Классификация и систематика микроорганизмов

Классификация и систематика микроорганизмов

Согласно современной систематике, микроорганизмы относятся к трем царствам:

· Vira - к ним относятся вирусы;

· Eucariotae - к ним относятся простейшие и грибы;

· Procariotae - к ним относятся истинные бактерии, риккетсии, хламидии, микоплазмы, спирохеты, актиномицеты.

Так же как для растений и животных, для названия микроорганизмов применяется бинарная номенклатура, т. е. родовое и видовое название.

В микробиологии существуют понятия «штамм» и «клон». Штамм – микроорганизмы одного вида, выделенные одномоментно из одного источника: от больного или носителя, а также с объектов внешней среды (из воды, пищевых продуктов). Клон – это культура микроорганизмов, полученная при размножении одной клетки данного вида или штамма.

Устройство микроскопа. Понятие «сухой объектив» и «иммерсионная система». Правила пользования иммерсионной системой.

«Сухой» объектив - это такой объектив, между фронтальной линзой которого и препаратом, находится воздух.

Иммерсионная система (от позднелат. immersio — погружение) — оптическая система, в которой пространство между предметом и первой линзой заполнено иммерсионной жидкостью.

Техника работы

Масляная иммерсия

· На готовый высушенный препарат наносят 20-25 мкл монтирующей жидкости

· Покрывают препарат обезжиренным покровным стеклом

· На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла, и наблюдают с иммерсионным объективом (маркировка — чёрная полоса ближе к фронтальному компоненту).

Водная иммерсия

· На готовый препарат наносят каплю 20 м/моль фосфатного буфера, рН 7,4

· Микроскопируют объективом для водной иммерсии (маркировка — белая полоса ближе к фронтальному компоненту)

Способы окраски. Простой метод, определение, техника и назначение.

Существуют простые, сложные и дифференциальные способы окрашивания микробов. При простой окраске обычно употребляют одну краску, чаще всего красную — фуксин, или синюю — метиленовый синий. Фуксин красит быстрее (1—2 мин.), метиленовый синий — медленнее (3—5 мин.). Фуксин приготовляют в виде концентрированного карболового раствора (фуксин Циля), очень стойкого и пригодного для окраски в течение многих месяцев. Метиленовый синий приготовляется заранее в насыщенном спиртовом растворе, который стоек и может долго храниться.

Сложные способы окраски, при которых применяются два или более красителя, являются ценными методами, используемыми в микробиологической диагностике инфекционных болезней.

Простой метод:

· Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин.

· Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными,

· высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой

· и микроскопируют в иммерсионной системе.

Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Назначение простого метода:

Простые методы окраски используются для ориентировочной, предварительной, микроскопии – определения наличия в патологическом материале бактерий, определение их формы и расположения в мазке.

Использование в диагностике

Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет. Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый или малиновый.

Техника проведения окраски

Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.

Для окраски по Граму чаще используют красители: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, а затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Отличие грам+ и грам- бактерий

У грамположительных бактерий клеточные стенки содержат мало липидов, а у грамотрицательных клеточные стенки, напротив богаты липидами. И у тех и у других жесткий каркас образуется в результате ковалентного связывания полисахаридных и пептидных цепей. Однако, к этой структурной основе присоединяются некоторые специфические для данной бактерии компоненты, которые у грамположительных и грамотрицательных бактерий имеют разный состав.

Стенки бактериальных клеток содержат еще и некоторые сопутствующие компоненты, которые у разных бактерий варьируются. У грамположительных бактерий это тейхоевые кислоты, полисахариды, полипептиды или белки. У грамотрицательных бактерий больше сопутствующих компонентов, вплетенных в муреиновую сеть. Это полипептиды, липопротеины, сложные липополисахариды. Все эти компоненты наделяют клетки грамотрицательных бактерий сложной антигенной специфичностью, а также акцепторной специфичностью по отношению к вирусам.

Таким образом, клеточная стенка грамположительной бактерии представляет собой жесткий хрупкий корпус бактерии, а клеточные стенки грамотрицательных бактерий имеют мягкое покрытие, богатое липидами и укрывающее лежащий под ними муреиновый скелет.

Идентификация вирусов в к/к

Проводится РН (реакция нейтрализации) с диагностическими сыворотками. Результат реакции оценивается по наличию ЦПД, методом бляшек, постановкой РТГА, цветной пробы.

 

(идентификация вирусов после культивирования на курином эмбрионе и животных проводится с помощью РН).

 

II. Вирусоскопический метод

1) Электронная микроскопия

Цель: детальное изучение строения вируса.

2) Световая микроскопия

Цель: а) обнаружения вирионов размером от 200 нм (серебрение по Морозову –

выявление телец Пашена – вирус натуральной оспы).

б) обнаружение включений:

- в цитоплазме (тельца Бабеша-Негри при бешенстве (окраска по Муромцеву), тельца Гварниери при натуральной оспе);

- в ядре.

Классификация и систематика микроорганизмов

Согласно современной систематике, микроорганизмы относятся к трем царствам:

· Vira - к ним относятся вирусы;

· Eucariotae - к ним относятся простейшие и грибы;

· Procariotae - к ним относятся истинные бактерии, риккетсии, хламидии, микоплазмы, спирохеты, актиномицеты.

Так же как для растений и животных, для названия микроорганизмов применяется бинарная номенклатура, т. е. родовое и видовое название.

В микробиологии существуют понятия «штамм» и «клон». Штамм – микроорганизмы одного вида, выделенные одномоментно из одного источника: от больного или носителя, а также с объектов внешней среды (из воды, пищевых продуктов). Клон – это культура микроорганизмов, полученная при размножении одной клетки данного вида или штамма.