Работа № 1. Биологические свойства возбудителя дифтерии и принципы лабораторной диагностики.

Занятие № 2.2.2

Дифтерия и туберкулез. Лабораторная диагностика

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить биологические свойства коринебактерий и патогенных микобактерий, принципы лабораторной диагностики дифтерии и туберкулеза. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики дифтерии и туберкулеза

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей дифтерии.

2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при дифтерии.

3. Основные клинические проявления дифтерии.

4. Характеристику биологических свойств возбудителей туберкулеза.

5. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при туберкулезе.

6. Основные клинические проявления туберкулеза.

7. Принципы лабораторной диагностики.

8. Препараты для идентификации, лечения и профилактики заболеваний.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· дифференцировать возбудителей дифтерии и туберкулеза по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и токсигенным свойст­вам;

· интерпретировать результаты серологических реакций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей дифтерии и туберкулеза.

Работа № 1. Биологические свойства возбудителя дифтерии и принципы лабораторной диагностики.

Самостоятельная работа: решить ситуационную задачу, используя демонстрационный материал.

В инфекционную больницу поступила девочка 4-х лет, посещающая детское дошкольное учреждение, с высокой температурой, жалобами на боли в горле. На слизистой зева с трудом снимающиеся серовато-белые налеты. Лечащий врач поставил диагноз «дифтерия зева», ввел немедленно 5000 МE противодифтерийной сыворотки и отправил в лабораторию материал для исследования.

1. Какой материал взят на исследования?__________________________________________

 

 

2. Какие направления и методы лабораторной диагностики могут быть использованы? Обозначьте каждый пункт исследования.

А)___________________________________________________________________________

 

Corynebacterium diphtheriaе (простой способ окраски по Леффлеру)

 

Результат:_________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

 

Corynebacterium diphtheriaе (сложный способ окраски - по Нейссеру)

Результат:__________________________________________________

___________________________________________________________

___________________________________________________________

___________________________________________________________

 

 

Б)___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Среда Клауберга (элективная среда)

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

___________________________________________________________

___________________________________________________________

 

 

В)____________________________________________________________________________

 

Дифференциация дифтерийной палочки от дифтероидов

 

Виды	Ферментация	Уреазная активность	Цистиназная активность
	глюкоза	сахароза	крахмал
Дифтерийная палочка а) gravis   б) mitis
Дифтероиды: а) ложнодифтерий- ная палочка   б) палочка ксерозы

 

Г)____________________________________________________________________________

 

Проба на токсигенность

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

 

3. Подтвердился ли клинический диагноз «дифтерия»? Почему?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

4. Правильна ли была тактика лечащего врача? Почему?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5. Какое исследование должно быть проведено для оценки уров­ня антитоксического иммунитета в коллективе? _______________________________________________________

 

Оцените результат реакции.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Механизм:

 

 

Постановка:

титры 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 КС КД

1 обследуемый

 

 

2 обследуемый

 

 

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 2. Принципиальная схема лабораторной диагно­стики дифтерии

Самостоятельная работа: разобрать особенности лабораторной диагностики дифтерии. Отметить наибо­лее информативные методы лабораторной диагностики.

 

Исследуемый материал:

1) ______

2) ______

3) ______

 

 

Работа № 3. Биологические свойства возбудителей туберкулеза и принципы лабораторной диагностики.

Самостоятельная работа: решить ситуационную задачу, используя демонстрационный материал.

К терапевту обратился мужчина 35 лет с жалобами на утомляемость, одышку, субфебрильную температуру в течение месяца, снижение аппетита, потерю веса, усиленное потоотделение. При обследовании рентгеноскопией выявлена патология органов грудной полости. Лечащий врач поставил предварительный диагноз «туберкулез».

1. Какой материал отправить на исследование?_____________________________________

 

2. Какие направления и методы лабораторной диагностики могут быть использованы? Обозначьте каждый пункт исследования.

А)___________________________________________________________________________

 

 

А) Mycobacterium tuberculosis в мазке из мокроты.

Окраска по Цилю-Нильсену.

Результат:_________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Б) микроколонии (корд-фактор) M. tuberculosis: ускоренный метод диагностики (метод Прайса). Окраска по Цилю-Нильсену.

Результат:_______________________________________________

__________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Почему проводится обогащение исследуемого материала перед исследованием?___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Б) ___________________________________________________________________________

 

 

Среда Левенштейна - Йенсена (элективная среда)

Результат:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

В)____________________________________________________________________________

 

Направление реакции:__________________________________________________________

Ингредиенты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

 

Постановка:

титры 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 КН КП

 

1 неделя

 

 

2 неделя

 

 

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4. Принципиальная схема лабораторной диагно­стики туберкулеза

Самостоятельная работа: разобрать особенности лабораторной диагностики туберкулеза. Отметить наибо­лее информативные методы лабораторной диагностики.

 

Исследуемый материал

1) _________

2) _________

3) _________

 

 

 

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

I. Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением: профилактические, диагностические, лечебные.

АД-анатоксин

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

 

Токсин Шика

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1.Вакцина БЦЖ

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

Туберкулин

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Стрептомицин

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Канамицин

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Фтивазид

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

II.Заполнить контрольные карты по предложенной нозоформе:

 

КОКЛЮШ

 

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культуральные и биохимические свойства ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Клинические симптомы_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Основные направления лабораторной диагностики_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

К работе № 1

Серодиагностика дифтерии

Антитела к С. diphtheriaе определяют в крови больных, начиная с первых дней болезни и повторно через 10-14 дней. Обязательным условием является определение специфических антител в динамике болезни в парных сыворотках. Диагностическое значение имеют результаты серологических исследований при нарастании титра антител не менее чем в 3-4 раза.

Для определения уровня дифтерийного антитоксина в сыворотке человека применяют несколько реакций:

РПГА

РПГА - двухкомпонентная реакция, предполагающая взаимодействие диагностикума эритроцитарного дифтерийного антигенного (представляет собой эритроциты с адсорбированным на них дифтерийным анатоксином) и антитоксических противодифтерийных антител, находящихся в сы­воротке крови обследуемых. При наличии в исследуемой сыворотке антитоксина образуется специфический комплекс: антитоксин + сенсибилизированные анатоксином э ритроциты. В результате формируется осадок в виде агглютината эритроцитов.

В нашей стране РПГА рекомендована в качестве основного метода для определения напряженности антитоксического иммунитета к С. diphtheriaе, а также для оценки вакцинального иммунитета.

Оценка состояния коллективного иммунитета требует более детальной характеристики, чем только установление процента серонегативных людей. Для этого следует давать развернутые по каждому титру данные в РНГА т.е. с учетом степени напряженности.

Состояние антитоксического иммунитета против дифтерии оценивается по следующим критериям: 0 — отрицательный титр антител; 1:10, 1:20 — не защищены; 1:40 — минимальный защитный титр; 1:80, 1:160 — низкие защитные титры; 1:320, 1:640 — средние защитные титры; 1:1280 — высокий защитный титр. Таким образом, процентное распределение показателей титров в каждом разведении дает качественную характеристику состояния иммунитета к дифтерии в обследованной группе. Например, выявление у 50% обследованных показателей пограничного иммунитета (титры 1:10, 1:20) свидетельствует о слабой защищенности группы, в которой с годами будет увеличиваться число лиц, не защищенных от дифтерии.

В настоящее время приняты следующие количественные критерии, характеризующие степень восприимчивости к дифтерии в зависимости от уровней антитоксических антител.

Содержание антитокси­ческих антител	Интерпретация результатов
<0,01МЕ/мл	Обследуемый восприимчив к дифтерии
0,01 МЕ/мл	минимальный уровень циркулирующих антител, обеспечивающий некоторую степень защиты
0,01-0,09 МЕ/мл	уровни циркулирующих антитоксических анти­тел, обеспечивающие некоторую степень защиты
0,1 МЕ/мл	защитный уровень циркулирующих антител
> 1,0 МЕ/мл	уровень антитоксина, обеспечивающий стойкую длительную невосприимчивость к дифтерии

ИФА

ИФА предназначен для количественного определения антибактериальных и антитоксических иммуноглобулинов М, G человека в сыворотке крови больных дифтерией, бактерионосителей и здоровых людей. Принцип ИФА основан на образовании специфического комплекса антиген-антитело, выявляемого с помощью второго антитела, меченного пероксидазой хрена. При последующем добавлении субстратной смеси развивается ферментативная реакция, регистрируемая по появлению окрашенного продукта. Интенсивность реакции учитывается с помощью иммуноферментного анализатора или визуально.

3. Определение титра антител к дифтерийному токсину в сыворотке крови человека в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток.

Метод основан на том, что метаболическая активность и рост клеток культуры ингибируется дифтерийным токсином, который, в свою очередь, может быть нейтрализован антитоксином, содержащимся в сыворотке крови. Последовательное разведение сыворотки крови человека добавляют в лунки микропланшета, в которые затем вносят дифтерийный токсин в рабочей дозе и культуру клеток. Обнаружение по окончании инкубации (t 37^оС 5-6 суток) живых клеток культуры в лунках, содержащих определенные разведения сывороток, будет указывать на соответствующий титр антител к дифтерийному токсину в тестируемых сыворотках + проба на токсигенность.

К работе № 2

К работе № 3

Серодиагностика

Для выявления специфических антител к антигенам микобактерий предложено большое количество серологических реакций: РПГА, РА, РСК.

В последние годы интенсивно разрабатываются тесты на выявление антител к МБТ в крови больного в конкурентной иммуноферментной реакции с применением стандартных концентраций антигена микобактерий и моноклональных антител, конъюгированных с ферментом - пероксидазой. Разработаны диагностические тест-системы "ИФА - туберкулез", предназначенные для выявления с помощью иммуноферментного анализа антител к МБТ и позволяющие распознавать как легочные, так и внелегочные формы туберкулеза. Тест-система "ИФА-туберкулез" может быть использована как для диагностики у отдельных больных, так и при массовых обследованиях населения. Чувствительность тест-системы при различных локализациях туберкулезного процесса составляет от 68% до 100%, специфичность - 94%.

К работе № 4

Занятие № 2.2.2

Дифтерия и туберкулез. Лабораторная диагностика

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить биологические свойства коринебактерий и патогенных микобактерий, принципы лабораторной диагностики дифтерии и туберкулеза. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики дифтерии и туберкулеза

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей дифтерии.

2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при дифтерии.

3. Основные клинические проявления дифтерии.

4. Характеристику биологических свойств возбудителей туберкулеза.

5. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при туберкулезе.

6. Основные клинические проявления туберкулеза.

7. Принципы лабораторной диагностики.

8. Препараты для идентификации, лечения и профилактики заболеваний.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· дифференцировать возбудителей дифтерии и туберкулеза по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и токсигенным свойст­вам;

· интерпретировать результаты серологических реакций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей дифтерии и туберкулеза.

Работа № 1. Биологические свойства возбудителя дифтерии и принципы лабораторной диагностики.

Самостоятельная работа: решить ситуационную задачу, используя демонстрационный материал.

В инфекционную больницу поступила девочка 4-х лет, посещающая детское дошкольное учреждение, с высокой температурой, жалобами на боли в горле. На слизистой зева с трудом снимающиеся серовато-белые налеты. Лечащий врач поставил диагноз «дифтерия зева», ввел немедленно 5000 МE противодифтерийной сыворотки и отправил в лабораторию материал для исследования.

1. Какой материал взят на исследования?__________________________________________

 

 

2. Какие направления и методы лабораторной диагностики могут быть использованы? Обозначьте каждый пункт исследования.

А)___________________________________________________________________________

 

Corynebacterium diphtheriaе (простой способ окраски по Леффлеру)

 

Результат:_________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

 

Corynebacterium diphtheriaе (сложный способ окраски - по Нейссеру)

Результат:__________________________________________________

___________________________________________________________

___________________________________________________________

___________________________________________________________

 

 

Б)___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Среда Клауберга (элективная среда)

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

___________________________________________________________

___________________________________________________________

 

 

В)____________________________________________________________________________