Препараты для создания искусственного пассивного иммунитета. Виды сывороток и их приготовление. Осложнения, возникающие после введения иммунобиологических препаратов.

К сывороточным иммунным препаратам относят иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Иммунные сыворотки получают из крови гипериммунизированных (интенсивно иммунизированных) животных (лошади, ослы, кролики) соответствующей вакциной или крови иммунизированных людей (используется донорская, плацентарная, абортная кровь). Очищенные и концентрированные иммунные сыворотки называют иммуноглобулинами.

Активность сывороточных препаратов выражают в титрах антител – антитоксинов. Сывороточные иммунные препараты применяют для специфического лечения и экстренной профилактики. Основной механизм лечебного и профилактического действия сводится к связыванию и нейтрализации антителами бактерий, вирусов, токсинов. В связи с этим различают противовирусные, антибактериальные, антитоксические иммунные сывороточные препараты.

Сывороточные препараты вводят внутримышечно, подкожно, иногда внутривенно. Эффект от введения препарата наступает сразу после введения и продолжается от 2-3 нед (гетерологичные антитела) до 4-5 нед (гомологичные антитела). Для исключения возникновения анафилактической реакции и сывороточной болезни сывороточные препараты вводят по методу Безредки.

Иммуномодуляторы - иммуномодулирующие лекарственные средства химической или биологической природы, способные модулировать, т. е. стимулировать, угнетать или регулировать иммунные реакции в результате воздействия на активность иммунокомпетентных клеток, регуляторные механизмы, процесс образования иммунных факторов или другие иммунные процессы. Гомологичные иммуномодуляторы (цитокины, к которым принадлежат интерфероны, интерлейкины, фактор некроза опухолей, миелопептиды, вещества вилочковой железы и др.). К гетерологичным иммуномодуляторам относится группа химических веществ, оказывающих влияние на иммунную систему. Это левамизол (декарис), регулирующий созревание Т-лимфоцитов и гранулоцитов; левакадин (2-карбамоплазипирид), стимулирующий Т-хелперы и ингибирующий Т-супрессоры; циклоспорин А – иммунодепрессант. Эти препараты используют для подавления трансплантационного иммунитета при пересадках органов и др.

В зависимости от оказываемого эффекта Иммуномодуляторы делят на три группы: иммуностимуляторы, иммунодепрессанты и средства заместительной терапии.

Диагностические иммунобиологические препараты широко применяют для диагностики инфекционных болезней, аллергических состояний, опухолевых процессов, иммунопатологических проявлений и т.д. Принцип действия диагностических препаратов основан на иммунологических реакциях (реакция антиген – антитело; клеточные реакции).

Определение понятия серологическая реакция. Фазы взаимодействия антигена и антитела. Применение серологических реакций.

Серологические исследования (от лат. serum – сыворотка + logos – учение) – методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген – антитело в сыворотке крови Процесс взаимодействия антигена и антитела протекает в две фазы – специфическую и неспецифическую, механизм и скорость протекания которых различны. Специфическая фаза состоит из специфического соединения активного центра антитела с соответствующим антигеном. Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инфекционной болезни или соответствующего антигена позволяет установить этиологический фактор заболевания. При выделении микроорганизма от больного проводят идентификацию возбудителя, изучая его антигенные свойства с помощью иммунной диагностической сыворотки (так называемая серологическая идентификация микроорганизмов). Различают реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов. Перечисленные реакции отличаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.

 

 

Подготовка посуды для проведения серологических реакций. Инструменты и оборудование для серологических реакций. Реакция агглютинации (РА).

Для проведения РПГА микрометодом/макрометодом необходимы:

– коммерческий набор «Диагностикум (эритроцитарный) антигенный жидкий» для микро/макро метода;

– мерная посуда, пипеточные дозаторы, многоканальные пипетки, наконечники;

– полистироловые планшеты «U»-образные (со сферическим дном) для микро/макрометода.

Каждую лунку полистироловых планшетов перед проведением реакции протирают ватно-марлевым тампоном, смоченным в разведенном ФБР с твином, а затем протирают сухим тампоном.

Для РА необходимы соответственно пробирки, планшеты или стекла обезжиренные.

Реакция агглютинации (РА) – простая по постановке реакция, при которой происходит склеивание корпускулярных антигенов (микроорганизмы, эритроциты, другие клетки, а также индифферентные корпускулярные частицы с адсорбированными на них антигенами) под действием антител, что проявляется образованием осадка или хлопьев. Реакция агглютинации имеет несколько разновидностей. Развернутую реакцию агглютинации проводят в пробирках. Пластинчатую – на стекле.

 

70. Реакция иммунофлюоресценции. Реакция иммунофлюоресценции – РИФ (метод Кунса) - антигены тканей или микроорганизмы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы (зеленого) цвета.

71. Реакции ко-агглютинации и латекс-агглютинации. Разновидностью реакции агглютинации является реакция коагглютинации. Стафилококки, содержащие белок А, адсорбируют антитела, которые взаимодействуют с соответствующими микроорганизмами от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроорганизма. РЛА сходна с РНГА по принципу сорбции антител на поверхности более крупных частиц. В качестве носителя антител (иммуноглобулинов) используют нейтральный синтетический материал — частицы полистирольного латекса.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РПГА) и сопряженные с ней реакции (РТГА).

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами (эритроцитарный диагностикум), взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов на дно пробирки в виде фестончатого осадка, «зонтика».

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате этого процесса теряют свойство агглютинировать эритроциты. Положительный результат – образование «пуговки».

Реакция преципитации (РП).

Реакция преципитации (РП) – осаждение комплекса антиген – антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. Осадок комплекса антиген – антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирках нанесением (наслоением) раствора антигена на иммунную сыворотку. На границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Когда в качестве антигенов в реакции кольце-преципитации используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, реакция носит название реакции термопреципитации (реакция Асколи).

Варианты постановки: радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др. В лунки раздельно помещают антигены и сыворотки, которые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Иммуноэлектрофорез сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации; смесь антигенов разделяют в геле с помощью электрофореза, затем вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации. Можно определить образование токсина дифтерийной культурой с помощью антитоксической сыворотки.

 

74. Реакция связывания комплемента (РСК). Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы: -1- инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом; 2 – индикаторная -определение наличия в смеси свободного комплемента добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген – антитело происходит связывание им комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он присоединяется к комплексу эритроцит – антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).

 

Иммуноферментный анализ (ИФА). Иммуноблотинг.

Иммуноферментный анализ – ИФА (иммуноферментный метод) – выявление антигенов с помощью соответствующих им антител. На твердом носителе, например, в лунках микропанелей из полистирола, сорбируют антиген. В лунки с адсорбированным антигеном добавляют сыворотку крови больного и затем антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом. При положительном результате изменяется цвет раствора. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителом. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом.

Иммуноблотинг – определение антигенов или антител с помощью известных сывороток или антигенов. Метод основан на выделении антигена с помощью электрофореза, последующем переносе на бумагу (блот-пятно) и выявлении искомого антигена с помощью ИФА.