Вопрос (Механизм поступления питательных веществ в бактериальную клетку).

20 вопрос (Питательные среды: классификация, назначение; требования, предъявляемые к ним).

Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.

Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все необходимые для размножения определенных микроорганизмов веществ в легкоусвояемой форме, иметь оптимальную влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по возможности прозрачной. Каждую среду стерилизуют определенным способом в зависимости от ее состава.

Ряд питательных сред готовят непосредственно в микробиологических лабораториях из продуктов животного или растительного происхождения (говяжье мясо, молоко, яйца, сыворотка крови, овощи, дрожжи, казеин) или из искусственно полученных из этих продуктов веществ (пептон, аминопептид, дрожжевой или кукурузный экстракты)

Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые играют роль катализаторов метаболических процессов, главным образом витаминов группы В, никотиновой кислоты.

По консистенции питательные среды могут быть плотными, жидкими, полужидкими. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5-2% агара, полужидкие – 0,3-0,7% агара, который представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей. Агар плавится при температуре 80-86 градусов, затвердевает при около 40 градусов.

В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10-15%).

В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды (рыбные отходы, мясокостная мука, технический казеин).

По целевому назначению питательные среды делят на основные, элективные и дифференциально-диагностические.

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты рыбных продуктов или казеина, из которых готовят жидкую среду – питательный бульон и плотную – питательный агар.

Элективные питательные среды предназначены для избирательного накопления микробов определенного вида из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору.

Дифференциально-диагностические применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. В их состав входят: следующие основные компоненты:

- основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий

- определенный химический субстрат (например, лактоза)

- цветной индикатор.

21 вопрос ( Культуральные особенности микроорганизмов. Рост на плотных и в жидких питательных средах).

К культуральным признакам относятся морфологические особенности колоний бактерий, характер роста на плотных и жидких питательный средах.

Колонии различаются по величине, форме, цвету, консистенции, контуру края, структуре и характеру поверхности. По величине колонии могут быть крупные (диаметр более 4-5 мм), средние (2-4 мм) и малые (1-2 мм), по форме – круглые, розеткообразные, в форме листа. Цвет колонии зависит от выработки определенного пигмента – белого, желтого, красного.

Колонии беспигментных бактерий бесцветны. По консистенции различают сухие, влажные, сочные или слизистые колонии. Поверхность колонии бывает гладкой, морщинистой, исчерченной, плоской, вдавленной.

Край колонии может быть ровным, волнистым, бахромчатым. Колонии могут иметь аморфную, зернистую, волокнистую, внутреннюю структуру.

Характер роста бактерий в чистой культуре, выращенной на скошенном питательном агаре, может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным.

В жидкой питательной среде одни бактериальные культуры дают дуффузное помутнение, другие характеризуются придонным, пристеночным ростом. Некоторые бактерии образуют пленки на поверхности среды, другие - осадок на дне пробирки.

22 вопрос (Дыхание микроорганизмов. Особенности энергетического обмена у аэробов и анаэробов).

23 вопрос (Методы культивирования анаэробов).

Для культивирования анаэробных микроорганизмов необходимо создание бескислородных условий, достигаемое различными методами.

Физические методы основаны на создании вакуума в специальных аппаратах — анаэростатах. Иногда воздух в них заменяют каким-либо другим газом, например СО2. Доступ кислорода в питательную среду можно затруднить, если культивировать анаэробов в глубине столбика сахарного агара или среды Вильсона — Блера, налитых в пробирки в расплавленном состоянии и остуженных до 43°С. По методу Вейона — Виньяля расплавленный и остуженный агар с посевным материалом набирают в стеклянные трубочки, которые запаивают с двух концов.

Химические методы заключаются в том, что при культивировании исследуемого материала на плотных средах в эксикатор помещают химические вещества, например пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода. В жидкие питательные среды можно добавлять различные редуцирующие вещества: аскорбиновую или тиогликолевую кислоту.

Биологический метод основан на одновременном культивировании аэробов и анаэробов на плотных питательных средах в чашках Петри, герметически закупоренных. Вначале кислород поглощается растущими аэробами, посеянными на одной половине среды, а затем начинается рост анаэробов, посев которых сделан на другой половине. Наиболее удобна для культивирования анаэробов специальная среда Китта — Тароцци. В нее входят сахарный МПБ, который наливают в пробирки в количестве 10—12 мл, и кусочки вареных паренхиматозных органов. Перед употреблением среду Китта,— Тароцци кипятят на водяной бане для удаления растворенного в ней кислорода. Среду заливают сверху стерильным вазелиновым маслом. Заметный рост анаэробов (помутнение) может наблюдаться через 48 ч и более в зависимости от количества посевного материала.

Рост изолированных колоний анаэробов можно получить при рассеве исследуемого материала по поверхности кровяно-сахарного агара, разлитого в чашки Петри. После посева чашки помещают в анаэростат. Исследуемый материал в убывающей концентрации можно засевать в высокий столбик агара. Образовавшиеся отдельные колонии анаэробов выделяют, распилив пробирку в месте роста. Колонии анаэробов для получения значительного количества биомассы отсевают затем на среду Китта — Тароцци. В качестве источника энергии для анаэробов используют глюкозу, добавление которой в питательную среду обязательно.