Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала

Перед началом работы следует ознакомиться с методическими рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики», разработанными ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.

Для проведения анализа используется плазма периферической крови. Взятие крови проводится утром натощак в пробирку с 3 % раствором ЭДТА из расчета 1:20. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают. В течение 6 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму и перенести в новую пробирку. Для этого пробирку с кровью центрифугируют 20 мин при 800-1600 g. Хранить плазму можно не более 3 сут при температуре от 2 до 8 °С и длительно – при температуре не выше минус 68 °С.

В отдельных случаях допускается использование сыворотки крови. Аналитическая чувствительность набора реагентов для данного материала сохраняется, однако клиническая чувствительность ввиду соосаждения вирусных частиц при ретракции сгустка может быть существенно снижена. Хранить сыворотку можно не более 3 сут при температуре от 2 до 8 °С и длительно – при температуре не выше минус 68 °С.

ФОРМАТ FRT

СОСТАВ

Комплект реагентов «РИБО-сорб-12» –комплект реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала– включает:

Реактив	Описание	Объем, мл	Кол-во
Лизирующий раствор	Прозрачная бесцветная жидкость[4]	5,8	4 флакона
Раствор для отмывки ВИЧ	Прозрачная бесцветная жидкость4	8,0	4 флакона
Раствор для отмывки 3	Прозрачная бесцветная жидкость	15,0	4 флакона
Раствор для отмывки 7	Прозрачная бесцветная жидкость	6,0	4 флакона
Сорбент	Суспензия белого цвета	0,4	4 пробирки
Буфер для элюции	Прозрачная бесцветная жидкость	1,2	4 пробирки

Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК/ДНК из 48 проб, включая контроли. Входит в состав формы комплектации 1.

Комплект реагентов «РИБО-преп» вариант 50 – комплект реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала – включает:

Реактив	Описание	Объем, мл	Кол-во
Раствор для лизиса	Прозрачная жидкость голубого цвета4	15	1 флакон
Раствор для преципитации	Прозрачная бесцветная жидкость	20	1 флакон
Раствор для отмывки 3	Прозрачная бесцветная жидкость	25	1 флакон
Раствор для отмывки 4	Прозрачная бесцветная жидкость	10	1 флакон
РНК-буфер	Прозрачная бесцветная жидкость	1,2	4 пробирки

Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК/ДНК из 50 проб, включая контроли. Входит в состав формы комплектации 2.

Комплект реагентов «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 –комплект реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала – включает:

Реактив	Описание	Объем, мл	Кол - во
Лизирующий раствор МАГНО-сорб	Прозрачная бесцветная жидкость[5]	70	4 флакона
Компонент А	Прозрачная бесцветная жидкость	0,6	4 пробирки
Раствор для отмывки 5	Прозрачная бесцветная жидкость5	60	4 флакона
Раствор для отмывки 6	Прозрачная бесцветная жидкость	20	4 флакона
Раствор для отмывки 7	Прозрачная бесцветная жидкость	6,0	4 флакона
Магнетизированная силика	Суспензия черного цвета	0,9	4 пробирки
Буфер для элюции	Прозрачная бесцветная жидкость	1,2	12 пробирок

Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК/ДНК из 100 проб объемом 1000 мкл, включая контроли. Входит в состав формы комплектации 4.

Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT –комплект реагентов для проведения реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» – включает:

Реактив		Описание	Объем, мл	Кол-во

DTT лиофилизированный

Порошок белого цвета --- 4 пробирки

ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT ВИЧ

Прозрачная бесцветная жидкость 0,3 4 пробирки

ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT

Прозрачная бесцветная жидкость 0,2 4 пробирки

Полимераза (TaqF)

Прозрачная бесцветная жидкость 0,02 4 пробирки

ТМ-Ревертаза (MMlv)

Прозрачная бесцветная жидкость 0,01 4 пробирки

ДНК-калибраторы

КВ1 ВИЧ Прозрачная бесцветная жидкость 0,1 4 пробирки КВ2 ВИЧ Прозрачная бесцветная жидкость 0,1 4 пробирки

Буфер для элюции

Прозрачная бесцветная жидкость 1,2 2 пробирки

Комплект реагентов рассчитан на проведение 80 реакций амплификации, включая контроли и калибраторы. Входит в состав форм комплектации 1, 2, 5 и 6 (в количестве 1 шт.) и формы 4 (в количестве 2 шт.).

К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции:

Реактив	Описание	Объем, мл	Кол-во
ОКО	Прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета	1,2	4 пробирки
ПК O -1-ВИЧ	Прозрачная бесцветная жидкость	0,06	4 пробирки
ПК O -2- ВИЧ	Прозрачная бесцветная жидкость	0,06	4 пробирки
BKO ВИЧ- M - FRT	Прозрачная бесцветная жидкость	0,28	4 пробирки

Комплект реагентов «Комплект для калибровки HIV - Q» включает:

Реактив	Описание	Объем, мл	Кол-во
Калибратор HIV - Q	Порошок желтого цвета	---	1 пробирка
Растворитель Q	Прозрачная бесцветная жидкость	1,2	3 пробирки

Комплект реагентов рассчитан на проведение 1 калибровки. Входит в состав формы комплектации 5.

К набору реагентов прилагается на цифровом носителе или находится на официальном сайте Изготовителя программное обеспечение AmpliSens Soft Monitor FRT (в формате Microsoft^® Excel) для автоматической обработки результатов.

ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ

ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:

- Экстракция РНК из исследуемых образцов.

- Проведение реакции обратной транскрипции и амплификации с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».

- Анализ и интерпретация результатов.