Ферменты бактерий, их классификация. Принципы конструирования питательных сред для изучения ферментов бактерий.

Классификация ферментов:

1. Биохимическая: Гидролазы, Оксиредуктазы, Трансферазы, Лиазы, Изомеразы, Лигазы. (ГОТ отЛИЛ)

2. В зависимости от локализации: а) эндоферменты – локализуются в клетке в цитоплазме или в периплазматическом пространстве либо связаны со структурами клетки б) экзоферменты – выделяются в окружающую среду.

3. В зависимости от постоянного синтеза: а) конституитивные – синтезируются с постоянной скоростью и присутствуют в клетке всегда в постоянных концентрациях. б) индуцибельные – их концентрация резко изменяется в зависимости от наличия или отсутствия субстрата во внешней среде.

4. В зависимости от субстрата: сахаролитические, протеолитические, липолитические.

Для изучения биохимических свойств бактерий используют дифференциально-диагностические среды

В состав дифференциально-диагностических сред входят:

- основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий,

- определенный химический субстрат, различное отношение к которому является диагностическим признаком,

- индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о расщеплении субстрата и образовании конечных продуктов.

Среда Эндо

Состав:

• питательный агар,

• лактоза,

• основной фуксин.

Среда имеет розовый оттенок.

Колонии бактерий, ферментирующих лактозу (лактозопозитивные), окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу (лактозонегативные), остаются бесцветными (цвета самой среды).

Среда Левина

Состав:

• питательный агар,

• лактоза,

• эозин и метиленовый синий.

Среда имеет коричневатый оттенок.

Колонии бактерий, ферментирующих лактозу (лактозопозитивные), окрашиваются в темно-синий цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу (лактозонегативные), остаются бесцветными (цвета самой среды).

Среда Плоскирева является одновременно дифференциально-диагностической и селективной

Состав:

• питательный агар,

• лактоза,

• нейтральный красный,

• соли желчных кислот,

• бриллиантовый зелёный.

Среда имеет розовато-желтоватый оттенок.

Колонии бактерий, ферментирующих лактозу (лактозопозитивные), окрашиваются в бруснично-красный цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу (лактозонегативные), остаются бесцветными.

Для идентификации чистой культуры по биохимическим свойствам изучают:

· Сахаролитические ферменты (свойства)

· Протеолитические ферменты (свойства)

Среды Гисса (пестрого ряда) - это жидкие или полужидкие питательные среды с углеводами (моносахариды: глюкоза, лактоза; дисахариды: мальтоза, сахароза; многоатомные спирты - маннит) и индикатором. По консистенции различают:

-жидкие (менее 0,3% агар-агара)

-полужидкие (0,3-0,7% агар-агара)

Индикаторы - это химические вещества, меняющие окраску при изменении рН среды.

Ферментация углевода может происходить одними бактериями до кислоты, другими - до кислоты и газа.

Образование кислоты при ферментации углевода определяют по изменению цвета индикатора.

Для улавливания газа в жидкой среде используют "поплавки" - стеклянные трубочки, запаянные с одного конца (при выделении газа поплавок всплывает); в полужидкой среде наблюдают разрыв (разрыхление) столбика среды пузырьками газа.

Жидкая среда Гисса

Состав:

1. Пептонная вода

2. Углевод

3. Индикатор Андреде (кислый фуксин + NaOH): в нейтральной среде - бесцветный или розовый

4. Поплавок

При ферментации углевода до кислоты среда становится малиново-красной, поплавок – на дне.

При ферментации углевода до кислоты и газа среда становится малиново-красной, поплавок всплывает.

Полужидкая среда Гисса

Состав:

1. Пептонная вода

2. 0,5 % агар-агара

3. Углевод

4. Индикатор ВР (водный голубой с розоловой кислотой): в нейтральной среде - бесцветный или розовый

При ферментации углевода до кислоты среда становится сине-фиолетовой, столбик остаётся монолитным.

При ферментации углевода до кислоты и газа среда становится сине-фиолетовой, столбик разрыхляется пузырьками газа.

Протеолитические свойства

1.Посев в столбик 10 – 20 % желатина: при наличии протеолитических ферментов происходит разжижение желатина (этот процесс идет сверху вниз).

2.Показателем глубокого расщепления белков служат аммиак, сероводород, индол.

Делают посев в МПБ, вещества обнаруживают с помощью индикаторных бумажек.

Аммиак определяют по посинению лакмусовой бумажки.

Н2S определяют с помощью фильтровальной бумажки, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. Н2S взаимодействует с уксуснокислым свинцом, образуя сульфид свинца, в результате чего бумага чернеет.

Индол выявляют с помощью индикаторной бумажки, смоченной раствором щавелево-кислого Na, в случае образования индола бумажка розовеет.

 

29. Основные принципы культивирования бактерий. Культуральные свойства бактерий.

Посев доставленного материала на питательные среды

Для некоторых видов материалов осуществляют предварительную подготовку их для посева, а затем инкубацию посевов для всех видов при условиях, соответствующих свойствам искомых бактерий.