Определение количества мочевины в сыворотке крови диацетилмоноооксимовым методом

Количественное определение холестерола липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови человека

В связи с запретом использования биологических жидкостей (цельная человеческая кровь, нативная плазма, сыворотка) при проведении лабораторной работы используется имитатор сыворотки крови.

При определении количества холестерола липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови из набора экспресс-метода Vital используются рабочий реагент и калибратор.

В качестве имитатора негемолизированной сыворотки крови используется имитатор, разработанный для работы «ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРОЛА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ МЕТОДОМ».

В связи с тем, что этот имитатор сыворотки крови, используемый в опытной пробе не представляется возможности центрифугировать, для проведения работы предлагается условный центрифугат – имитатор сыворотки крови разведенный в соотношении 1:4,5. Причем стандартный раствор используется разведенным в соотношении 1:4. Осаждающий реагент из набора не используется..

При проведении соответствующих измерений оптической плотности опытной и стандартной пробы против контроля (колориметрирование в зеленом светофильтре с длиной волны 490-500 нм): (см. Рабочая тетрадь по биологической химии для студентов 2 курса медицинского фаультета специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия») получены следующие экстинкции:

Оптическая плотность опытной пробы -      Е_0п =0, 152

Оптическая плотность стандартной пробы - Е_ст=0,163 

Концентрация холестерола ЛПВП (α-холестерола)  рассчитывалась по формуле:

С = Ео/Ест × 1,29 (ммоль/л) = 0,152:0,163х1,29= 1,2 ммоль/л

Холестериновый индекс атерогенности (ХИА) с учетом вычисленного в предыдущей работе значения общего холестерола = 4,32 ммоль/л содержания холл составил:

ХИА = (общий холестерол – α-холестерол) / α-холестерол = (4,32-1,2):1,2=2,6, величина холестеринового индекса атерогенности находится в пределах нормы (≤3,0.)

Расчет необходимого количества наборов Vital для учебного процесса:

Лабораторная работа по указанной теме проходит в 19-ти группах медицинского факультета (специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия»). 1 опыт выполняется парой студентов. В группах в среднем 12-14 студентов (6-7 пар)(а также специальности «Фармация» - 2группы - 12 пар, Институт биологии, экологии и агротехнологий – 4 группы – 20 пар;) следовательно:

19 х 7 =133 пары, т.е. в целом 133 опыта: 

19 х 7 =133 пары +12 пар + 20 пар = 165 пар, т.е. в целом 165 опытов: 

25 контрольных растворов 25 х 2мл = 50 мл рабочего реагента (выполняет 1 пара в группе)

70 стандартных растворов 70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента; 70 х 0,2 мл = 14 мл станд. раствора

 70 опытных растворов   70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента 70 х 0,2 мл = 14 мл имитатора             .                                                                                                                                                     сыворотки крови

Для поведения данной лабораторной работы в целом на курсе необходимо 330 мл рабочего реагента (500 мл с учетом потерь)

14 мл стандартного раствора (20 мл с учетом потерь)

14 мл имитатора сыворотки крови (20 мл с учетом потерь)

Потери стандартного раствора и имитатора сыворотки крови в основном связаны с использованием набора экспресс-метода Vital во время отработок лабораторных работ.

Ознакомление с действием некоторых ферментов

Курс «Фармация» 2 группы х 12 человек = 24 человека – 12 пар. Работа выполняется каждой парой.

1. Растворы альбумина, пепсина и липазы нужной концентрации готовятся накануне в колбах емкостью 100 мл согласно указанной методики (см. Рабочая тетрадь по биологической химии для студентов 2 курса медицинского факультета специализации «Фармация».) и хранятся при пониженной температуре (в холодильнике).

2. Раствор крахмала процентной концентрации 0.2%

10 мл х 12 пар = 120 мл

Используется раствор крахмала 1%, который после приготовления хоранится при пониженных температурах. Разведение до концентрации 0,2% осуществляется непосредственно перед проведением лабораторной работы.

3. Раствор Люголя (раствор йода в растворе KI) в работе идет капельно, но с учетом непредвиденных потерь готовится 100 мл раствора.

4. 1 %-й раствор NaHCO ₃

Готовятся 2-3 навески по 1г сухого вещества. Разведение осуществляется непосредственно перед лабораторной работой. В каждую группу выставляется по 100 мл вещества(с учетом потерь):

100 мл х 2 группы = 200 мл

5. Фенолфталеин – 0,5%-й спиртовый раствор

Реактив идет капельно готовится 50 мл с учетом потерь.

6. Растительное масло (свежее)

2 мл х 12 пар= 120 мл Готовится 200 мл мл с учетом потерь.

 

Определение количества мочевины в сыворотке крови диацетилмоноооксимовым методом

В связи с запретом использования биологических жидкостей (цельная человеческая кровь, нативная плазма, сыворотка) при проведении лабораторных работ используются имитаторы крови, плазмы крови и сыворотки крови.

При определении количества мочевины в сыворотке крови диацетилмоноооксимовым методом из набора экспресс-метода используются рабочий реактив и стандартный раствор мочевины (концентрация 8,33 ммоль/л), разработанный имитатор негемолизированной сыворотки крови был разбавлен в различных соотношениях, после чего был проведен ряд пробных опытов для нахождения необходимых величин. При проведении соответствующих измерений (см. Рабочая тетрадь по биологической химии для студентов 2 курса медицинского фаультета специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия») с использованием имитатора сыворотки крови в соотношении 1:1 получены следующие экстинкции при колориметрировании в зеленом светофильтре (длина волны 540 нм):

Оптическая плотность опытной пробы -       Е_0п =0,123        

Оптическая плотность стандартной пробы -  Е_ст=0,197 

Таким образом количество мочевины в сыворотке крови составляет

С= (Е_0п х С_ст): Е_ст = 0,123 х 8,33: 0,197 = 5,2 ммоль/л,

что находится в передах допустимых нормативных показателей, а именно – 2,49-8,33 ммоль /л.

При необходимости выдачи для лабораторной работы студентам имитатора сыворотки крови с пониженным содержанием мочевины имитатор негемолизированной сыворотки может быть разведен в соотношении 1: 1,5

С= (Е_0п х С_ст): Е_ст = 0,052 х 8,33: 0,197 = 2,2 ммоль/л

Что может наблюдаться при заболевания печени (цирроз, гепатиты) 

Расчет необходимого количества наборов Vital для учебного процесса:

Лабораторная работа по указанной теме проходит в 19-ти группах медицинского факультета (специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия»). 1 опыт выполняется парой студентов. В группах в среднем 12-14 студентов (6-7 пар)(а также специальности «Фармация» - 2группы - 12 пар, Институт биологии, экологии и агротехнологий – 4 группы – 20 пар;) следовательно:

19 х 7 =133 пары +12 пар + 20 пар = 165 пар, т.е. в целом 165 опытов: 

25 контрольных растворов 25 х 2мл = 50 мл рабочего реагента (выполняет 1 пара в группе)

70 стандартных растворов 70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента; 70 х 0,01 мл = 0,7 мл станд. раствора

 70 опытных растворов   70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента 70 х 0,01 мл = 0,7 мл имитатора

сыворотки крови

Для поведения данной лабораторной работы в целом на курсе необходимо 330 мл рабочего реагента (500 мл с учетом потерь)

 

Определение количества мочевой кислоты в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом

В связи с запретом использования биологических жидкостей (цельная человеческая кровь, нативная плазма, сыворотка) при проведении лабораторной работы  используется имитатор сыворотки крови.

При определении количества мочевой кислоты в сыворотке крови из набора экспресс-метода Vital используются буферный раствор и лиофилизат, из которых готовится рабочий реагент, а также калибратор. Разработанный   имитатор негемолизированной сыворотки крови был разбавлен в различных соотношениях, после чего был проведен ряд пробных опытов для нахождения количества мочевой  кислоты. При проведении соответствующих измерений (см. Рабочая тетрадь по биологической химии для студентов 2 курса медицинского фаультета специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия») с использованием имитатора сыворотки крови, разведенного физраствором в соотношении 2:1 получены следующие экстинкции при колориметрировании в зеленом светофильтре (длина волны 490 нм):

адсорбция опытной пробы – Аоп =0,070

адсорбция калибровочной пробы - Акал= 0,065

Таким образом количество мочевой кислоты в имитаторе сыворотки крови составляет:

С= Аоп /Акал× 357 (мкмоль/л) = 0,070: 0,065 х 357 = 384 мкмоль/л

357 мкмоль/л (6 мг/100 мл)– концентрация мочевой кислоты в калибраторе;

Полученная величина находится в передах допустимых нормативных показателей, если данный образец выдан как сыворотка крови мужчины

В сыворотке крови: Мужчины: 202-416 мкмоль/л (3,4-7,0 мг/100 мл),

                             Женщины: 142-339 мкмоль/л (2,4-5,7 мг/100 мл),

При необходимости выдачи для лабораторной работы студентам имитатора сыворотки крови с повышенным содержанием мочевой к-ты имитатор негемолизированной сыворотки может быть разведен в соотношении 1: 0,5

Расчет необходимого количества наборов Vital для учебного процесса:

Лабораторная работа по указанной теме проходит в 19-ти группах медицинского факультета (специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия»). 1 опыт выполняется парой студентов. В группах в среднем 12-14 студентов (6-7 пар) следовательно:

19 х 7 =133 пары, т.е. в целом 133 опыта: 

19 х 7 =133 пары +12 пар + 20 пар = 165 пар, т.е. в целом 165 опытов: 

25 контрольных растворов 25 х 2мл = 50 мл рабочего реагента (выполняет 1 пара в группе)

70 стандартных растворов 70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента; 70 х 0,05 мл = 3,5 мл станд. раствора

 70 опытных растворов   70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента 70 х 0,05мл = 3,5 мл имитатора             .                                                                                                                                                         сыворотки крови

Для поведения данной лабораторной работы в целом на курсе необходимо 330 мл рабочего реагента (500 мл с учетом потерь)

3,5 мл стандартного раствора (5 мл с учетом потерь)

3,5 мл мл имитатора сыворотки крови (5 мл с учетом потерь)

Потери стандартного раствора и имитатора сыворотки крови в основном связаны с использованием набора экспресс-метода Vital во время отработок лабораторных работ.