Семя – орган полового размножения и расселения растений: наружи у семян имеется плотный покров – кожура...
Таксономические единицы (категории) растений: Каждая система классификации состоит из определённых соподчиненных друг другу...
Топ:
Методика измерений сопротивления растеканию тока анодного заземления: Анодный заземлитель (анод) – проводник, погруженный в электролитическую среду (грунт, раствор электролита) и подключенный к положительному...
Выпускная квалификационная работа: Основная часть ВКР, как правило, состоит из двух-трех глав, каждая из которых, в свою очередь...
Интересное:
Как мы говорим и как мы слушаем: общение можно сравнить с огромным зонтиком, под которым скрыто все...
Влияние предпринимательской среды на эффективное функционирование предприятия: Предпринимательская среда – это совокупность внешних и внутренних факторов, оказывающих влияние на функционирование фирмы...
Наиболее распространенные виды рака: Раковая опухоль — это самостоятельное новообразование, которое может возникнуть и от повышенного давления...
Дисциплины:
2021-03-18 | 55 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Шаг 1: Добавить ваши образцы и контроли в лунки плашки. Ваши образцы содержат много разных белков и могут содержать или не содержать антиген. Подождите 5 минут, чтобы дать возможность всем белкам за счет гидрофобных взаимодействий связаться со пластиком плашки.
Шаг 2: добавить в лунку антитела против антигена – первичные антитела. Если в вашем образце присутствовал антиген, первичные антитела найдут его молекулы среди всех других молекул, и прочно свяжутся с ними.
Шаг 3: добавить соединенные с ферментом – пероксидазой вторичные антитела (антитела на антитела). Если в образце есть первичные антитела, связанные с антигеном, вторичные антитела свяжутся с ними.
Шаг 4: добавить субстрат пероксидазы, подождать 5 минут, и оценить результаты анализа. Если раствор в лунке станет синим, анализ положительный (в вашем образце присутствует исследуемый антиген). Если раствор останется бесцветным, анализ отрицательный.
Вопросы до лабораторной работы
Как иммунная система защищает нас от болезней?
Как доктора используют наш иммунный ответ, чтобы защитить нас от болезней?
Как вырабатываются антитела в вашем организме?
Как производятся антитела для ИФА?
Почему важна быстрая диагностика заболеваний?
Как расшифровывается ИФА?
Зачем в этом тесте используются ферменты?
Почему в тесте наряду с опытными образцами нужен положительный и отрицательный контроль?
Лабораторный протокол
Список для проверки рабочих мест. Одно рабочее место рассчитано на 4 учеников
Предмет | Содержимое | Количество | (ü) |
Желтые пробирки | Образцы для анализа (0.75 мл) | 4 шт (по 1 на ученика) | q |
Фиолетовая пробирка (+) | Положительный контроль (0.5 мл) | 1 шт | q |
Синяя пробирка (-) | Отрицательный контроль (0.5 мл) | 1 шт | q |
Зеленая пробирка (П.А.) | Первичные антитела (1.5 мл) | 1 шт | q |
Оранжевая пробирка (В.А.) | Вторичные антитела (1.5.мл) | 1 шт | q |
Коричневая пробирка (Субстрат) | Субстрат пероксидазы (ТМБ) 1.5 мл | 1 шт | q |
12-луночные стрипы | 2 шт | q | |
Микропипетка | 1 шт | q | |
Желтые носики для микропипетки | 10-20 шт | q | |
Одноразовые пластиковые пипетки | 1 шт | q | |
70-80 мл промывочного буфера в стакане | Фосфатно-солевой буфер (PBS), содержащий 0.05% Твин 20 | 1 шт | q |
Большая пачка бумажных полотенец | 2 | q | |
Черный фломастер (маркер) | 1 шт | q |
|
Выполнение ИФА
а. Чистым носиком перенесите по 50 мкл положительного контроля из фиолетовой пробирки в первые три («+») лунки.
б. Чистым носиком перенесите по 50 мкл отрицательного контроля из синей пробирки в следующие три («-») лунки.
в. Вместе с вашим напарником перенесите по 50 мкл ваших образцов в подписанные вашими именами лунки. Обязательно используйте чистый носик для каждого образца!
А. Переверните стрип, положите его на пачку бумажных полотенец и легонько постучите по дну. Убедитесь, что брызги не попали обратно в лунки.
Б. Выкиньте верхнее полотенце.
|
В. Чистой пипеткой заполните каждую лунку буфером для промывки из стакана, стараясь не переливать его через стенки. Для всех стадий промывки можно использовать одну и ту же одноразовую пипетку.
Г. Опять положите стрип на пачку полотенец и постучите по дну.
Д. Выкиньте 2-3 верхних полотенца (которые промокли).
Результаты
Обозначьте лунки на картинке так же, как лунки в вашем эксперименте и напишите «+» на тех лунках, которые стали синими и «-» - на тех, которые остались бесцветными.
Результат вашего анализа положительный или отрицательный? Объясните ваш ответ.
Вопросы к лабораторной работе
|
|
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
Археология об основании Рима: Новые раскопки проясняют и такой острый дискуссионный вопрос, как дата самого возникновения Рима...
История развития пистолетов-пулеметов: Предпосылкой для возникновения пистолетов-пулеметов послужила давняя тенденция тяготения винтовок...
Автоматическое растормаживание колес: Тормозные устройства колес предназначены для уменьшения длины пробега и улучшения маневрирования ВС при...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!