Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и всэ

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО

ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ  
ПРИ РАБОТЕ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ

Подготовлено к печати:
д.б.н. Васильевым Д.А,

 к б н Меркуловым А.В.,

                           в м н Нафеевым А.А,

                           к в н Золотухиным С.Н.

 

 

Ульяновск 2006

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ, ЭПИЗООТОЛОГИИ и ВСЭ

УЛЬЯНОВСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ АКАДЕМИИ

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО

ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ

В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

                        (ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ)

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ ______________________________

       LABORATORY BIOSAFETY MANUAL

______________________________

Ульяновск 2006

ПРЕДИСЛОВИЕ

 

    К персоналу лабораторий, осуществляющих деятельность с патогенными биологическими агентами (ПБА), по определению, относятся лица, работающие с инфекционными организмами или материалами, содержащими или могущими их содержать. Некоторые из этих микроорганизмов в зависимости от обстоятельств и дозы бывают патогенными или условно патогенными. Таким образом, существенным профессиональным навыком является умение избежать инфицирования. Безопасная работа – признак высочайшей квалификации персонала, которой он должен гордиться. В защите нуждаются не только сами микробиологи, их помощники и лица, находящиеся с ними в контакте, но и материалы, поскольку возможное перекрестное заражение способно исказить результаты экспериментов.

    Данное руководство разработано группой экспертов. Оно носит практический характер, учитывает различное распространение и значимость патогенных организмов и технических особенностей, оснащения и ресурсов, уровня образования и обучения персонала. Оно содержит полезную информацию для лиц, осуществляющих разработку мероприятий по безопасности работ с патогенными биологическими агентами. В приложении 1 приведена классификация микроорганизмов по степени опасности для человека, полезная для специалистов, разрабатывающих или пересматривающих правила практической работы. Несмотря на обилие информации, данное руководство остается компактным и удобным практическим справочником.

    Весьма важным является акцент на вопросы обучения персонала. Ни боксы, ни определенные методы сами по себе не гарантируют безопасности без правильной работы сотрудников, их информированности и адекватных знаний. Безопасное оборудование может вызвать ложное чувство защищенности и беспечности, что повышает риск, если это оборудование не спроектировано и установлено соответствующим образом, отсутствует его правильное материально-техническое обслуживание и эксплуатация. Необходим строжайший самоконтроль во время работы, также как и адекватное инспектирование и надзор.

    В тоже время требуется и чувство меры. Абсолютная безопасность невозможна ни в одной области работы или жизни. Лаборатории, работа в которых налажена должным образом, не представляют собой опасности, что позволяет избежать чрезмерных предосторожностей или избыточного внимания к личной безопасности. Главным принципом биобезопасности является формирование рациональных навыков микробиологических исследований.

    

                                                                                                              Д.А.Васильев

                                                                                                            А.В.Меркулов

                                                                                                       А.А. Нафеев

                                                                                                         С.Н. Золотухин

Область применения

Методическое руководство предназначено для организаций, предприятийи иных хозяйствующих субъектов, проводящих работу с использованием микроорганизмов II-IV групп патогенности или материалом, подозрительным на их содержание, а также для учреждений, осуществляющих санитарно-эпидемиологический надзор за проведением этих работ.

 

Нормативные ссылки

В настоящем методическом руководстве использованы ссылки на следующие документы:

- Санитарные правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (СП 1.3.1285-03).

- Санитарные правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности» (СП 1.2.735-99)

- Санитарные правила «Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека 1-4 групп патогенности (опасности)» (СП 1.3.1318-03)

- Сборник санитарных и ветеринарных правил «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» (Бруцеллез, сальмонелез, кампилобактериоз, листериоз, сибирская язва, чума, лептоспироз, орнитоз, туберкулез, иерсиниозы, коксиеллез (лихорадка Ку), бешенство, туляремия, клещевой энцефалит, геморрагическая лихорадка с почечным синдромом). Москва, 1996.

Введение

Двойная цель техники лабораторной безопасности заключается в защите, как эксперимента, так и экспериментатора, но безопасность человека стоит, конечно, на первом месте.

Из того факта, что обычно используемые бактерии присутствуют в окружающей среде, как будто следует, что они безвредны для человека. Действительно, между непатогенностью и патогенностью нет резкой границы; фактически бактерии имеют широкий спектр степени вирулентности по отношению к человеку. Вчерашний сапрофит сегодня может стать паразитом, а завтра возбудителем заболевания (в качестве примеров можно назвать Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens и Bacillus cereus). Никогда нельзя забывать, что со всеми бактериями следует работать как с потенциальным источником опасности для здоровья человека.

Предотвращение заражения

Основной принцип безопасной работы и функционирования бактериологической лаборатории заключается в достаточной организации данной безопасности. При этом необходимо иметь полное представление о степени риска, существующем при работе с микроорганизмами, знать механизмы, благодаря которым могут возникать опасные ситуации, использовать приёмы и способы безопасной работы, которые позволяют уменьшить или исключить возможность этих воздействий, и быть бдительными в отношении компромиссов и вероятных ошибок.

Общие сведения

В зарубежной литературе последних лет опубликованы сведения о 3921 случае инфекций, полученных в лаборатории. Из этих данных следует, что работающие с бактериями подвержены риску заражения, но из них трудно сделать выводы о степени риска, поскольку отчеты о заражениях неполны, а число людей, подвергшихся риску, не указывается. Но возможность бактериального заражения в лабораторных условиях очевидна, и это требует соблюдения мер предосторожности при обращении с любыми бактериями независимо от того, «патогенны» они или нет.

Таблица 1

Распределении случаев заболевания по источнику
бактериальной инфекции.

Источник инфекции

Случаи

число % Выявленное заболевание 378 22,7 Аэрозоль 101 6,1 Животное или эктопаразит 149 8,9 Материал клинических проб 90 5,4 Выброшенная стеклянная посуда 34 2,0 Животные во время аутопсии (вскрытии) 56 3,4 Умышленное заражение 14 0,8 Возбудитель, при постановке опытов с ним в лаборатории 381 22,8 Другие источники 7 0,4 Неизвестные или не сообщенные 459 27,5 Всего 1669 100

 

Случая заражения, причины которых известны, составляют менее 25% от общего числа, тогда как в 75% случаев причины заражения неизвестны. В некоторых ситуациях по имеющейся информации можно предположить источник заражения только в 50% сообщённых случаев.

В следующей таблице (табл. 2) классифицированы известные несчастные случаи (происшествия), послужившие причиной зарегистрированного заболевания среди лабораторного персонала, имеющего дело с бактериями. Эти случаи разнообразны, причем среди них не отмечено какого-либо преобладания одной или нескольких инфекций. Следует помнить, что при проведении большинства бактериологических экспериментов возникают аэрозоли, которые либо оседают на поверхностях, либо непосредственно вдыхаются работающими. Отсутствие информации об источнике или причине многих лабораторных заражении часто объясняется тем, что возникновение аэрозолей остается незамеченнымМеждународный знак биологической опасности (рис. 1) употребляется для обозначения действительного или возможного присутствия биологической опасности, а также для обозначения оборудования, емкостей, комнат, материалов или экспериментальных животных, которые содержат или заражены жизнеспособными возбудителями. Плакат с этим знаком необходимо вывесить вместе с соответствующей информацией. Знак окрашен люминесцирующей оранжевой или оранжево-красной краской. К цвету фона никаких требований не предъявляется; он должен быть лишь достаточно контрастным, чтобы знак ясно выделялся. Знак должен быть заметным и практичным; он должен соответствовать по размеру тому оборудованию или материалу, к которому его прикрепляют, так чтобы его было видно отовсюду. Он указывает на действительную или возможную биологическую опасность. Рядом со знаком дается соответствующая информация о характере опасности, указывается фамилия ответственного за контроль над ней, а также меры, необходимые в случае аварии.

Таблица 2.

Известные происшествия в лабораториях,
приведшие к бактериальному заражению.

Вид происшествия	число	%
Прокол или разбрызгивание при работе с иглой и шприцем	83	22,1
Контакт с инфекционным материалом в результате проливания, разбрызгивания и т. д.	82	21,7
Повреждение осколком стекла или другим острым предметом	75	19,8
Засасывание через пипетку	67	17,7
Укус или царапина, полученые от подопытного животного или эктопаразита	41	10,8
Другие случаи	3	0,8
Не установлен	27	7,1
Всего	378	100

 

 

Личная гигиена

Еду, конфеты, жевательную резинку и напитки нельзя хранить и употреблять в лабораторных комнатах.

Курение в рабочих помещениях запрещено.

Нежелательно, чтобы работающие в лаборатории имели бороду, во-первых, потому что в бороде могут сохраняться частички с бактериями и, во-вторых, потому что маска или респиратор к чисто выбритому лицу прилегает гораздо лучше, чем к лицу с бородой.

Руки не следует подносить близко ко рту, носу, глазам, лицу и волосам, чтобы предотвратить самозаражение.

Личные вещи, такие, как пальто, шляпы, плащи, уличную обувь, зонты и кошельки, необходимо хранить вне лабораторных помещений.

После снятия защитных перчаток следует немедленно вымыть руки. Проверочные опыты показывают, что, даже когда используют перчатки, не исключено попадание на руки бактерий. Бактерии могут проникнуть через незаметные маленькие дырочки, трещины или разрывы или попасть через край перчатки, прилегающий к запястью.

Руки нужно мыть, сняв запачканную защитную одежду, перед выходом из лаборатории, перед едой иди курением и в течение дня через интервалы, определяемые. характером работы. Желательно мыть руки в дезинфицирующем растворе или погружать их в него, но при этом, конечно, не следует допускать огрубения, чрезмерного высушивания или раздражения кожи.

К работе с бактериями нельзя допускать людей со свежим или старым порезом, ссадиной, повреждением кожи или любой открытой раной, включая образовавшуюся после удаления зуба.

Работа с пипетками

Чтобы уменьшить возможность заражения, следует использовать безопасные способы применения пипеток. Насасывание раствора пипеткой было причиной бактериального заражения в лабораторных условиях более чем в 17% всех известных случаев.

Наиболее распространенный способ, при котором подвергаются опасности в работе с пипеткой – это насасывание ртом. Бактерии могут также попасть в рот, если загрязненным пальцем дотронуться до верхнего конца пипетки. Кроме того, если в пипетках нет ватных пробок, то заражение может произойти путем вдыхания аэрозолей, возникающих в процессе работы с жидкими суспензиями, даже в том случае, когда жидкость не попадает в рот. Дополнительная опасность действия аэрозолей возникает, когда жидкость из пипетки капают на рабочую поверхность, перемешивают культуру чередованием всасывания и выдувания, интенсивно выдувают культуру в чашку или выдувают последнюю каплю из пипетки.

Чтобы использование пипеток было безопасным, применяют дополнительные приспособления, предотвращающие опасность заглатывания, и стараются обращаться с ними осторожно. Существует множество приспособлений к пипеткам – от простых шаровидных груш и поршневых насасывателей до сложных конструкций, имеющих свои собственные насосы, создающие вакуум. При выборе приспособления надо иметь в виду тип операции, которую требуется выполнить, легкость выполнения, а также ее точность. Предварительно следует отработать технику использования пипеток, чтобы уменьшить возможность образования аэрозолей.

В верхнюю часть пипетки вставляют кусочки ваты и стараются избегать быстрого смешивания жидкостей путем чередования всасывания и выдувания их из пипеток. Нельзя с силой выдувать раствор из пипетки и допускать попадания пузырьков воздуха в жидкость, набираемую пипеткой. Предпочтительнее использовать пипетки, при работе с которыми не требуется выдувания последней капли. Необходимо также следить за тем, чтобы культуральный материал не капал из пипетки. Можно при работе с суспензиями, содержащими патогенные бактерии, на рабочую поверхность класть полотенце, пропитанное дезинфицирующим веществом. Жидкость из пипеток выливают таким образом, чтобы кончик пипетки находился почти над уровнем жидкости или агара в сосуде-приемнике или раствор стекал по его стенке. Нельзя вносить раствор из пипетки в сосуд каплями, падающими с высоты. Грязные пипетки помещают в емкости с дезинфицирующим раствором, полностью погружая в него.

Применение шприцев и игл

Причиной наибольшего количества из всех известных случаев бактериальных заражений в лабораторных условиях является использование игл и шприцев. Для того чтобы уменьшить вероятность неблагополучной инъекции, образования аэрозоля или проливания суспензий бактерий, лучше избегать их применения. Для введения суспензий бактерий животным через рот или нос рекомендуется пользоваться тупой иглой или канюлей на шприце и не рекомендуется применять шприц и иглу как заменитель пипетки.

Существуют следующие правила использования игл и шприцев для парентеральных инъекций.

Пользуются биологически безопасным боксом и избегают быстрых лишних движений рукой, держащей шприц.

Проверяют стеклянные шприцы на присутствие сколов и трещин, а иглы-на наличие зазубрин и проходимость. Это делают перед стерилизацией и перед употреблением.

Пользуются только шприцами с иглами и удостоверяются, что игла закреплена надежно. Используют хирургические или другие резиновые перчатки. Шприцы заполняют осторожно, чтобы в набираемом растворе было как можно меньше пузырьков воздуха и пены.

Излишки воздуха, жидкости и пузырьки удаляют, держа шприц в вертикальном положении, в ватный тампон, смоченный дезинфицирующим веществом, или в маленькую бутылочку, наполненную стерильной ватой.

Шприц не применяют для внесения инфекционной жидкости в открытый пузырек или пробирку с целью смешивания. Смешивание с помощью шприца разрешается только в том случае, если конец иглы находится ниже поверхности жидкости в пробирке.

Если раствор набирают шприцем из пробирки, то стараются не загрязнить втулку иглы, так как это может привести к попаданию инфекционного материала на пальцы.

Когда вынимают шприц и иглу из бутыли с резиновой пробкой, иглу и пробку заворачивают в ватный тампон, смоченный соответствующим дезинфектантом. Если есть опасность загрязнения дезинфектантом чувствительного к нему материала, используемого в эксперименте, применяют стерильный сухой тампон, который сразу же помещают в дезинфицирующий раствор.

Во время прививки животному руку держат сзади иглы во избежание укалывания.

Перед прививкой убеждаются в том, что животное хорошо фиксировано, и принимают меры предосторожности в случае неожиданных движений.

Место прививки перед инъекцией и особенно после нее протирают дезинфицирующим веществом.

После использования грязные стеклянные шприцы многоразового пользования с надетыми на них иглами погружают в емкость с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют. Чтобы уменьшить возможность заражения, иглы должны оставаться на шприцах до конца автоклавирования. Шприцы с надетыми на них иглами помещают в отдельный лоток, в котором нет других использованных материалов,

Иглы и шприцы одноразового пользования помещают в лоток с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют. Емкости с надписью «Шприцы и иглы» после соответствующей упаковки и разрушения содержимого можно выбрасывать в обычный контейнер для отходов. После стерилизации иглы и шприцы специально портят и разбивают, чтобы их не использовали наркоманы.

В тех случаях, когда после использования иглу нужно поместить в защитный футляр, ее берут пинцетом, чтобы уменьшить вероятность случайного укола пальца. Шприцы и иглы многоразового и одноразового пользования складывают в отдельные лотки с дезинфектантом, чтобы не возникало проблемы их сортировки. Шприцы и иглы никогда не кладут в лотки, содержащие пипетки и другую стеклянную посуду.

Вскрытие емкостей

С пробирками, содержащими бактериальные суспензии, необходимо обращаться осторожно. Такие простые операции, как удаление пробки из пробирки или перенесение культуры из одной емкости в другую, могут вызывать образование аэрозолей. Следует четко метить пробирки и штативы с пробирками, содержащими биологически опасный материал. Чтобы уменьшить проливание из разбитых пробирок, рекомендуется пользоваться безопасными подставками для пробирок вместо обычных штативов. В такой безопасной подставке каждая выемка для пробирки имеет достаточно высокие стенки, так что если пробирка разобьется, все ее содержимое останется в выемке. Аэрозоль с большим содержанием жидкости образуется при энергичном встряхивании жидких культур, тогда как при вращательном движении сосудов образование аэрозоля минимально, а получаемая суспензия достаточно гомогенна. По окончании ресуспендирования жидкой культуры следует несколько минут выждать и только затем открывать емкость; это способствует снижению образования аэрозоля.

Брызги аэрозоля могут появляться при погружении стерильной горячей петли или иглы в жидкую культуру или в косяк. Чтобы уменьшить образование аэрозолей, петле дают остыть либо на воздухе, либо при соприкосновении с внутренней стенкой емкости или поверхностью агара, где до этого заведомо не росла культура. После использования петли и иглы ее стерилизуют нагреванием на открытом пламени. В продаже имеются петли для внесения инокулята одноразового пользования, которые проще обеззараживать погружением в дезинфицирующий раствор, чем нагреванием.

При посеве штрихом на неровную поверхность агара происходит вибрация петли или иглы, что приводит к образованию аэрозоля. Как правило, этой проблемы не существует, если посев делают на гладкую поверхность агара, поэтому рекомендуется не высевать культуру в чашки с неровной поверхностью агара.

Вода, появляющаяся в чашках Петри в результате синерезиса, образует в перевернутой чашке пленку между ребром чашки и крышкой в которой могут содержаться жизнеспособные бактерии. При открывании чашки эта пленка разрывается, в результате чего возникают аэрозоли. Чашки следует открывать в боксе.

Менее вероятно высвобождение аэрозолей при открывании бутылей с завинчивающимися пробками или закрытых тампонами пробирок. Но все же это может произойти, когда во время открывания разрывается пленка между краем и прокладкой. Аэрозоли образуются при удалении ватных пробок или крышек с колб, бутылей и центрифужных стаканов сразу же после взбалтывания или центрифугирования. Опасно вынимать пробки, намокшие в результате невертикального положения колбы или центрифужного стакана. Пробки могут слегка увлажняться при центрифугировании, если в ходе его происходит незначительное вспенивание. В связи с этим все жидкие культуры с инфекционным материалом необходимо открывать в безопасном боксе, надев перчатки и лабораторную одежду с длинными рукавами.

Аэрозоль может образовываться при вскрытии запечатанной ампулы с лиофилизованной или жидкой культурой, поэтому ампулы следует вскрывать только в боксе. Собирая осколки ампулы, необходимо позаботиться о том, чтобы не порезать перчатки или руки, чтобы разбитое стекло не попало в глаза, на лицо или не осталось неубранным. После вскрытия ампулы суспензия бактерий не должна загрязняться посторонними микроорганизмами или дезинфицирующими веществами. Этого добиваются, работая в безопасном боксе в перчатках. Для того чтобы вскрыть ампулу, прежде всего делают насечку пилкой около шейки ампулы. Саму ампулу оборачивают ватой, пропитанной дезинфицирующим веществом, и вскрывают надломом в месте насечки, предварительно убедившись, что держат ее вертикально. Другим способом в месте насечки делают трещину, прикладывая к нему накаленную проволоку или стеклянную палочку, затем оборачивают ампулу пропитанной в дезинфицирующем веществе ватой и открывают ее надломом. Вату и верхушку ампулы немедленно бросают в дезинфицирующий раствор. Содержимое ампулы растворяют путем медленного добавления жидкости, стараясь не допускать образования аэрозоля. Раствор перемешивают, следя за тем, чтобы не было пузырьков, и переносят в приготовленную емкость.

Для удобства открывания выпускаются ампулы с предварительно нанесенной насечкой, однако такие ампулы менее надежны: они могут разбиваться во время работы с ними или при хранении. Ампулы с жидкими культурами вскрывают аналогичным образом.

Сбор культур, выращиваемых на куриных эмбрионах, весьма опасен. При его проведении сильно загрязняются скорлупа и подносы с яйцами, окружающая среда и руки экспериментатора. Работу подобного рода следует выполнять в безопасных боксах, часто пользуясь подходящим дезинфицирующим веществом.

Центрифугирование

При центрифугировании инфекционных бактериальных суспензий следует пользоваться безопасными центрифужными гильзами, а настольные центрифуги должны находиться только в боксах

Центрифужные стаканы и гильзы наполняют и открывают в безопасном боксе. Если центрифугируют вне бокса, то применяют защитную гильзу. После заполнения и запечатывания ее протирают или окунают в дезинфицирующий раствор. По истечении необходимого времени гильзу обмывают чистой водой, поскольку некоторые дезинфицирующие вещества вызывают коррозию.

Перед центрифугированием проверяют стаканы, и если находят трещины или сколотые края, то такими стаканами не пользуются. Внимательно осматривают внутреннюю поверхность гильз и ликвидируют шероховатости или приставшие частицы. Проверяют также состояние резиновых прокладок.

Между стаканом и гильзой заливают дезинфицирующий раствор, чтобы в том случае, если разобьется стакан, материал подвергся дезинфекции. К тому же это создает хорошую амортизацию. Следует позаботиться о том, чтобы культуральный материал не загрязнился дезинфицирующим веществом. Рекомендуется также не забывать о том, что если стакан разобьется, то из-за высокой концентрации клеток и большого разбавления дезинфицирующего вещества инфекционный материал может дезинфицироваться не полностью.

Надосадочную жидкость лучше не выливать из центрифужных стаканов, а отсасывать. Если ее необходимо слить, протирают внешний край стакана дезинфицирующим раствором, так как, если этого не сделать, на следующей стадии может образоваться аэрозоль.

Центрифужный стакан заполняют таким образом, чтобы край, крышка или ватная пробка не становились влажными от культуры. Завинчивающиеся крышки или крышки, охватывающие края сверху, безопаснее крышек, входящих внутрь. В последнем случае между крышкой и краем стакана обычно собирается некоторое количество жидкости. Даже стаканы с завинчивающимися крышками небезопасны: если края запачканы и неплотно прилегают к крышке, некоторое количество жидкости может попасть на внешнюю стенку стакана.

Не рекомендуется закрывать центрифужные стаканы алюминиевой фольгой, потому что при центрифугировании она часто слетает или рвется.

Стаканы и гильзы необходимо тщательно уравновешивать. Не следует смешивать гильзы, стаканы и пластмассовые вкладыши из разных наборов. Если на этих предметах не указан вес, удобно пометить каждый комплект своей краской.

Металл, из которого сделаны высокоскоростные роторы, постепенно изнашивается, и если их используют на разных центрифугах, то для каждого заводят тетрадь, в которой отмечают количество часов работы на предельной или пониженной скорости. Если это не соблюдается, может произойти опасная и дорогостоящая поломка. Чтобы предотвратить коррозию или другие дефекты, которые могут привести к развитию трещин, необходимы частые проверки роторов, их очистка и сушка. Если ротор обрабатывают дезинфицирующим раствором, то после этого его промывают водой и высушивают. Регулярно проверяют состояние резиновых колец и крышек центрифужных стаканов и смазывают их в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя. Если стаканы сделаны из различных материалов {например, целлулоидные, полипропиленовые, из нержавеющий стали), следят за тем, чтобы использовались крышки, предназначенные для соответствующих типов. Крышки часто внешне похожи, но если их надевают на несоответствующие им стаканы, последние могут давать течь. При хорошем хранении стаканов и роторов и правильном с ними обращении этого не происходит.

Обращение с животными

Животные способны распространять патогенные микроорганизмы через слюну, мочу или экскременты. В отсутствие специальной информации все животные должны рассматриваться как разносчики инфекции. Чтобы уменьшить разнесение пыли и находящихся в клетке отходов, с ними обращаются очень осторожно. Использованные клетки, где содержались животные, стерилизуют автоклавированием вместе с отбросами, емкостями и поилками или же сами клетки дезинфицируют 10% раствором хлоромина.

Когда кормят, поят или забирают из клеток инфицированных животных, надевают плотные перчатки. Нельзя передвигать предметы в клетке голыми руками.

При инъекции животным бактерий надевают защитные перчатки. Следует ограничить движения животных (например, с помощью специальной небольшой клетки, подставки и т. п.) или ввести им успокаивающие средства, чтобы избежать распространения опасного биологического материала или заражения других животных и персонала.

Двери в помещениях с животными всегда держат закрытыми, за исключением тех случаев, когда необходимо войти и выйти. В эти помещения нельзя допускать посторонних лиц.

В каждом помещении с животными должна находиться емкость с дезинфицирующим раствором, который следует ежедневно обновлять. Он предназначен для дезинфекции перчаток и рук, а также для общей дезинфекции. Руки, полы, стены и кормушки клеток регулярно моют проверенным дезинфицирующим раствором соответствующей концентрации.

Сточные желоба на полу помещений с животными периодически наполняют водой или дезинфицирующим раствором, чтобы газы, образующиеся в стоках, не поднимались вверх. Сбритые волосы и другие отходы нельзя бросать в сточный желоб на полу, поскольку они засоряют канализационные трубы.

Необходимо выполнять инструкцию по контролю зa насекомыми и грызунами в каждом помещении с животными и в местах, где хранится корм. Особое внимание обращают на то, чтобы живые животные, особенно мыши, не могли проникнуть к отходам.

Вскрытие зараженных животных производят в безопасном боксе. При этом поверх лабораторной одежды надевают хирургическую накидку, а на руки резиновые перчатки. Перед вскрытием шерсть животных обрабатывают подходящим дезинфицирующим раствором.

По окончании вскрытия весь биологически опасный материал помещают в подходящие емкости и немедленно стерилизуют, а грязные инструменты кладут на поднос и заливают дезинфицирующим раствором. Внутреннюю поверхность безопасного бокса и загрязненные поверхности дезинфицируют. Перед тем как снять с рук перчатки, их тщательно очищают в дезинфектанте, подготовив тем самым к стерилизации. Мертвых животных помещают в специальные непротекающие емкости, автоклавируют и надежно связывают перед кремацией.

Применение вакуумных систем

Вакуумная фильтрация суспензий и отсасывание культуральных сред и надосадочных жидкостей из центрифужных стаканов в приемные колбы – это обычные лабораторные процедуры. Чтобы предотвратить засасывание бактериальных аэрозолей или забрасывание жидкости в вакуумную систему, на пути к источнику вакуума устанавливают воздушный фильтр, а между приемной колбой и воздушным фильтром помещают колбу для забрасываемой жидкости.

 

Различные манипуляции

Водяные бани и бани с аппаратами Варбурга, используемые для инактивации, инкубирования бактерий или постановки опытов с ними, должны содержать дезинфицирующее вещество. Для бань с холодной водой рекомендуется использовать 70%-ный пропиленгликоль. Предупреждение. В качестве дезинфицирующего вещества не следует применять азид натрия, так как он взрывоопасен.

Морозильники, сосуды с жидким азотом, контейнеры с сухим льдом и холодильники необходимо периодически проверять, чистить и обеззараживать. Во время их чистки пользуются резиновыми перчатками и защитными респираторами. Все инфекционные материалы, хранящиеся в холодильниках или морозильниках, снабжают этикетками.

Опасные жидкие культуры или жизнеспособные порошковые инфекционные материалы в стеклянных сосудах следует транспортировать, инкубировать и хранить в удобных для обращения небьющихся непроницаемых контейнерах, достаточно больших для того, чтобы вместить всю жидкость или порошок в случае утечки содержимого или разбивания стеклянного сосуда.

Засеянные среды в чашках Петри или твердые среды в других емкостях переносят и инкубируют в непроницаемых лотках или контейнерах.

Инструменты

Зараженные шприцы, инструменты, термометры, пипетки и стеклянная посуда перед новым использованием должны быть обеззаражены. Если возможно, конечную обработку следует проводить паром для жаропрочных предметов или окисью этилена для неустойчивых к нагреванию и чувствительных к влаге материалов. В тех случаях, когда перед употреблением необходимо обеззараживание, для дезинфекции используют раствор 2%-ного глутарового альдегида. Предметы полностью погружают в раствор на 20-30 мин. При этом полная безопасность не гарантируется, если предмет не был предварительно вымыт или если раствор уже использовали ранее. Перед повторным употреблением инструменты необходимо тщательно прополоскать в дистиллированной воде, а если они предназначены для работы в полости тела животного или на его поверхности, то в стерильной дистиллированной воде.

Лабораторные пипетки обеззараживают погружением в дезинфицирующий раствор, например 2%-ный о-фенилфенол, налитый в вертикальную или горизонтальную емкость. Стеклянную посуду погружают полностью. Перед использованием стеклянную посуду стерилизуют паром.

Руки

Для обычного мытья рук в лаборатории, когда не имеют дела с инфекционными агентами, можно применять разные моющие средства. Тщательное мытье рук в течение 15-20 с дезинфектантом приводит к сокращению числа бактерий более чем на 50%.

Мыло в кусках использовать не рекомендуется не только из-за грязи в мыльнице, но также потому, что некоторые микроорганизмы сохраняют жизнеспособность на мыле в течение некоторого времени. Если в резервуар с жидким мылом не добавлять предохраняющих средств, то там могут постепенно вырасти многочисленные популяции бактерий. В этом случае резервуар следует вымыть обычным способом и налить туда новое мыло. Порошковые и листовые мыла имеют то преимущество, что они не загрязняются бактериями и бактерии не способны расти на них.

Быструю дезинфекцию рук после загрязнения производят одним из следующих способов:

1) моют руки щеткой 30-60 с смесью дезинфектанта и детергента и ополаскивают их водой;

2) моют руки щеткой 30-60 с смесью 4%-ного хлоргексидина и детергента и ополаскивают водой;

3) моют руки 20-30 с смесью фенольного дезинфектанта и детергента и затем ополаскивают водой (некоторые фенольные производные при слишком частом использовании в слишком больших концентрациях могут вызвать депигментацию смуглой кожи);

4) смачивают руки спиртом (50-70%) на 20-30 с, затем моют их щеткой с мылом в течение 10-15 с и ополаскивают водой.

 

                                        3. Общие положения при работе.

Работа с патогенными биологическими агентами (ПБА) проводится в специфических условиях, которые могут отрицательно влиять на здоровье работающих. Важнейшей особенностью этой работы является риск заражения патогенными микроорганизмами лабораторных работников и лиц, непосредственно контактирующих с ними, а также загрязнения окружающей среды.

Все это обусловливает необходимость создания в лабораториях условий, обеспечивающих безопасность персонала и окружающей среды от возможного воздействия патогенных агентов. Поэтому параллельно развитию микробиологии постоянно разрабатываются и и совершенствуются методы безопасной работы и средства защиты персонала и окружающей среды.

Существующие в настоящее время приемы и правила работы с ПБА (защитные устройства, противоэпидемические и технические мероприятия, определенный уровень автоматизации) в значительной мере обеспечивают предотвращение внутрилабораторных заражений, но полностью исключить их не могут, на что указывают периодически возникающие случаи заболевания вследствие заражения при лабораторной работе.

Обеспечение биологической безопасности при работе с ПБА включает два основных фактора: человеческий и технический.

Правильность действий человека в комплексе мер, обеспечивающих безопасное проведение работ с биоматериалом, в значительной степени обусловлена уровнем профессиональной подготовки и характерологическими особенностями индивидуума. Готовность сотрудника к самостоятельным действиям в случаях непредвиденных обстоятельств (авариях) может быть повышена соответствующей подготовкой и тренировкой. Хорошее знание основ обеспечения биологической безопасности, представление о возможных источниках заражения, свойствах и