Микрофлора воздуха, воды и почвы.

Определение ОМЧ.

ОМЧ почвы определяют глубинным посевом (на плотной среде) из 10- кратных разведений или методом прямой микроскопии (по Перфильеву).

Для глубинного посева готовят несколько разведений почвенной суспензии (10^-2, 10^-3, 10^-4 и т.д.) Для посева выбирают разведения исходя из загрязненности почвы. По 0,1 мл выбранных разведений смешивают с 40 мл расплавленного и остуженного до 45ºС питательного агара, после чего выливают вторым слоем в чашки Петри с питательным агаром. Посевы инкубируют при 28-30ºС в течение 72 часов и подсчитывают количество выросших колоний. Для подсчета колоний выбирают такие разведения почвенной суспензии, при которых на чашках вырастает от 50 до 150 колоний. Затем делают пересчет на 1 г почвы с учетом разведений.

При использовании прямого метода по Б.В. Перьфильеву к 1 мл почвенной суспензии в разведении 1:10 добавляют 1-2 капли раствора акридинового оранжевого. Затем каплю суспензии помещают в капиллярную камеру. Капилляр помещают на предметное стекло, фиксируют парафином и исследуют при помощи люминесцентной микроскопии. Затем делают пересчет на 1 г почвы.

Определение коли-индекса.

Если предполагается невысокая степень фекального загрязнения, БГКП в почве определяют бродильным методом или методом мембранных фильтров; при высокой степени — прямым посевом почвенной суспензии в разведении 1:10 на среду Эндо.

Метод мембранных фильтров проводят также как и при исследовании воды. Предварительно почвенную суспензию 1:10 центрифугируют при 2000

об/мин в течение 5 мин, затем 5-10 мл суспензии фильтруют через мембранные фильтры.

При титрационном методе из приготовленных разведений почвенной суспензии делают посевы в питательную среду Кесслера (1% пептона, 5% желчи, 0,25% лактозы, генциановый фиолетовый). Из разведения 1:10 10 мл засевают во флакон с 50 мл среды, что соответствует 1 г почвы. Для посева меньших количеств (0,1 и 0,01 г почвы) делают разведение 1:100 и по 1 мл из разведений 1:10 и 1:100 соответственно засевают в пробирки с 9 мл среды. Далее методика соответствует определению коли-индекса воды.

Определение перфрингенс-титра

Перфрингенс-титр почвы – минимальное количество почвы, в котором еще определяются Clostridium perfringens.

Из приготовленных 10-кратных разведений почвенной суспензии по 1 мл переносят в два параллельных ряда пробирок. Один ряд прогревают при 80°С 15 мин для уничтожения вегетативных форм. Далее пробирки заливают свежеприготовленной средой Вильсона-Блера. Посевы инкубируют при 43ºС в течение 24-48 часов, после чего учитывают результаты по образованию черных колоний. Из колоний делают мазки, окрашивают по Граму и обнаруживают типичные грамположительные палочки.

Определение термофильных бактерий.

Число термофильных бактерий определяют глубинным посевом различных разведений на плотные среды (МПА) с инкубированием при 60°С в течение суток. Из каждого разведения рекомендуется засевать по 2-3 параллельные чашки.

Определение нитрифицирующих бактерий.

Титр нитрифицирующих бактерий определяют посевом из 10-кратных разведений почвенной суспензии на жидкую синтетическую среду Виноградского. Посевы инкубируют при 28ºС в течение 14-15 суток. На 5-7 день можно проверить образование азотистой или азотной кислоты при помощи дифениламина. Для этого на стеклянную пластину помещают каплю

среды и добавляют несколько капель дифениламина (в концентрированной серной кислоте), синее окрашивание свидетельствует о присутствии нитратов.

Микрофлора воздуха. Патогенные микробы в воздухе, механизм распространения и пути передач. Факторы, влияющие на количественный и видовой состав микробов воздуха. Санитарно-показательные м/о. Методы оценки сан-бактериологического состояния воздуха.

Воздух — среда, не поддерживающая размножение микроорганизмов; это определяется отсутствием питательных веществ и недостатком влаги. Кроме того, в воздухе более выражено микробицидное действие солнечных лучей УФ-спектра.

Загрязнение воздуха микробами происходит из почвы, воды, от животных, людей и растений. Состав микрофлоры воздуха разнообразен и значительно изменяется в зависимости от условий. Воздух верхних слоев атмосферы, а также горный и морской воздух содержит очень мало микроорганизмов. В населенных местах их значительно больше, особенно в летнее время. Особенно сильно микроорганизмами насыщен атмосферный воздух над крупными городами. Это связано с тем, что микроорганизмы в воздухе находятся в состоянии аэрозоля.

Микрофлора воздуха

· Пигментообразующие кокки

· Сарцины

· Спорообразующие бактерии

· Актиномицеты

· Грибы

Микрофлора атмосферного воздуха. Среди микроорганизмов атмосферного воздуха доминируют виды, обитающие в почве. В атмосферном воздухе в основном встречают следующие группы микроорганизмов:

· Пигментообразующие кокки в солнечные дни составляют до 70-80% всей флоры (пигмент защищает бактерии от инсоляции - облучение поверхностей солнечным светом (солнечной радиацией)).

 · Почвенные споровые и гнилостные микроорганизмы. Их содержание резко увеличивается в сухую и ветреную погоду.

 · Плесневые грибы и дрожжи. Их содержание увеличивается при повышении влажности воздуха. В атмосферном воздухе постоянно происходят процессы самоочищения за счет осадков, инсоляции, температурных воздействий и других факторов. В свою очередь атмосферный воздух сам по себе — фактор очищения воздуха жилых помещений.

Микрофлора воздуха закрытых помещений отличается от открытого: более однообразна и относительно стабильна. Среди микроорганизмов доминируют обитатели носоглотки человека, в том числе патогенные виды, попадающие в воздух при кашле, чихании или разговоре. К ним можно отнести стафилококки, стрептококки, пневмококки, менингококки, различные вирусы и др. Основной источник загрязнения воздуха патогенными видами — бактерионосители. Уровень микробного загрязнения зависит главным образом от плотности заселения, активности движения людей, санитарного состояния помещения, в том числе пылевой загрязнённости, вентиляции, частоты проветривания, способа уборки, степени освещённости и других условий. Так, регулярные проветривания и влажная уборка помещений снижает обсеменённость воздуха в 30 раз. Самоочищения воздуха закрытых помещений не происходит. САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫЕ М/О

Золотистый стафилококк

М еханизм передачи

При чихании, кашле и разговоре (воздушно-капельный способ) в воздух выбрасывается множество капелек жидкости, внутри которых содержатся микроорганизмы. Особенно важно, что эти мельчайшие капельки могут часами удерживаться в воздухе во взвешенном состоянии, т. е. образуют стойкие аэрозоли. В этих капельках за счет влаги микроорганизмы выживают дольше кокковидные и палоч­ковидные бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы.

Таким воздушно-капельным способом происходит заражение многими острыми респираторными заболеваниями, в том числе гриппом и корью, а также коклюшем, дифтерией, легочной чумой и т. д. Этот путь распространения возбудителей – одна из основных причин развития не только эпидемий, но и крупных пандемий.

Помимо капельного способа, распространение патогенных микробов через воздух может осуществляться «пылевым» путем. Находящиеся в выделениях больных (мокроте, слизи и т. п.) микроорганизмы окружены белковым субстратом, поэтому они более устойчивы к высыханию и другим факторам. Когда такие капли высыхают, они превращаются в своеобразную бактериальную пыль (внутри белкового субстрата сохраняются и выживают многие патогенные бактерии). Частички бактериальной пыли имеют обычно диаметр от 1 до 100 мкм. Скорость переноса бактериальной пыли зависит от интенсивности сил воздушных перемещений. Пылевой путь играет особенно важную роль в эпидемиологии туберкулеза, дифтерии, туляремии и других заболеваний.

Появление в воздухе спорообразующих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель возможного антисанитарного состояния.

По эпидемиологическим показаниям в воздухе определяют наличие сальмонелл, микобактерий, вирусов.

Из методички

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО МИКРОБНОГО ЧИСЛА (МЕТОД КОХА) И САНИТАРНО - ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРОБОВ ВОЗДУХА

Для оценки санитарно-бактериологического состояния воздуха определяют следующих показателей: микробного числа воздуха (количество микробов в в 1м3 воздуха) методами осаждения по Коху и аспирации по Кротову, наличие зеленящего стрептококка путем посева воздуха на кровяной агар с добавлением генцианового фиолетового (среда Гарро), для обнаружения S. aureus – на желточно-солевой агар, для обнаружения других патогенных бактерий – соответствующие элективные питательные среды.

Определение микробного числа воздуха методом Коха проводится в 2 этапа:

1 этап. Отбор пробы воздуха. Стерильные чашки Петри с МПА открывают в месте отбора проб воздуха и выдерживают в течение 10 мин, после чего закрывают и инкубируют при 370С в течение 48 часов.

2 этап. Учет результатов. По количеству выросших колоний подсчитывают микробное число воздуха, пользуясь формулой Омелянского, в соответствии с которым считают, что на поверхность питательной среды площадью 100см2 в течение 5 мин оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха:

Х – количество микробов в 1м3 воздуха

X = а – число колоний, выросших на чашке

в – площадь чашки Петри, равная ПR 2.
Метод Кротова является более точным методом определения микробного числа воздуха с помощью специального прибора.

Определение сальмонелл.

Посев исследуемой воды проводят в среды накопления (магниевая, селенитовая среда). Дальнейший ход исследований проводится по общепринятой для сальмонелл методике.

Определение шигелл.

Шигеллы можно определить в водопроводной воде в случае аварийных ситуаций. В качестве среды накопления при этом используют среду с охмеленным суслом (400 мл исследуемой воды вносят в флакон со 100мл охмеленного сусла). После выращивания в течение суток при 37 ºС производят высев на среду Плоскирева или Левина.

Определение энтеровирусов.

Вирусологические исследования воды производят при оценке качества водопроводной воды и определении эффективности очистки сточных вод.

Метод фильтрации

Пробу воды в количестве 1 л фильтруют через мембранный фильтр №3, предварительно доведя рH среды до 3,0 добавлением 1Н. HCl.

В качестве элюирующего раствора для снятия энтеровирусов с поверхности фильтра используют мясную воду или МПБ с рH 7,8 (добавлением 1NNaOH). В элюирующую жидкость добавляют антибиотики. После встряхивания в шюттель-аппарате в течение 30' элюат собирают в пенициллиновые флаконы, обрабатывают эфиром и хранят при - 20 ºС. Дальнейшее исследование проводят на культуре клеток.

Микрофлора воздуха, воды и почвы.

1. Санитарно – показательные микроорганизмы, их характеристика. Понятие о микробном числе воды, воздуха, почвы. Коли-титр и коли индекс.

Санитарно-показательные микроорганизмы - являются постоянными обитателями организма человека и показателями загрязнения теми выделениями человека и животных, которые могут содержать патогенные микроорганизмы.

Микроорганизмы, обитающие в кишечнике или в верхнем отделе дыхательных путей человека и животных и постоянно выделяющиеся окружающую среду, называются санитарно- показательными. По количеству СПМ можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. То есть при их определении исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен выделениями человека и животных, тем больше будет СПМ и тем вероятнее присутствие патогенов.

Основные требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам, следующие:

1.  постоянное обитание в естественных полостях организма человека и животных (которые являются их единственной природной средой обитания - биотопом) и выделение их в большом количестве в окружающую среду;

2. продолжительность выживания их в окружающей среде должна быть такой же или большей, чем патогенных микроорганизмов, выводимых из организма теми же путями;

3. не должны размножаться в окружающей среде;

4. не должны сколько-нибудь значительно изменять свои биологические свойства при попадании в окружающую среду;

5. должны быть достаточно типичными, с тем, чтобы их дифференциальная диагностика осуществлялась без особого труда;

6. индикация, идентификация и количественный учет должны производиться современными, простыми, легко доступными и экономичными микробиологическими методами.

Все СМП являются индикаторами биологического загрязнения. Выделяют несколько групп микроорганизмов, обнаружение которых в объектах окружающей среды говорит о различных видах загрязнения.

Группа А включает обитателей кишечника человека и животных. Они являются индикаторами фекального загрязнения. В нее входят бактерии группы кишечной палочки (БГКП) – эшерихии, цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Кроме того, в эту группу входят энтерококки, протеи, сальмонеллы, клостридии, термофилы, бактероиды, бактериофаги и др.

Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. Они являются индикаторами орального загрязнения. В нее входят стафилококки (S. aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье.

Группа С включает микроорганизмы-сапрофиты, обитающие во внешней среде. Они являются индикаторами процессов самоочищения. В нее входят аммонифицирующие, нитрифицирующие бактерии, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, сине-зеленые водоросли и др.

Общим микробным числом (ОМЧ) называют количество микробов (мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных) в 1 мл жидкости, 1 г твердого вещества или 1 кубометре воздуха.

Общее микробное число воздуха – количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха (определяется при помощи следующих методов: естественной седиментации, принудительной седиментации и фильтрационного метода).

Индекс санитарно-показательных микроорганиз-мов в воздухе (санитарно-показательными микроор-ганизмами для воздуха являются представители микрофлоры дыхательных путей - гемолитический и зеленящий стрептококки, золотистый стафило-кокк).

Общее микробное число воды – общее количество мезофильных микроорганизмов в 1 мл (для питьевой воды не более 50).

Титр БГКП – объем воды, в котором обнаружена 1 бактерия группы кишечной палочки (БГКП)(для питьевой воды не менее 333 мл).

Индекс БГКП – количество бактерий группы кишечной палочки в 1 л воды (для питьевой воды не более 3).

Общее микробное число почвы  - общая численность сапрофитных термофильных и нитрифицирую-щих бактерий в 1 г почвы.

Показатели давности загрязнения почвы:

Escherichia coli, Streptococcus faecalis – загрязнение почвы не более чем 2-недельной давности.

Citrobacter, Enterobacter – загрязнение почвы не более чем 2-месячной давности.

Clostridium perfringens – загрязнение почвы не менее, чем 2 месяца назад.

Распространение микробов в окружающей среде.

Многочисленные микроорганизмы окружающей среды участвуют в процессах круговорота веществ в природе, уничтожают остатки погибших животных и растений, повышают плодородие почвы, поддерживают устойчивое равновесие в биосфере. В качестве нормальной микрофлоры они выполняют ряд полезных функций для организма человека.

 

 

2. Микрофлора почвы. Факторы, влияющие на количественный и видовой состав микробов почвы. Почва, как фактор передачи инфекционных болезней. Санитарно-показательные микроорганизмы. Методы оценки санитарно-биологического состояния почвы.

Факторы, влияющие на количественный и видовой состав микробов почвы. Состав микрофлоры почвы зависит от ее типа и состояния, состава растительности, температуры, влажности и т. д. Большинство ПОЧвенных микроорганизмов способны развиваться при нейтральном pH, высокой относительной влажности, температуре от 25 до 45 °С.

Почва заселена разнообразными микроорганизмами, которые принимают участие в процессах почвообразования и самоочищения почвы, кругооборота в природе азота, углерода и других элементов. В почве обитают бактерии, грибы, лишайники (симбиоз грибов с цианобактериями) и простейшие. Численность бактерий в почве достигает 10 млрд клеток в 1 г.

На поверхности почвы микроорганизмов относительно мало, так как на них губительно действуют УФ-лучи, высушивание и другие факторы.
Наибольшее число микроорганизмов содержится в верхнем слое почвы толщиной до10 см. По мере углубления количество микроорганизмов уменьшается, и на глубине 3—4 м они практически отсутствуют.

В почве живут азотфиксирующие бактерии, способные усваивать молекулярный азот (Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium и др.). Азотфиксирующие разновидности цианобактерий, или сине-зеленых водорослей, применяют для повышения плодородия рисовых полей.

Почва является местом обитания спорообразующих палочек родов Bacillus и Clostridium. Непатогенные бациллы (Вас. megaterium, Вас. subtilis и др.) наряду с псевдомонадами, протеем и некоторыми другими бактериями являются аммонифицирующими, составляя группу гнилостных бактерий, осуществляющих минерализацию органических веществ. Патогенные спорообразующие палочки (возбудители сибирской язвы, ботулизма, столбняка, газовой гангрены) способны длительно сохраняться, а некоторые даже размножаться в почве (Clostridium botulinum).

Кишечные бактерии (сем. Enterobacteriaceae) кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов, дизентерии могут попадать в почву с фекалиями.
Однако здесь отсутствуют условия для их размножения, и они постепенно отмирают. В чистых почвах кишечная палочка и протей встречаются редко; обнаружение их в значительных количествах является показателем загрязнения. Почвы фекалиями человека и животных и свидетельствует об ее санитарно-эпидемиологическом неблагополучии (в плане передачи возбудителей кишечных инфекций).

В почве находятся также многочисленные грибы. Они участвуют в почвообразовательных процессах, превращениях соединений азота, выделяют бав, в том числе антибиотики и токсины. Токсинообразующие грибы, попадая в продукты питания человека, вызывают интоксикации — микотоксикозы и афлатоксикозы.

Количество простейших в почве колеблется от 500 до 500 000 на 1 г почвы. Питаясь бактериями и органическими остатками, простейшие вызывают изменения в составе органических веществ почвы.

ПОЧВА КАК ФАКТОР РАСПРОСТРАНЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 

1. Возбудители длительно сохраняются и/или размножаются в почве: Столбняк, Раневая анаэробная инфекция, Ботулизм Сибирская язва

2. Почва – фактор передачи: Лептоспироз, Бруцеллез, Пищевые токсикоинфекции (сальмонеллы, эшерихии, B. cereus и др.)

3. При загрязнении фекалиями: Брюшной тиф, Холера, Дизентерия, Эшерихиозы, Энтеровирусные инфекции, Геогельминтозы

САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ ПОЧВЫ– БГКП Е.coli, энтерококки, термофилы, спорообразующие анаэроб бактерии- клостр. перфрингенс-возбудители газовой гангрены и клостр.тетани-возб. столбняка

Категория почвы	Титр БГКП	Титр нитрифици- рующих бактерий	Титр клостридий	Индекс термофильных м/о
Чистая Загрязненная Сильно загр	>1,0 0,9-0,01 < 0,009	>0,1 0,09-0,001 < 0,0009	> 0,001 0,009-0,0001 < 0,00009	100 — 1000 1001 — 100000 10001 – 4000000

При попадании в почву органических веществ сразу же повышается общее микробное число (ОМЧ), а также общее число сапрофитов (ОЧС). Обычно в грязных почвах ОМЧ>ОЧС, а в чистых ОМЧ = ОЧС или ОМЧ<ОЧС.

Сначала размножаются гетеротрофы, обладающие очень высокой ферментативной активностью и представленные семейством псевдомонад, аэромонад и др. В этот период в почве много фекальных бактерий (БГКП, энтерококки, Cl. perfringens), протеолитов, разлагающих белки, пептоны, аммонификаторов (микробов, расщепляющих белки до NH₃). Для самого свежего загрязнения характерна большая обсемененность почвы энтерококками, БГКП, Cl. perfringens, термофилами и отсутствие нитрификаторов.

В процессе самоочищения почвы состав микрофлоры меняется. По мере повышения кислотности в почве появляются ацидофильные микроорганизмы: молочнокислые бактерии, дрожжи, грибы, плесени, актиномицеты. По мере накопления аммиака в почве начинают размножаться нитрификаторы, т. е. микроорганизмы, окисляющие МН₃ до нитритов и нитратов. Эти микроорганизмы завершают цикл превращений органических веществ в неорганические. За окисление NH₃ до HNO₂ ответственны нитрозобактерии (Nitrosomonas), а за окисление HNO₂ в HNO₃ — нитробактерии (Nitrobacter). Одновременно с процессами нитрификации идут процессы денитрификации, т.е. восстановление нитратов в нитриты, а далее в газообразный азот. На этом этапе ОМЧ почвы становится низким. Видовой состав и численность микрофлоры стабилизируется. Активные вегетативные формы спорообразующих бактерий и грибов уступают покоящимся спорам бацилл, актиномицетам, грибам. В чистых почвах всегда доминируют покоящиеся споры. Спорообразование всегда говорит о законченных процессах минерализации почвы.

Сочетание ОМЧ и нитрификаторов используют для распознавания и отличия чистых почв от почв, бывших загрязненными, но находящихся на стадии минерализации. Для них характерно низкое ОМЧ, но высокое число нитрификаторов. То же самое можно сказать и при сопоставлении общего числа сапрофитов и процентов споровых аэробов. Если процент споровых форм к ОЧС высок (40—60%), то это характерно для чистых почв, если же низок (25%), то почва загрязнена.

Отбор и подготовка проб.

Перед отбором пробы заполняют сопроводительные документы с описанием местности (характер рельефа, растительности и т.д.), предполагаемых источников загрязнения. Пробы отбирают с прямоугольного участка размером не менее чем 5 х 5 м из 5 точек («метод конверта»). При этом в условиях асептики берут с глубины 20—25 см образцы для приготовления смешанной пробы весом 1 кг.

Пробу помещают в стерильную посуду, маркируют. Исследование пробы желательно проводить в тот же день, допускается хранение материала в течение 24 часов при температуре 4-5ºС.

Перед исследованием образцы почвы освобождают от крупных включений, растирают в ступке и просеивают через стерильное сито с диаметром пор 3 мм. Масса навесок для исследования зависит от цели исследования. Навеску почвы помещают в стерильную колбу и заливают стерильной водопроводной водой в соотношении 1:10. Полученную смесь встряхивают 10-15 мин, затем 2-3 мин. отстаивают. Полученную суспензию используют для приготовления последующих разведений.

Определение ОМЧ.

ОМЧ почвы определяют глубинным посевом (на плотной среде) из 10- кратных разведений или методом прямой микроскопии (по Перфильеву).

Для глубинного посева готовят несколько разведений почвенной суспензии (10^-2, 10^-3, 10^-4 и т.д.) Для посева выбирают разведения исходя из загрязненности почвы. По 0,1 мл выбранных разведений смешивают с 40 мл расплавленного и остуженного до 45ºС питательного агара, после чего выливают вторым слоем в чашки Петри с питательным агаром. Посевы инкубируют при 28-30ºС в течение 72 часов и подсчитывают количество выросших колоний. Для подсчета колоний выбирают такие разведения почвенной суспензии, при которых на чашках вырастает от 50 до 150 колоний. Затем делают пересчет на 1 г почвы с учетом разведений.

При использовании прямого метода по Б.В. Перьфильеву к 1 мл почвенной суспензии в разведении 1:10 добавляют 1-2 капли раствора акридинового оранжевого. Затем каплю суспензии помещают в капиллярную камеру. Капилляр помещают на предметное стекло, фиксируют парафином и исследуют при помощи люминесцентной микроскопии. Затем делают пересчет на 1 г почвы.

Определение коли-индекса.

Если предполагается невысокая степень фекального загрязнения, БГКП в почве определяют бродильным методом или методом мембранных фильтров; при высокой степени — прямым посевом почвенной суспензии в разведении 1:10 на среду Эндо.

Метод мембранных фильтров проводят также как и при исследовании воды. Предварительно почвенную суспензию 1:10 центрифугируют при 2000

об/мин в течение 5 мин, затем 5-10 мл суспензии фильтруют через мембранные фильтры.

При титрационном методе из приготовленных разведений почвенной суспензии делают посевы в питательную среду Кесслера (1% пептона, 5% желчи, 0,25% лактозы, генциановый фиолетовый). Из разведения 1:10 10 мл засевают во флакон с 50 мл среды, что соответствует 1 г почвы. Для посева меньших количеств (0,1 и 0,01 г почвы) делают разведение 1:100 и по 1 мл из разведений 1:10 и 1:100 соответственно засевают в пробирки с 9 мл среды. Далее методика соответствует определению коли-индекса воды.