глазом в виде светлых пятен на фоне окрашенного монослоя живых клеток. Добавление агара в питательную среду ограничивает распространение вирусов по всему монослою после выхода их из разрушенной клетки и обеспечивает взаимодействие вирусов только с соседними клетками. Каждая «бляшка» образуется потомством одного вириона. Подсчитав количество «бляшек», можно определить концентрацию вирусов в исследуемом материале. Кроме того «бляшки» разных групп вирусов отличаются по размеру, форме, срокам появления. Поэтому метод «бляшек» используют для дифференциации вирусов, а также для селекции штаммов и получения чистых линий вирусов. 4)В основе реакции гемадсорбции - способность культур клеток, инфицированных вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты. Целый ряд вирусов (гриппа, парагриппа и др.) обладают гемадсорбирующими свойствами, что позволяет использовать реакцию гемадсорбции для индикации этих вирусов даже при отсутствии выраженного ЦПД в культуре клеток. Механизмы реакции гемадсорбции и гемагглютинации сходны. Поэтому для обнаружения репродукции некоторых вирусов в культуре клеток можно использовать реакцию гемагглютинации с культуральной жидкостью, т. е. с питательной средой, содержащей размножившиеся вирусы. 5)О репродукции вирусов в культуре клеток можно также судить по так называемой «цветной» реакции. Она регистрируется по изменению цвета индикатора, находящегося в питательной среде для культур клеток. Если вирусы не размножаются в культуре клеток, то живые клетки в процессе своего метаболизма выделяют кислые продукты, изменяющие рН среды и, соответственно, цвета индикатора. При репродукции вирусов нормальный метаболизм клеток нарушается (клетки гибнут), и среда сохраняет первоначальный цвет индикатора.

12. Получение и применение стимуляторов. Иммуномодуляторы, адаптогены.Иммунотерапия позволяет устранить симптомы первичного иммунодефицита и восстановить иммунный статус в случае вторичного иммунодефицита.Действующим началом в ИБП являются или антигены, полученные тем или иным способом, или антитела, или микробные клетки и их дериваты, или биологически ак­тивные вещества типа иммуноцитокинов, иммунокомпетентные клетки и другие им-мунореагенты. Кроме действующего начала, ИБП могут, в зависимости от их природы и характера, включать стабилизаторы, адъ-юванты, консерванты и другие субстанции, улучшающие качество препарата (например, витамины, адаптогены).В настоящее время выделяют 5 групп имму­нобиологических препаратов (А. А. Воробьев):первая группа — ИБП, получаемые из жи­вых или убитых микробов (бактерий, вирусов, грибов) или микробных продуктов и исполь­зуемые для специфической профилактики или терапии. К ним относятся живые и инак-тивированные корпускулярные вакцины, суб­клеточные вакцины из микробных продуктов, анатоксины, бактериофаги, пробиотики;вторая группа — ИБП на основе специфи­ческих антител. К ним относятся иммуногло­булины, иммунные сыворотки, иммуноток-сины, антитела-ферменты (абзимы), рецеп-торные антитела, мини-антитела;третья группа — иммуномодуляторы для иммунокоррекции, лечения и профилактики инфекционных и неинфекционных болезней, иммунодефицитов. Сюда относятся экзоген­ные иммуномодуляторы (адъюванты, некото­рые антибиотики, антиметаболиты, гормоны) и эндогенные иммуномодуляторы (интерлейкины, интерфероны, пептиды тимуса, миело-пептиды и др.);четвертая группа — адаптогены — сложные химические вещества растительного, живот­ного или иного происхождения, обладающие широким спектром биологической активнос­ти, в том числе действием на иммунную сис­тему. К ним относятся, например, экстракты женьшеня, элеутерококка и других растений, тканевые лизаты, различные биологически активные пищевые добавки (липиды, полиса­хариды, витамины, микроэлементы и другие микронутриенты);пятая группа — диагностические препараты и системы для специфической и неспецифичес­кой диагностики инфекционных и неинфек­ционных болезней, с помощью которых можно обнаруживать антигены, антитела, ферменты, продукты метаболизма, биологически актив­ные пептиды, чужеродные клетки и т. д.Изобретение включает способ получения внеклеточного экзополимера, продуцируемого путем культивирования отобранных штаммов бактерий Bifidobacterium, обладающих иммуномодуляторными свойствами. Способ относится к этому экзополимеру и фармацевтическим веществам, содержащим указанный экзополимер в качестве основного активного агента.
Экзополимерпродуцируется при культивировании отобранных селекцией штаммов недавно выделенного вида Bifidobacteriuminfantislongum грамположительной бактерии
Бактериальный штамм IBS Bifidobacteriuminfantislongum культивируют в анаэробных условиях в подходяшей среде и после удаления микроорганизмов из культуральной среды продуцированный ими экзополимер выделяют и осаждают путем добавления органического растворителя. Полученный путем осаждения продукт лиофилизируют.
Микроорганизмы удаляют из культуральной среды центрифугированием и экзополимер выделяют, например, ультрафильтрацией на калиброванной пористой мембране. Изолированный таким образом продукт затем концентрируют, подвергают диализу, осаждают добавлением органического растворителя, предпочтительно этанола, и наконецлиофилизируют. 18. Вирус чумы плотоядных (собак), его хар-ка, ос-ти, культивирование, лабораторные методы диагностики болезни, иммунитет и средства специфической профилактики.ЧУМА ПЛОТОЯДНЫХ – высококонтагиозная остропротекающая болезнь плотоядных (пушных зверей, собак и др.) всех возрастов, чаще щенков. Источник инфекции – больные и вирусоносители. Путь передачи – аэрогенный, алиментарный, контактный. Переносчики – грызуны, птицы, человек.ВИРУС: Парамиксовирусы, РНК , односпиральная линейная минус-нитевая; форма сферическая или нитевидная 150 и более нм, спиральный тип симметрии наличие суперкапсидной оболочки. Вирус может сохранаться в будках, вальерахКУЛЬТИВИРУЕТСЯ: на хорьках 3-6 мес, на щенках 6-12 мес, на культурах клеток.ПАТОГЕНЕЗ: алиментарный путь→ слизистые оболочки→кровь→лимфоидная система→ЛУ, миндалины→репродукция в них→кровь→по всему организм с кровью→поражает кишечник, легкие, головной мозг.РЕПРОДУКЦИЯ – только в цитоплазме: Адсорбция вируса на клетке→ Проникновение вируса в клетку→ Депротеинизация → Синтез и-РНК (транскрипция)→ Синтез белков и ферментов РНК-репликаз (трансляция) → Синтез комплементарной родительской плюс-нити РНК (стадия репликации) → Образование двуспиральной реплика-тивной формы РНК (стадия репликации) →Синтез минус-нитей нового вирусного потомства (стадия репликации) →Сборка вириона→ Выход вируса из клетки КЛИНИКА - 4 ФОРМЫ ТЕЧЕНИЯ: 1. кишечная – рвота, запоры, диареи, обезвоживание, судороги, 2. лёгочная – ринит, трахеит, бронхит, пневмония.3. нервная – угнетение, возбуждение, судороги, припадки.4 – кожная - пустулёзная сыпь на бесшерстных участках кожи.ИММУНИТЕТ: у переболевших практически пожизненный иммунитет. После переболевания вирусоносительво 2-3 месяца.ПАТАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ: Катарально-геморрагическое воспаление ЖКТ, лёгких, ателектазы, очаги некроза в ЦНС.ДИАГНОСТИКА: пат.материал- От больных смывы носовые, глазные, кровь на вирусовыделение и парные сыворотки, фекалии. От трупов – трахея, лёгкие, паренхиматозные органы, головной мозг, мочевой пузырь, лимфоузлы.Обнаружение вируса: ПЦР,ИФА,РГА. Ретроспективная: РСКПРОФИЛАКТИКА: моновалентные и ассоциированные вакцины.

9 билет. 12. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ. МЕТОДЫ ИНДИКАЦИИ ВИРУСОВ. В большинстве случаев концентрация вируса в клиническом материале недостаточна для прямого обнаружения вируса или антигена, и тогда приходится прибегать к выделению вируса на чувствительных клетках и организмах с последующей его идентификацией.

Это трудоемкий процесс, требующий продолжительного времени. Вирусы могут быть выделены путем заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур клеток и идентифицированы с помощью серологических реакций.

1этап. Заражение монослоя клеток вируссодержащим материалом.В пробирки или флаконы с монослоем клеток вносят небольшое количествосуспензии и выдерживают 80–90 мин (для адсорбции и проникновения вируса вклетки), затем добавляют поддерживающую питательную среду и инкубируют.Происходит репродукция вируса в клетках. Пораженные вирусом клеткипогибают, разрушаются, вирусы выходят в культуральную жидкость, заражаютновые клетки.

2этап. Индикация (обнаружение) вируса в культуре клеток:

а)ЦПД (ЦПЭ) цитопатическое действие (эффект). ЦПД –видимые под микроскопом морфологическиеизменения клеток, возникающие в результате репродукции вирусов. Оно устанавливается под малым увеличением светового микроскопа. Формы ЦПД разнообразны – от едва заметных изменений в цитоплазме до полного распадаклеток на фрагменты. Так, при репродукции парамиксовирусов, герпесвирусов наблюдается слияние клеток с образованием синцития, при репродукции энтеро-, реовирусов – сморщивание и деструкция клеток, а аденовирусов – агрегация клеток и т.д.

Таким образом, ЦПД разделили на 3 формы:

– Фрагментация – разрушение клеток с переходом в культуральную жидкость.

– Округление – потеря клетками способности прикрепляться к стеклу, вследствие чего клетки, обычно распластанные по стеклу, принимают шарообразную форму, отделяются от стекла и свободно плавают в культуральной жидкости, где погибают (энтеровирусы, аденовирусы и др.).

– Симпластообразование – растворение клеточных оболочек, вследствие чего цитоплазмы соседних клеток сливаются, образуя одно целое, в котором располагаются ядра клеток. Такие образования называют симпластами или синтицием. Образование симпластов вызывают многие вирусы: парамиксовирусы, ретровирусы, вирусы герпеса и др.

Для вирусов, обладающих онкогенными свойствами, выделяют 4 форму ЦПД – неопластическая трансформация.

Однако, не все вирусы способны вызывать ЦПД. Существует ряд вирусов, не обладающих цитопатогенными свойствами (вирус бешенства, вирусной диареи, классической чумы свиней и др.), либо приобретающих данное свойство в результате длительного пассирования на культурах клеток.

г) Вирусы, обладающие гемадсорбирующими свойствами можно обнаружить в реакции гемадсорбцией (РГАд). Гемадсорбция – это способность культур клеток, инфицированных вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты определенных видов животных и птиц. Из флаконаили пробирки сливают питательную среду и добавляют 2–3 капли 2,5%-нойсуспензии эритроцитов. При наличии гемадсорбирующего вируса определяется скопление эритроцитов в определенных зонах инфицированных клеток.

д) Бляшкообразование – способность пораженных вирусом клеток образовывать ограниченные участки, состоящие из дегенеративных клеток под агаровым покрытием. Они видны как белесые участки на фоне прижизненно окрашенных нейтральным красным клеток. Одна бляшка соответствует потомству одного вириона.

г) Цветная проба – способность инфицированной вирусом культуры сохранять первоначальный цвет (красный). Не пораженные вирусом клетки в процессе своего метаболизма выделяют кислые продукты, что приводит к изменению рН и, соответственно, изменению цвета индикатора фенолового красного на желтый цвет. Красный цвет указывает на гибель клеток и наличие вирусов в культуре.

д) Интерференция – способность некоторых вирусов изменять или снижать активность других вирусов. Так, например, вирусы, не обладающие цитопатическим или гемадсорбирующим действием, способны снижать биологическую активность других вирусов (вирус классической чумы свиней снижает активность вируса ящура).

16. Молекулярные аспекты биоинженерии. Генетическая трансформация.Биотехнология - это наука, которая на основе применения знаний в области микробиологии, биохимии, генетики, генной инженерии, иммунологии, химической технологии, приборо- и машиностроения использует биологические объекты (микроорганизмы, клетки тканей животных и растений) или молекулы (нуклеиновые кислоты, белки, ферменты, углеводы и др.) для промышленного производства полезных для человека и животных веществ и продуктов.Генети́ческаятрансформа́ция — изменение наследственных свойств клетки в результате внесения в нее генетической информации при помощи чужеродной изолированной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Трансформация приводит к появлению у трансформированной клетки (трансформанта) и ее потомства новых признаков, характерных для объекта — источника ДНК.

25.Кишечные инфекции. Рота- корона- парвовирусные энтериты. Ротавирус (Реовирус, род Rotavirus, РНК, двуспиральная, фрагментированная; в цитоплазме) остро протекающая болезнь телят, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, диареей и дегидратацией.Культивирование: первично трипсинизиро-ванные культуры клеток, ЦПД через различное число пассажей.Вирус устойчив. Губительно воздействуют на вирус хлор, диоксид хлора, монохлор-амин, а также 10%-ный раствор формалина, 5%-ный раствор лизола при экспозиции 2 ч. Чаще болеют телята 2...3-дневного. Диагностика: ИФА, метод моноклональных антител в ИФА, РДП, РТГА, РИФ, РН, РСК, радиоиммунологический метод возможно также при помощи электронной и иммуноэлектронной микроскопии со специфической сывороткой и другими методами.Для экспресс-диагностики используют реакцию латекс-агглютинации, РНГ или РТ.Иммунитет, специфическая профилактика. АТ образ-ся в 1 день, спад 3 день. Также АТ с молозивом. Вакцины.Профилактика и меры борьбы. Предупреждение стрессов, полноценное кормление, обработка иммунной сывороткой. Новорожденным выпаивают вакцину.Дезинфекция

Коронавирус(коронавирус собак ,коронавирус кошек , в. трансмиссивного гастроэнтерита свиней , бычий коронавирус , бычий торовирус , торовирус лошадей, торовирус свиней) . сем Coronaviridae, род Coronavirus. В цитоплазме РНК.чувствительны к эфиру и детергентам,УФ, температуре свыше 56⁰С, большинству дезинфектантов.Культивирование. культурам клеток почек зеленых мартышек, клеткам Vero, органным культурам, лабораторным животным (мышам-сосункам).Основной путь передачи заболеваний – воздушно-капельный.Иммунитет при заболеваниях гуморальный, типоспецифический. Образуются вируснейтрализующие АТ, которые обеспечивают невосприимчивость к повторному заражению данным сероваром. Обычно инфекция длится не более 1 недели.Лабораторная диагностика. Так как вирус плохо культивируется на культурах клеток, то вирусологический метод используют редко. В качестве экспресс-метода применяют РИФ, материалом для которого является отделяемое носоглотки или мазки-отпечатки слизистой носа. Основной метод диагностики – серологический, при этом в сыворотке больного обнаруживают АТ к вирусу в РСК, РПГА, РТГА, ИФА в реакции с парными сыворотками. Используют метод парных сывороток.Специфическая профилактика не проводится, лечение симптоматическое.Парвовирусные энтериты.(в. Алеутской болезни норок ,бычий парвовирус, парвовирус собак (вирусный энтерит) , парвовирус кошек , парвовирус свиней, в. панлейкопении кошек, в. энтерита норок, аденоассоциированные вирусы (птиц, КРС, собак, лошадей, овец), репродуци руются в присутствии вируса-помощника - аденовируса .