Архитектура электронного правительства: Единая архитектура – это методологический подход при создании системы управления государства, который строится...
Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
Топ:
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Характеристика АТП и сварочно-жестяницкого участка: Транспорт в настоящее время является одной из важнейших отраслей народного хозяйства...
Интересное:
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Распространение рака на другие отдаленные от желудка органы: Характерных симптомов рака желудка не существует. Выраженные симптомы появляются, когда опухоль...
Подходы к решению темы фильма: Существует три основных типа исторического фильма, имеющих между собой много общего...
Дисциплины:
2019-10-30 | 99 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Этот вид исследования представляет собой упрощенный подход к проведению второго компонента исследования по мониторингу приобретенной резистентностиВИЧ к АРВ препаратам среди пациентов, получающих АРТ первой линии. Это информация может быть собрана при проведении когортных исследований, а в некоторых странах стандартным подходом является проведение анализа на резистентность ВИЧ для всех ВИЧ-инфицированных перед началом АРТ. Наименее затратным и более соответствующим текущим потребностям в Российской Федерации является альтернативный вариант – проведение кросс-секционного выборочного исследования среди пациентов, впервые начинающих АРТ.
Цель: оценка эффективности программы лечения ВИЧ-инфекции на популяционном уровне и оценка распространенности резистентности у пациентов до начала АРТ первой линии.
Задачи: Определить долю пациентов, имеющих резистентность перед началом АРТ первой линии. Определить структуру выявленных мутаций резистентности ВИЧ. Дополнительной задачей является определение распространенности различных типов и субтипов ВИЧ среди инфицированных ВИЧ, получающих терапию.
Целевая группа: пациенты, нуждающиеся в АРТ и впервые начавшие получать АРТ терапию первого ряда, в том числе дети в возрасте менее 18 месяцев. Не имеет значения получали ли пациент ранее АРВ препараты с целью химиопрофилактики.
Дизайн исследования: кросс-секционное выборочное исследование с определением вирусной нагрузки, резистентности и субтипов ВИЧ до начала лечения.
Объекты проведения исследования: дозорными участками являются территориальные центры по профилактике и борьбе со СПИД, осуществляющие лечение АРВП не менее 500 пациентов с ВИЧ-инфекцией.
|
Диагностическая проба: 0.5 - 1 мл плазмы крови, забранной специально для исследования или для другой клинической цели, например определения CD4 и вирусной нагрузки. Каждый образец должен сопровождаться направлением на определение лекарственной резистентности ВИЧ (Приложение 3) и информированным согласием на участие в исследовании (Приложение 2).
Количество тестов: в рамках данного исследования: размер выборки определяется с учетом количества получающих АРТ в регионе (минимально 30-70 человек по одному ЛПО и всего 300-500 пациентов в стране). Для пациентов определяется: CD4, вирусная нагрузка и резистентность, субтип ВИЧ до начала лечения.
5. Общие принципы методов для определения лекарственной устойчивости ВИЧ на основе секвенирования
В настоящее время при исследовании на лекарственную устойчивость ВИЧ анализируются следующие гены: ген протеазы, ген обратной транскриптазы, ген интегразы и ген белка gp120, так как именно они являются основными генами – мишенями для действия основных схем антиретровирусной терапии.
Стандартная методика для выявления резистентности ВИЧ к АРВП на основе генотипирования включает следующие стадии:
· Приготовление проб – выделение РНК;
· Обратная транскрипция;
· Полимеразная цепная реакция (ПЦР);
· Автоматическое детектирование нуклеотидной последовательности (реакция секвенирования);
· Анализ с помощью программного обеспечения (получение консенсусной последовательности);
· Интерпретация полученных результатов (виртуальное фенотипирование).
Для проведения исследования по определению устойчивости ВИЧ к АРВ препаратам используется плазма крови. Для исследования требуется не менее 0,5-1 мл плазмы.
Суть реакции секвенирования сводится к проведению реакции амплификации, в состав реакционной смеси которой введены в небольшом количестве терминирующие дидезоксинуклеотидтрифосфаты ddNTP (проводится 4 реакции, каждая с определенным типом ddNTP или одна реакция, в которую вводится 4 типа ddNTP, но каждый тип имеет свою флуоресцентную метку). В ходе реакции ddNTP случайным образом обрывают синтез цепи, при этом остановка осуществляется ddNTP того типа, который комплементарен последней букве до обрыва. В результате такой реакции образуются фрагменты различной длины, последний нуклеотид в которой известен. Далее проводится электрофорез с разрешением в один нуклеотид. По последовательности фрагментов и исходя из знания терминального нуклеотида восстанавливается вся последовательность. В современном оборудовании определение последовательности проводится автоматически.
|
В соответствии с требованиями по точности во всех тест-системах на каждый анализируемый образец получается несколько электрофореграмм (от 4 до 8) с перекрывающимися последовательностями.
При помощи специального программного обеспечения осуществляется конструирование общей (консенсусной) нуклеотидной последовательности. В соответствии с требованиями ВОЗ полученный результат должен быть пересмотрен оператором.
При организации лаборатории следует учитывать, что проведение реакции секвенирования осуществляется в зоне учета результатов лаборатории, при этом последняя должна быть разделена на две подзоны:
· для проведения электрофореза;
· для проведения подготовительных этапов перед секвенированием (очистка ампликонов), постановки непосредственно реакции секвенирования и детекции результатов методом электрофореза высокого разрешения.
|
|
Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого...
История развития хранилищ для нефти: Первые склады нефти появились в XVII веке. Они представляли собой землянные ямы-амбара глубиной 4…5 м...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
Семя – орган полового размножения и расселения растений: наружи у семян имеется плотный покров – кожура...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!