Определение сроков выживания микроорганизмов (тест-культур) наповерхности полимерных материалов

Для исследованийобразцы принимаются при наличии сопровождающей технической документации,содержащей данные о сроке изготовления испытуемых материалов.

Санитарно-микробиологическиеисследования полимерных материалов предваряет обязательная подготовка образцовк исследованию, заключающаяся в их очищении от постороннего загрязнения путеммытья поверхности моющими средствами под проточной водой с последующимополаскиванием дистиллированной водой и высушиванием.

При определениисроков выживания отдельных патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов (тест-культур) испытуемые образцы могутподвергаться какому-либо способу стерилизации (например, в автоклаве илиобжиганию обработанной спиртом поверхности) в режиме, не изменяющем внешнеговида материала и его структуры, также антимикробных свойств, если таковые былиприданы полимерному материалу при изготовлении.

Определениесроков выживания патогенных и санитарно-показательныхмикроорганизмов (тест-культур) проводится в три этапа:

· нанесениекультуры микроорганизмов на поверхность испытуемого материала иконтрольного образца (в качестве контроля может использоваться, например,стекло, являющееся инертным для микроорганизмов);

· отбор пробчерез определенные промежутки времени и посев на питательные среды (специфичныедля данной тест-культуры) для качественного или количественного учетамикроорганизмов, выращивание;

· учетрезультатов, статистическая обработка и интерпретация полученных данных.

Выбормикроорганизмов, в отношении которых проводится изучение влияния полимерногоматериала определяется целевым предназначением последнего. Чаще всего вкачестве тест-культур используются культуры S. aureus, E. coli, P. aeruginosa.

Количественноеопределение микроорганизмов на единице площади исследуемого образца материалаосуществляется на основании предварительного расчета исходной концентрациимикроорганизмов в единице объема заражающей взвеси.

Нанесение взвеситест-культуры микроорганизмов на поверхность полимерного материала производитсякапельным или аэрозольным методом.

Прииспользовании капельного метода на одинаковой для контрольного и опытногообразцов площади распределение капель при одинаковом объеме наносимой взвесидолжно быть максимально равномерным.

Аэрозольныйметод обязательно предполагает применение специальных герметичных камер сраспылителем и требует не только отработки исходной концентрациимикроорганизмов в единице объема заражающей суспензии, но и времени еераспыления, длительности перемешивания воздуха в камере, времени оседаниякрупных частиц аэрозоля бактериальной взвеси.

После нанесениятест-культуры и до отбора проб контрольные и опытные образцы материалов должнынаходиться в условиях, препятствующих оседанию бактерий из воздуха (например, вкамере при использовании аэрозольного метода, или в чашках Петри при капельномметоде), в одинаковых условиях температуры, освещенности и влажности.

Отбор проб можетосуществляться общепринятыми в микробиологической практике методами - методомсмывов или отпечатков. При количественном учете микроорганизмов важным являетсяполнота забора клеток с поверхности образца, с этой целью смывы и отпечаткиможно производить с одного и того же участка 3 - 4 раза(одинаковое число раз как с опытных, так иконтрольных образцов). При подсчете выросшие на плотных средах колонии, снятыес одного участка, суммируют. Многократный отбор проб с одного участка особенноважен при изучении материалов с заданными антибактериальными свойствами.

Кроме того, прииспользовании образцов полимерных материалов небольшого размера оптимальным длянаиболее полного снятия микроорганизмов с их поверхности является отмываниемерным количеством стерильного физиологического раствора при непосредственномпогружении образцов в колбы или широкие пробирки со стеклянными бусами, споследующим посевом определенных кратных объемов смывной жидкости (позволяющихпроизвести количественный учет) на плотные питательные среды.

Для достижениястатистической достоверности результатов необходимо использоватьрепрезентативное количество образцов (повторностей), как в опыте, так иконтроле.

Приколичественном определении содержания микроорганизмов подсчитываются всевыросшие на плотных питательных средах после термостатирования колонии. Дляподтверждения роста именно тест-культур, а также для изучения влиянияполимерных материалов на биологические свойства микроорганизмов,2 - 3 колонии окрашивают по Граму и проводят изучениебиологических свойств общепринятыми методами.

Сравнениеколичества колоний, выросших при посеве смывов с полимерных материалов, сколичеством колоний в контроле позволяет определить степень влияния исследуемыхобразцов на жизнеспособность тех или иных, используемых для заражения,микроорганизмов. Учитывая динамику отмирания микроорганизмов на образцах заразные периоды времени, можно получить дополнительные данные о характере этоговлияния.