Методы стерилизации питательных сред и лабораторной посуды.

Основываясь на влиянии внешних условий на микроорганизмы, в микробиологической практике разработан ряд приемов, приводящих микроорганизмы к гибели. Одним из таких приемов является стерилизация.

Под стерилизацией (обеспложиванием) понимают полное уничтожение микроорганизмов и их спор в питательных средах, посуде, на инструментах и других предметах лабораторного оборудования. Для этого наиболее часто пользуются воздействием высокой температуры.

Стерилизация обжиганием на пламени горелки

Небольшие стеклянные (палочки, шпатель) и металлические предметы (игла, петля, пинцет, скальпель) проводят несколько раз через пламя горелки. Стерилизация достигается обугливанием находящихся на их поверхности микроорганизмов. Обжиганием на пламени пользуются для стерилизации поверхности ватных пробок, горла посуды.

Стерилизация кипячением

Стерилизацию металлических инструментов и резиновых трубок проводят кипячением. Так как споры некоторых бактерий сохраняют жизнеспособность при кипячении в воде в течение нескольких часов, то рекомендуется стерилизацию кипячением проводить в 2%-ном растворе карбоната натрия в течение 10 мин. В этих условиях споры погибают.

Стерилизация сухим жаром

Сухим жаром стерилизуют в основном стеклянную посуду. При этом пробирки, колбы предварительно закрывают ватными пробками. Чтобы избежать заражения простерилизованных предметов из воздуха, их перед стерилизацией заворачивают в оберточную бумагу, а вынимают только перед работой.

Пипетки заворачивают полоской бумаги шириной 2,5—3,0 см. Предварительно в конец пипетки, который берут в рот, вкладывают ватный тампон. Капиллярный конец пипетки кладут на полоску бумаги под углом 45° и заворачивают по спирали.

Чашки Петри заворачивают в бумагу в форме квадрата. Чашку Петри помещают на середину листа, загибают его с двух противоположных сторон кверху, края дважды загибают швом. Два свободных конца загибают вниз. При таком обертывании у чашек легко различать верх и низ. Подготовленную таким образом посуду помещают в сушильный шкаф, в котором нагревают ее при температуре 160—170 °С в течение 2 ч. При таком нагревании погибают не только бактерии, но и их споры. Температуру в сушильном шкафу выше 175°С допускать не следует, так как при этом ватные пробки буреют, а бумажная обертка становится ломкой.

Стерилизация текучим паром. Дробная стерилизация или тиндализация

Питательные среды (молоко, солод, желатин), воду, резиновые трубки и другие предметы, портящиеся от действия сухого жара, подвергают стерилизации текучим паром. Стерилизацию текучим паром производят в кипятильнике Коха или в автоклаве с открытым вентилем. Воду в них доводят до кипения, и образующийся пар обтекает стерилизуемые объекты. Температура стерилизуемых питательных сред достигает 100°С. Нагревание в течение 30—45 мин приводит к гибели вегетативных клеток бактерий, но споры их не погибают. На следующий день нагревание повторяют. При этом погибают вегетативные клетки, развившиеся из спор. Для обеспечения полной стерильности жидкость оставляют еще на сутки и снова повторяют нагревание. Такую стерилизацию называют дробной или тиндализацией.

Пастеризация

В основе пастеризации лежит нагревание жидкостей до температуры меньше 100°С. Цель её — уничтожение неспороносных бактерий в жидкостях, теряющих питательные свойства при кипячении (молоко, пиво, вино и др.). Осуществляется пастеризация нагреванием жидкостей при 60 °С в течение 30 минут или при 75оС в течение 15 минут, или при 80°С в течение 10 минут.

Холодная стерилизация

Органические жидкости, не выносящие нагревания, освобождают от бактерий, пропуская через стерильные мелкие пористые фильтры. Эти фильтры называют бактериальными фильтрами. Они задерживают микроорганизмы.

Бактериальные фильтры имеют разные номера. Фильтры № 1 имеют средний диаметр пор 0,3 мкм, они наиболее надежны. Фильтры № 5 имеют самые большие отверстия пор, диаметром 1,2 мкм.

Перед употреблением мембранные фильтры стерилизуют кипячением. Фильтры помещают в теплую дистиллированную воду и кипятят 30 минут, меняя ее 2-3 раза.

Стерилизация в автоклаве паром под давлением

Наиболее падежный и универсальный метод стерилизации питательных сред и материалов — стерилизация их насыщенным паром под давлением. Производят ее в автоклаве, в котором стерилизуемые объекты нагревают чистым насыщенным паром при давлении выше атмосферного. Когда насыщенный пар встречается с более холодным объектом, он конденсируется, превращаясь в воду. При конденсации выделяется большое количество теплоты, и температура стерилизуемого объекта быстро повышается.

Полная стерилизация питательных сред при 120°С и давлении 1 атм обеспечивается нагреванием в течение 20 мин.