Работа № 2. Микрофлора желудочно-кишечного тракта

Цель: изучить микрофлору толстого кишечника (см. теоретическую справку).

Задача:

В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, энтерококкагар, Блаурокка. Через 24 часа на всех средах наблюдался рост характерных колоний.

Самостоятельная работа

оценить результат анализа кала на дисбактериоз, сделать вывод о качественном и количественном составе микрофлоры толстого кишечника. При выявлении дисбактериоза рекомендовать препараты для нормализации кишечного микробиоценоза.

 

Результаты микробиологического исследования кала на дисбактериоз:

 

№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть)

от «_____»_________________20_____г.

Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________

возраст___24 года_____________________________________________

Диагноз______________________________________________________

Откуда направлен______________________________________________

 

Микроорганизмы	Количество микроорганизмов в 1 гр. фекалий
норма до 1 г	Норма от 1г до 60 л	норма старше 60 л	у пациента
Патогенные энтеробактерии	нет	нет	нет
E. coli с нормальной ферментативной активностью	107 - 108	107 - 108	107 - 108	103
E. coli лактозонегативные	< 105	< 105	< 105
E. coli гемолитические	нет	нет	нет	нет
Другие условно-патогенные энтеробактерии:	< 104	< 104	< 104	< 104
Неферментирующие бактерии	≤ 103	≤ 104	≤ 104
Энтерококки	105 - 107	105 - 108	106 - 107	105
Стафилококк золотистый	нет	Нет	нет
Стафилококки (сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие	≤ 104	≤ 104	≤ 104	≤ 103
Бифидобактерии	1010 -1011	109 - 1010	108 - 109	107
Лактобактерии	106 - 107	107 - 108	106 - 107	106
Лактострептококки	107 - 108	107 - 108	107 - 108	108
Грибы	≤ 103	≤ 104	≤ 104	≤ 104
Клостридии	≤ 103	≤ 105	≤ 106	≤ 105
Прочие микроорганизмы

Вывод:

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Урогенитальная микрофлора

 

Цель: изучить микрофлору влагалищного секрета по готовым препаратам-мазкам.

Самостоятельная работа: микроскопировать препараты-мазки, приготовленные из влагалищного секрета и окрашенные по Граму. Результаты внести в таблицу (см. теоретическую справку).

 

Критерии чистоты влагалища	степень чистоты влагалища
I	II	III	IV
1. Палочка Додерлейна 2. Кокки 3. Гр- палочки 4. Грибы - кандида 5. Микоплазмы 6. Простейшие 7. Клетки плоского эпителия 8. Лейкоциты

 

Вывод: _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Подпись преподавателя_______________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

Ответить на вопросы:

Виды микрофлоры:

1. Облигатная -_____________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________

2. Транзиторная -___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________

Микрофлора кожи:

Облигатная_______________________________________________________________________

Транзиторная_____________________________________________________________________

Методы санитарно-биологического исследования кожи:

1_______________________________________________________________________________

2_______________________________________________________________________________

Микрофлора желудка содержит________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Микрофлора тонкого кишечника содержит________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Облигатная часть микрофлоры толстого кишечника представлена:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________

Транзиторная часть микрофлоры толстого кишечника представлена:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________

Методика исследования фекалий на дисбактериоз_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Пробиотики- это______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________

Микрофлора уретры мужчин представлена__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Микрофлора влагалища представлена__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя _____________________________________________________

Теоретическая справка

К работе № 1

Характеристика микрофлоры кожи

Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время мытья тела человека с кожи смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается из микробов, находящихся на поверхности и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез).

На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут.

Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Неповрежденные кожные покровы для большинства микроорганизмов, в том числе и патогенных, непроходимы. При нарушении целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами.

Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды – из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.).

На поверхности кожи обнаруживаются преимущественно кокки (стафилококки, стрептококки), а также сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.

Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк – Staphylococcus epidermidis, золотистый и лимонно-желтый стафилококк.

Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумя методами:

1) посев отпечатков пальцев рук на МПА или специальные среды (например, кровяной агар, Эндо) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний;

2) посев смывов с рук при помощи тампона, смоченного в стерильном физ. растворе (8-10 мл), исследуют на ОМЧ и наличие кишечной палочки.

Определение общего микробного числа – ОМЧ. 1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем в чашку заливают 12 – 15 мл расплавленного и остуженного до 45ºС МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 – 48 часов, при температуре 37ºС. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы.

Определение кишечной палочки. Оставшееся количество смыва наливают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и помещают в термостат при температуре 43ºС. На следующие сутки высевают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи.

Среда Кесслера – содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу - Е.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке.

 

Характеристика микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ)

Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы. Но иногда через желудок проходят и патогенные микроорганизмы.

Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этой полости обнаруживаются лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, порфиромонады, превотеллы, анаэробные кокки, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.

Микрофлора толстого кишечника: в этом биотопе регистрируется самая разнообразная по составу микрофлора. Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.

Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть – аэробы.

Вся микрофлора кишечника подразделяется на:

1) облигатную (резидентную) – это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме (бифидобактерии, лактобактерии, бактероиды, энтерококки, энтеробактерии);

2) факультативную - микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний (стафилококки, стрептококки, бациллы, клостридии, клебсиеллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы, протеи, серации, атипичные кишечные палочки и др.). Некоторые представители этой микрофлоры не способны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике (флавобактерии, ацинетобактеры, отдельные виды псевдомонад). Многие из них являются сапрофитами, некоторые относятся к возбудителям оппортунистических инфекций. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.

Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника. Показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.

Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника

Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.

Исследуемый материал помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробной, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратные разведения надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высевают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов.

Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37⁰С.

Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.

Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 1 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.

Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.