Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...
Состав сооружений: решетки и песколовки: Решетки – это первое устройство в схеме очистных сооружений. Они представляют...
Топ:
Теоретическая значимость работы: Описание теоретической значимости (ценности) результатов исследования должно присутствовать во введении...
Выпускная квалификационная работа: Основная часть ВКР, как правило, состоит из двух-трех глав, каждая из которых, в свою очередь...
История развития методов оптимизации: теорема Куна-Таккера, метод Лагранжа, роль выпуклости в оптимизации...
Интересное:
Что нужно делать при лейкемии: Прежде всего, необходимо выяснить, не страдаете ли вы каким-либо душевным недугом...
Аура как энергетическое поле: многослойную ауру человека можно представить себе подобным...
Национальное богатство страны и его составляющие: для оценки элементов национального богатства используются...
Дисциплины:
2022-10-05 | 30 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
a) Одним из самых распространенных методов культивирования является метод тканевых и клеточных культур.
Культуры тканей стали активно использоваться с 50-х годов, когда в практику вошли антибиотики (прекратились бактериальные проросты ткани),были разработаны синтетические питательные среды, а главным стимулом послужило выявление ЦПД у вирусов.С 1954 года стали использовать метод однослойных культур тканей. Они используются в различных целях: для выделения вирусов, для их идентификации, для постановки реакций нейтрализации, гемадсорбции, для изучения динамики накопления вирусов, развития ЦПД, изучения репродукции вирусов и т.д.
Существует 3 типа тканевых культур:
· первично-трипсинизированные;
· полуперевиваемые;
· перевиваемые.
Первично-трипсинизированные культуры ткани получают из различных органов и тканей: кожно-мышечной ткани эмбрионов человека, куриных, мышиных, из почек различных эмбрионов, из легких, из роговицы глаза кролика и т. д.
Этапы получения культуры клеток: измельчение источника; обработка трипсином; освобождение от детрита; стандартизация числа клеток, взвешенных в питательной среде с антибиотиками; разлив в пробирки или флаконы.
Полуперевиваемые культуры – это штаммы диплоидных клеток, способные вне организма выдерживать 40-50 пассажей благодаря двойному набору хромосом, после чего отмирают.
Перевиваемые клетки существуют вне организма очень долго. Они получены из нормальных тканей, из злокачественных эмбриональных – их сотни линий, но они не могут быть использованы для приготовления вакцин, так как способны вызывать опухоли. Почти все они эпителиоподобные, но есть и фибропластические. На культуре тканей размножается подавляющее большинство вирусов. Для выращивания к/ткани необходимы питательные среды.
|
b) Простым, весьма экономичным и эффективным методом является культивирование вирусов в куриных, реже утиных, эмбрионах.
Эмбрионы для выделения вирусов применяют с 1930 года. Преимущества: это закрытая полость, свободная от микрофлоры и вирусов. У эмбрионов не образуются антитела, как в организме лабораторных животных, они доступны и дешевы. Они используются для выделения вирусов, титрования их, приготовления вирусных антигенов. Это хорошая модель для культивирования вирусов гриппа, герпеса, оспы, паротита, некоторых вирусов эн-цефалита. Используются эмбрионы разного возраста (от 5-7-дневного до 11-13-дневных) и разные методы заражения: в амнион, на хорион-аллантоисную оболочку – ХАО, в хорион-аллантоисную полость, в желточный мешок.
c) Редким, но иногда необходимым является биологический метод, в основе которого лежит инфицирование чувствительных лабораторных животных.
В основном используются белые мыши разного возраста, обезьяны (для вируса кори). При накоплении вирусов в организме животных мы можем также оценить этапы развития клинической картины заболевания, патоморфологические и патогистологические изменения в органах и тканях.
2-й этап. Индикация вирусов.
В культуре ткани:
Регистрация внутриклеточных включений, элементарных телец (см. Экспресс-диагностику) и ЦПД разных вирусов на культуру ткани:
При размножении вируса в культуре ткани происходят различные изменения, которые в конечном итоге приводят к гибели клетки. Сморщивание клеток, пикноз ядер, скручивание их, образование небольших очагов этих изменений наблюдается при энтеровирусной инфекции, полиовирусы тоже дают очень быстро ЦПД. Вирус может размножаться и не вызывать заметных изменений в клетке, тогда прибегают – к окрашиванию монослоя гематоксилин-эозином или другим гистохимическим методом и изучают тонкие изменения в ядрах и цитоплазме и т.д.
|
Реакция гемадсорбции: Все вирусы, обладающие гемагглютинирующими свойствами, способны вызывать гемадсорбцию. Если к культуре клеток, зара-женной вирусом добавить эритроциты, то они могут адсорбироваться на клетках, пораженных вирусом. Этот метод может служить для индикации вируса. Данный феномен наблюдается с вирусами клещевого энцефалита, гриппа, парагриппа, кори, паротита и т. д.
Реакция гемагглютинации: Вирусы, обладающие гемагглютинирующими антигенами, способны вызывать склеивание эритроцитов в пробирке или в лун-ках планшета. Агглютинацию эритроцитов могут давать некоторые вирусы, содержащие комплементсвязывающие антигены. В отличие от гемадсорбции, для гемагглютинации берется вируссодержащая жидкость (культуральная среда, амниотическая или аллантоисная жидкость, брюшинный экссудат и т.д.). Взвесь вирусов соединяется с взвесью эритроцитов (куриных, бараньих, человеческих) и наблюдается феномен гемагглютинации на стекле или в объеме.
Цветная проба Солка: Самый простой метод индикации вирусов в культуре клеток. Сущность его заключается в визуальной оценке окраски питательной культуральной среды. Большинство питательных сред для культур тканей содержит индикатор – феноловый красный. В нейтральной стерильной среде индикатор имеет красный цвет. Если среда по каким-либо причинам принимает щелочную реакцию, то индикатор становится малиновым. В кислой среде феноловый красный становится желтым. При жизни клеток в культуре они выделяют в питательную среду кислые продукты своего метаболизма, вызывая изменение цвета индикатора с красного на желтый уже на третьи сутки. При развитии вируса в культуре клеток он нарушает функционирование клеток вплоть до их гибели. При это мы отмечаем задержку изменения цвета среды более 6 дней, что и позволяет сделать заключение о присутствии вируса в культуре.
В эмбрионах:
Образование бляшек на хорион-аллантоисной оболочке.
Помутнение амниотической жидкости.
Реакция гемагглютинации: Для гемагглютинации берется вируссодержащая жидкость (амниотическая или аллантоисная жидкость). Взвесь вирусов соединяется с взвесью эритроцитов (куриных, бараньих, человеческих) и наблюдается феномен гемагглютинации на стекле или в объеме.
В организме лабораторного животного:
Оценка клинических проявлений инфекции.
Оценка патоморфологических и патогистологических изменений.
|
|
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
Археология об основании Рима: Новые раскопки проясняют и такой острый дискуссионный вопрос, как дата самого возникновения Рима...
Особенности сооружения опор в сложных условиях: Сооружение ВЛ в районах с суровыми климатическими и тяжелыми геологическими условиями...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!