Реактивы и вспомогательные материалы, используемые при приготовлении ботанических препаратов

 

1. Аммиак (водный раствор—NH₄OH). Используется для создания слабощелочной среды в опытах с антоцианом и для других целей.

2. Анилин сернокислый (C₆H₅NH₂)₂- H₂S0₄. Используется для приготовления реактива того же названия ("сернокислый анилин"), служащего для микрохимического выявления лигнина в одревесневших клеточных стенках. В результате действия реактива они приобретают лимонно-желтый или канареечный цвет. Для приготовления реактива "сернокислый анилин" берут: анилина сернокислого- 1 г, воды—70 мл, этилового спирта—30 мл, и серной кислоты—3 мл.

3. Бензин. Применяется для удаления иммерсионного масла с объективов и препаратов.

4. "Бузина" (сердцевина бузины). Используется при изготовлении бритвенных срезов в качестве держателя и среды для нарезаемых объектов. Осенью или зимой берут однолетние сильнорослые побеги и, осторожно срезая ножом древесину, извлекают оцробковевшую сердцевину. Кусочки сердцевины диаметром 7—10 мм и длиной 2—3 см помещают в колбу с водой и варят несколько часов. Затем переносят в банку с притертой пробкой, наливают немного жидкости (¹/₃ высоты банки) и добавляют спирт, чтобы закрыть всю бузину. Результирующая крепость спиртовой жидкости должна быть около 60—80°. Хранить такую бузину можно очень длительное время.

5. Бумага фильтровальная. Употребляется для изготовления фильтров, а обрезки нарезаются размером примерно 2,5 см х 2,5 см и используются для удаления избытка воды и реактивов с временных препаратов.

6. Вода дистиллированная. Находит применение в качестве среды для заключения объектов во временных препаратах и при изготовлении реактивов.

7. Гематоксилин Делафильда. Гематоксилин - природный продукт, получаемый из кампешевого дерева посредством эфирной вытяжки и последующего осаждения кристаллов. Используется для приготовления ряда стойких ядерных красителей (гематоксилин Делафильда, гематоксилин Гейденгайна и др.). Применяется для окраски ядер и клеточных стенок в сине-фиолетовый и красно-фиолетовый цвет при изготовлении постоянных препаратов. Способ приготовления: 1 г гематоксилина растворяют в 6 мл абсолютного спирта. Раствор вливают по каплям в 100 мл насыщенного водного раствора алюмоаммонийных квасцов, после чего смесь подвергают действию воздуха и света в течение недели. Далее прибавляют по 25 мл глицерина и метилового спирта и не ранее чем через 4 часа после этого фильтруют. Приготовленный раствор должен медленно созреть и будет готов к употреблению только через 1—2 месяца. Для окрашивания препаратов основной раствор разбавляют дистиллированной водой в 5—30 раз.

8. Глицерин (С₃Н₅(ОН)з). Употребляется для просветления временных препаратов (2 части глицерина и 1 часть воды) и для других целей.

9. Глицерин-желатина. Используется в качестве среды при изготовлении постоянных препаратов со сроком хранения не свыше 2—3 лет. Рецепт приготовления: отвешивают 10 г высококачественной желатины и помещают в эрленмейровскую колбу, содержащую 60 мл дистиллированной воды. Дают набухнуть (10—12 часов), после чего нагревают на водяной бане и добавляют 70 г концентрированного бесцветного глицерина, 0,2—0,5 г карболовой кислоты (кристаллической) и перемешивают стеклянной палочкой. В дальнейшем колбу следует закрыть пробкой, через которую пропущена стеклянная

10. Жавелевая вода. Применяется для просветления срезов (растворяет цитоплазму) перед их окраской. Берут 20 г свежей хлорной извести и разбалтывают ее в 100 мл воды. В другом сосуде в 100 мл воды растворяют 15 г поташа (углекислого калия). После растворения поташа его раствор вливают в сосуд с хлорной известью и тщательно перемешивают. Дают смеси постоять несколько дней в банке, закрытой корковой пробкой, после чего фильтруют и используют. Хранить жавелевую воду следует в банке из оранжевого стекла.

11. Желатина. Очищенная желатина (высшего сорта) используется для приготовления глицерин-желатины.

12. Железо хлорное (FеС1₃). 5—10% водный раствор служит реактивом для выявления дубильных веществ, при взаимодействии с которыми получается темно-синее или темно-зеленое окрашивание жидкости (чернильная реакция).

13. Иммерсионное (кедровое) масло. Представляет собой особо очищенное и сгущенное кедровое масло (1г—1,515). Применяется в микроскопах для рассмотрения препаратов с объективом 90. Капля иммерсионного масла помещается между объективом и покровным стеклом препарата.

14. Иод металлический. Используется для приготовления реактивов: 1) иод-иодистый калий, 2) хлор-цинк-иод.

15. Иод-иодистый калий (раствор иода в иодистом калии). Является самым лучшим реактивом на крахмал, а также может служить реактивом на белки. Наиболее

часто используется рецепт Грама, согласно которому 2 г иодистого калия растворяют

при нагревании в 5 мл дистиллированной воды, а затем в этом растворе растворяют 1 г металлического иода. После этого добавляют воды до 300 мл и хранят в оранжевой склянке с притертой пробкой. При действии реактива крахмальные зерна принимают цвет от темно-синего до фиолетового и голубого, а белки (алейроновые зерна, цитоплазма) принимают желтый цвет. Для открытия белков чаще применяют раствор следующего состава: 1 г иода + 3 г иодистого калия + 100 мл воды.

16. Калий азотнокислый (калийная селитра). Употребляется 5% или 8% водный раствор для плазмолиза клеток.

17. Калий едкий (КОН). Применяется для мацерации клеток. Особенно сильное мацерирующее действие имеет кипящий раствор.

18. Канадский бальзам (смола некоторых видов пихты— Abies balsamea, A. сапа densis, растворенная в ксилоле до консистенции жидкого меда). Используется в качестве наилучшей среды для заключения объектов в постоянных препаратах. Пихтовый бальзам из смолы Abies sibirica вполне заменяет канадский.

19. Карболовая кислота (фенол — С₆Н₆О). Является антисептиком (применяется в глицерин-желатине при изготовлении временных препаратов), а также обезвоживающим и просветляющим веществом (см. карбол-ксилол).

20. Карбол-ксилол. Применяется при изготовлении постоянных препаратов для просветления и удаления остатков воды из срезов. Для приготовления карбол-ксилола берут от 5 до 30 г сухих кристаллов карболовой кислоты и растворяют в 100 мл ксилола.

21. Квасцы алюмо - аммонийные (A1₂(S0₄)₃- (NH₄)₂S0₄-24H₂O). Используются для приготовления гематоксилина по Делафильду.

22. Ксилол (С₈Н₁₀). Применяется в качестве промежуточной жидкости при изготовлении постоянных препаратов, а также как растворитель канадского бальзама.

23 ."Ледяная" уксусная кислота – 100% уксусная кислота.

24. Медь сернокислая (медный купорос). Используется при получении абсолютного спирта.

25. Метиленовый синий (метиленблау). Синий анилиновый краситель. Применяются водные и спиртовые растворы. Окрашивает древесину, а также мицелий грибов.

26. Метиловый зеленый (метилгрюн). Анилиновый краситель, окрашивающий одревесневшие клеточные стенки, и хроматин.

27. Натрий едкий (NaOH).

28. Натрий хлористый. Применяется вместо селитры при изучении плазмолиза.

29. Сафранин. Один из самых распространенных анилиновых красителей. Обычно применяется 1 % спиртовой раствор сафранина. Окрашивает ядра клеток и одревесневшие клеточной стенки в красный цвет. Используется при комбинированных окрасках препаратов.

30. Светлый зеленый (лихт-грюн). Зеленый анилиновый краситель. Применяется в слабых спиртовых растворах (0,2—0,5%) в комбинации с сафранином. Окрашивает целлюлозу, цитоплазму и мицелий грибов.

31. Серная кислота (H ₂ SO ₄). Находит применение в реактиве—"сернокислый анилин".

32. "Сернокислый анилин". См.—анилин сернокислый.

33. Соляная кислота (HCl) Используется совместно с флороглюцином для реакции на одревеснение (см.—флороглюцин).

34. Спирт абсолютный. Применяется для фиксации материала и для обезвоживания срезов при изготовлении постоянных препаратов. Приготавливается из 96° этилового спирта путем удаления остатков воды при помощи обезвоженного медного купороса. Для обезвоживания медного купороса его измельчают и прокаливают в вытяжном шкафу при постоянном помешивании. Абсолютный спирт ядовит!

35. Спирт метиловый. Используется для приготовления гематоксилина Делафильда. Метиловый спирт сильно ядовит!

36. Спирт технический. Употребляется в спиртовках.

37. Спирт этиловый 96° (ректификат). Используется для фиксации и хранения материала, а также для приготовления абсолютного спирта.

38. Таннин (дубильное вещество). Представляет собой природный продукт — смесь зфиров глюкозы с галловой и дигалловой кислотами. Имеет вид аморфного желтоватого порошка. Употребляется водный раствор для демонстрации реакции на дубильные вещества (см. — железо хлорное).

39. Уксусная кислота. Является одним из компонентов многих фиксирующих жидкостей. Наибольшее применение имеет "ледяная" уксусная кислота.

40. "Уксусный алкоголь". Широко применяется в качестве фиксатора эмбриологического и анатомического материала. Состав: 3 части абсолютного (или 96°) спирта и 1 часть уксусной ледяной кислоты. Продолжительность фиксации от 2 до 12 часов, после чего требуется промыть тремя сменами 80% спирта.

41. Фиксатор Чемберлена. Используется для фиксации эмбриологического и анатомического материала. Состав: спирта 50—70%—90 частей, формалина 40% — о частей, уксусной кислоты крепкой—5 частей. Продолжительность фиксации 12—16 часов. В фиксаторе можно хранить материал неограниченно долгое время без вреда для него.

42. Флороглюцин (триоксибензол — С₆Н₆0₃-2Н₂0). Применяется в сочетании с соляной кислотой в качестве основного реактива на одревеснение. Для этого готовится 5 — 10% спиртовой раствор флороглюцина, каплю которого наносят на срез, а затем прибавляют каплю концентрированной (дымящей) соляной кислоты. В результате реакции одревесневшие клеточные стенки становятся вишнево-красными или красно-фиолетовыми. Интенсивность окрашивания зависит от степени одревеснения клеточной стенки.

43. Формалин. Формалин обычно имеет концентрацию, равную 40%. Используется в фиксирующих жидкостях и для сохранения материала. В последнем случае берут 4% раствор.

44. Фуксин кислый. Окрашивает целлюлозу и цитопламу в красный цвет. Применяется в виде 1% водных или спиртовых растворов.

45 Фуксин основной. Окрашивает ядра и хромосомы в красный цвет. Применяется в виде спиртовых растворов.

46. Хлорал-гидрат (ССl₃-СН(ОН)₂). Является одним из лучших просветляющих средств. Применяются водные растворы различной концентрации.

47. Хлорная известь. Употребляется для приготовления жавелевой воды.

48. Хлор-цинк-иод. Является основным реактивом для обнаружения целлюлозы. Целлюлозные клеточные стенки при действии реактива становятся синими или сине-фиолетовыми (хлористый цинк преобразует клетчатку в амилоиды, а иод окрашивает их в синий цвет). Существует несколько рецептов приготовления реактива. Вариант 1. (по И. В. Новопокровскому). Берут 20 г хлористого цинка и растворяют в 8,5 мл воды при нагревании. К остывшему раствору добавляют по каплям раствор иода в иодистом калии (3 г иодистого калия и 1,5 г металлического иода в 60 мл воды) до тех пор, пока не начнет появляться осадок, не исчезающий при встряхивании. Для этого обычно достаточно 1,5 мл второго раствора. Вариант 2. 30 г хлористого цинка растворяют в 14 мл воды, содержащей 5 г иодистого калия и 1 г иода.

49. Цинк хлористый. Используется для приготовления хлор-цинк-иода.

50. Эозин. Применяемся 1% водный или спиртовой раствор для подкрашивания цитоплазмы в комбинации с гематоксилином или метиленовым синим. Окрашивает цитоплазму и ядрышки в розовый цвет.

 

[1] Чаше употребляется санти (франц.)