Парвовирусная инфекция гусей и мускусных уток (вирусный энтерит гусей)

 

Парвовирусная инфекция гусей и мускусных уток (синонимы: болезнь Держи, язвенный некротический энтерит, вирусный миокардит, грипп гусей, вирусный гепатит гусей, чума гусей, вирусный энтерит гусей, инфлюэнца гусей, парвовирусный гепатит гусей и мускусных уток, вирусный миозит гусей, гепато-нефритный асцит) – контагиозная болезнь гусят и мускусных утят, характеризующаяся прогрессирующим исхуданием, поражением желудочно-кишечного тракта, гепатитом и гибелью молодняка до 100%.

Историческая справка. Впервые болезнь зарегистрирована в Нидерландах (1961), затем в Польше (1962), Венгрии (1964), Германии, Италии, Франции, России (Контримавичус Л.М., 1978) и других странах мира.

На конференции Всемирной научной ассоциации по болезням птиц предложено название «болезнь Держи» (1974). В начале 90-х годов ХХ века болезнь приобрела другое название - парвовирусная инфекция гусей и уток

Огромный и неоценимый вклад в изучение вирусного энтерита гусей внесла доктор ветеринарных наук Контримавичус Лия Михайловна (ВИЭВ). Она впервые в 1963 году показала, что одной из причин высокой смертности молодняка гусей в СССР является неизвестная болезнь, этиология которой не изучена (кстати, и в других странах). В то время отсутствовали какие-либо публикации о подобной болезни, за исключением сообщения Z. Wachnik и I. Novacki (1962) о вспышке энтеровирусного гепатита утят среди гусят в Польше.

В 1978 году Контримавичус Л.М. официально зарегистрировала новую инфекционную болезнь гусей под предварительным названием «вирусный энтерит». Она установила роль парвовируса как этиологического фактора, изучила морфологические, биологические, антигенные, иммуногенные и многие другие свойства возбудителя. Были изучены эпизоотологические особенности, клинические проявления и патологоанатомические изменения, разработаны методы диагностики, в том числе и серологические - РН и РДП, предложено применение сыворотки гусей-реконвалесцентов для профилактики болезни. Вместе с коллегами Контримавичус Л.М. разработала систему мер борьбы с инфекцией, включающую в себя комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на предупреждение и ликвидацию вирусного энтерита в хозяйствах.

Большую научную и практическую работу по данной болезни провели Фадин В.С., Макогон В., Макушко В., Трефилов Б., Иващенко В., Щеглова И., Надточей Г., Фадель М. и другие.

Экономический ущерб. Снижение веса птицы, недополучение кондиционного мяса, высокий уровень летальности, а также финансовые затраты, использованные на ликвидацию болезни, составляют основу ущерба.

Возбудитель. Парвовирус относится к роду Parvovirus подсемейства Parvoviridae. Вирионы безоболочечные, пепломеры отсутствуют. Изометрические частицы имеют кубическую симметрию и размер 18-26 нм. Это один из самых мелких вирусов птиц. Неуклеокапсид содержит односпиральную линейную ДНК. Липиды, углеводы и ферменты отсутствуют.

Фадель М.М. (1989) сообщил о наличии трех структурных полипептидов парвовируса штамма ЛИВ-22 – VP-1, VP-2 и VP-3, имеющих молекулярную массу 115, 80 и 38.5 KD, соответственно.

Присутствующие в вирионах белковые компоненты индуцируют выработку преципитирующих и вируснейтрализующих антител.

Парвовирус устойчив к воздействию эфира, хлороформа, дезоксихолата натрия и додецилсульфата натрия, трипсина и гидроксиламина и 0,25% раствора фенола. Формальдегид в концентрации от 0,5 до 1% инактивирует вирус в течение 15 минут. Возбудитель устойчив к температуре 56⁰С в течение 3 часов, к 70⁰С - 10 минут, а также рН 3,0.

Вирус репродуцируется в утиных (мускусных) и гусиных эмбрионах после инокуляции его в аллантоисную полость или наслоения на ХАО. На третьем пассаже инфекционный титр достигал 7,0 lg ИЭД₅₀/0,2 см³. Некоторые исследователи отмечают репликацию вируса и его ЦПД в культурах клеток фибробластов утиных (мускусных) и гусиных эмбрионов.

Вирус не агглютинирует эритроцины уток, кур, гусей, лошадей, крупного рогатого скота, овец, кошек, морских свинок, белых мышей и человека с I (0) группой крови.

В 1978 году Контримавичус Л.М. и др. изолировали от больных утят штаммы вируса БС, Ю и КЛ, отличающиеся от других штаммов возбудителя более широким спектром патогенности и меньшей резистентностью к нагреванию. К ним чувствительны куриные, гусиные и утиные эмбрионы. Активность штаммов составляла 4,84, 6,13 и 6,21 lg ЭЛД₅₀/0,2 см³, соответственно. Они инактивировались при 60⁰С в течение 15 минут. Взрослые гуси, куры, утки, цыплята и утята были резистентны к этим изолятам. Другие изоляты – ЛИ и ДК, выделенные также в России, репродуцировались только в организме гусят и гусиных эмбрионов. Эпизоотический вирус штамм ЛИ вызывает гибель 1-14-суточных гусят спустя 3-7 суток после введения 1000 ЭЛД₅₀. Он размножается в 8-10-суточной инкубации эмбрионах гусей после заражения в амнион- или аллантоисную полость, накапливаясь в аллантоисной жидкости до 4,0 – 4,5 ЭЛД₅₀/см³. Эмбрионы чаще гибнут на 2-5 сутки после введения парвовируса.

Аттенуированный парвовирус штамм ЛИВ не вызывает гибели гусят и гусиных эмбрионов. Размножается в культуре клеток 12-14-суточных гусиных эмбрионов с проявлением ЦПД через 72-96 часов после внесения его в не полностью сформировавшийся монослой культуры. Накопление вируса достигает 4,5-5,2 lg ТЦД₅₀.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях заболевают мускусные и дикие утки до 8-недельного, а гусята – до 6-месячного возраста. Вирус передается вертикально и горизонтально. Проникновение в организм здоровой птицы происходит через слизистую оболочку дыхательных органов и желудочно-кишечный тракт. Содержание разновозрастной птицы в одном помещении активно способствует распространению болезни. Переболевшая птица остается вирусоносителем в течение нескольких лет.

Течение и симптомы болезни. Клинические признаки парвовирусного энтерита описал Красс в 1966 году, затем более детально они изучены Д. Держи (1969) в Венгрии и Контердом (1972) во Франции. Они выявили у мускусных утят острую, подострую и латентную формы болезни.

В клиническом течении болезни у гусят и утят имеются некоторые различия.

У гусят острая форма наблюдается в возрасте 1-6 дней. После проявления основных признаков - уменьшения веса и водянистой диареи – погибает до 60-100% поголовья. Тогда как данная форма болезни у молодняка уток протекает в 8-15-суточном возрасте с теми же симптомами - диареей, нарушением координации при движении, резким исхуданием и массовой гибелью заболевших особей.

Подострую форму у гусят регистрируют в 15-22-суточном возрасте с признаками отставания в росте и развитии. В 70-80% случаев отмечают выздоровление молодняка.

У больных утят подострая форма отмечена в 2-5, а чаще - в 2-3-недельном возрасте. Клинические признаки развиваются в течение 7-14 дней. У птицы отмечают слабость, конъюнктивит, жажду, затрудненное дыхание, диарею и задержку роста. Утята становятся меланхоличными и недоразвитыми. Наряду с нормальными по росту утятами в стаде легко обнаружить кожистых маловесных утят без перьевого покрова с нормально развитыми ногами и шеей. Летальность составляет 20-30%.

Латентную форму регистрируют среди утят 6-8-недельного возраста. Отмечают снижение аппетита, замедление роста и снижение веса у 10-15% поголовья. Присутствуют характерные для инфекции признаки – полная потеря перьев и энтерит у 20-30% больных. Летальность колеблется от 2 до 10%.

Парвовирус в сочетании с вирусом ССЯ-76 значительно снижает массу тела утят и повышает уровень гибели. У больной птицы наблюдают выпадение пуха и перьев, а также прогрессирующее истощение. Смертность может достигать 40-97%. При заражении утят 6-недельного возраста указанной ассоциацией возбудителей средний вес тела не превышал 900г, тогда как у инфицированных только парвовирусом –1100г (Стойков, 1969; Kakala et al., 1990).

Патогенез. Не изучен.

Патологоанатомические изменения. Они соответствуют клинической форме болезни. У утят при острой форме преимущественно отмечают отчетливое исхудание тела, фибринозный перикардит, катаральный или катарально-геморрагический энтерит. Печень и селезенка увеличены и кровенаполнены. Нередко можно отметить некротические очаги в селезенке.

При подострой форме у погибших особей печень, почки и сердце увеличены и обесцвечены. Перикардиальная и асцитная жидкости окрашены в желтый цвет. Печень и другие внутренние органы покрыты желатиноподобным слоем фибрина.

В трупах гусят при острой форме отмечают истощение, очаговое обесцвечивание печени и миокарда, кровенаполнение в почках.

После подострого течения обнаруживают истощение, увеличение и обесцвечивание мышечной ткани сердца, паренхимы печени и почек, большое количество асцитной жидкости в брюшной полости. Брюшина окрашена в желтый или желто-коричневый цвет. Все абдоминальные органы покрыты толстым (до 1 мм) слоем фибрина.

Диагноз и дифференциальная диагностика. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патоморфологических изменений и результатов лабораторных исследований.

Фадель М.М. (1989) испытал метод электронной микроскопии (ЭМ) в качестве экспресс-метода выявления и идентификации вируса энтерита. Используя метод негативного контрастирования и гипериммунные сыворотки в разведениях, а также патматериал от больных и павших от энтерита гусят, он получил результаты, позволяющие использовать ЭМ в индикации возбудителя болезни.

Для вирусовыделения используют пробы кишечника, сердца, печени и селезенки больных и павших утят. Вирусосодержащий надосадок 10-20% суспензии пораженных органов объединяют в соотношении 4:1 с эфиром или хлороформом, встряхивают соответственно 2 часа или 15 минут, затем осветляют при 800-1000 g в течение 15-20 минут, обрабатывают антибиотиками и вводят внутримышечно утятам 3-21-суточного возраста, а также утиным эмбрионам 9-13-суточной инкубации в аллантоисную полость или наносят на ХАО.

Дополнительно используют гусят, гусиные эмбрионы и первичные культуры клеток фибробластов утиных и гусиных эмбрионов. Срок наблюдения за птицами и эмбрионами - 40 и 14-16 суток, культурой клеток – 10 дней. В первые 3-4 дня у погибших утят и гусят могут отсутствовать характерные для болезни патологоанатомические изменения. Тогда как у эмбрионов, павших на 2-7 сутки, наблюдают отеки подкожной клетчатки и ХАО, точечные и очаговые кровоизлияния в коже. На первом пассаже перед выводом гусят и утят можно обнаружить увеличение головы и кровоизлияние в мозг (геморрагический энцефалит).

Дифференциацию выделенного парвовируса от других возбудителей болезней уток проводят с применением РН и РДП, а также метода флуоресцирующих антител.

Фадель М.М. и др. (1989) разработали сэндвич-вариант ИФА для выявления специфического антигена возбудителя энтерита гусей. Полистироловые панели сенсибилизировали сывороткой гусей с активностью до 1:1280. После промывания и блокирования мест неспецифических связей вносили испытуемые заведомо положительные и отрицательные антигены в последовательных разведениях. После инкубации и промывки на антигены наслаивали кроличью гипериммунную сыворотку в разведении 1:500, а затем конъюгат ослиных антикроличьих иммуноглобулинов в рабочем разведении. В качестве субстрата использовали ABTS –1 мг/мл в присутствии 0.003% Н₂О₂, растворённые в 0,1 М цитратно-фосфатном буфере рН 4,0. Реакцию останавливали 0,1М раствором лимонной кислоты с добавлением 0,01% раствора азида натрия. 

Обработанный метод обладал достаточной специфичностью и чувствительностью, антиген парвовируса в пробах органов гусят, зараженных патогенным вирусом, выявляли с 3 по 9 сутки, а предел чувствительности был равен 8.0-8.5 нг/мл антигена. Совпадение результатов по чувствительности ЭМ и ИФА составляла 81.5%.

Для ретроспективной диагностики применяют РН в утиных эмбрионах или культуре клеток утиных фибробластов. Специфические антитела в сыворотке крови переболевших утят могут быть обнаружены в титрах 1:32-1:64. Проведена сравнительная оценка эффективности РН и РДП при обнаружении специфических антител в сыворотке крови уток и гусей после переболевания или их вакцинации. Преципитирующие антитела были выявлены у 45% вакцинированных и 20% переболевших гусей. Тогда как вируснейтрализующие антитела обнаружены у 100% вакцинированной птицы (гусей и уток) и у 47% переболевших гусей. Фадель М.М. (1989) предложил два метода - непрямой и конкурентный ИФА для выявления специфических антител к парвовирусу. При обработке первого метода для адсорбции на планшете был использован и антиген культурального парвовируса штамм ЛИВ в концентрации 10 нг/лунку, а также антивидовой конъюгат в рабочем разведении 1:1000, а также тщательное промывание лунок тремя сменами ЗФР с 0,1% Твин-80 и дистиллированной водой. Установлено, что метод специфичен с РН  и имеет корреляцию r, равную 0,8).

При обработке второго (конкурентного) метода ИФА для сенсибилизации лунок использовали кроличью гипериммунную сыворотку к парвовирусу, которую предварительно обрабатывали тканевым нормальным антигеном печени гусей. Затем вносили в лунки планшета специфический антиген в необходимом разведении, исследуемые в разведениях сыворотки, потом специфическую сыворотку и коммерческий пероксидазный конъюгат антикроличьего иммуноглобулина.

Конкурентный и непрямой методы ИФА имели коэффициент корреляции 0.9 (р < 0,001). Оба метода превышали по чувствительности РН и коррелировали с последней при r=0.8; р < 0,001. Титры антител больных птиц составляли 1:320 и выше, у переболевших более 1 года назад от нуля до 1:1600. Вакцинированная птица через 21 день имела уровень антител в пределах 1:32-1:64. Полученные результаты на 98% совпадали с результатами РН на культуре клеток фибробластов.

РДП по чувствительности заметно уступала другим методам и выявляла не более 16% заведомо положительных сывороток с титрами в ИФА 1:1280 и выше.

Использование в РДП концентрированного очищенного антигена с титром 8,0 lg ТЦД₅₀/см³, а также обработка агара антивидовыми глобулинами способствовала повышению чувствительности метода в 2,5 раза.

Болезнь Держи необходимо дифференцировать от астровирусной инфекции, чумы, коронавирусной инфекции и хламидиоза.

Астровирусная инфекция - болезнь утят до 6-недельного возраста. Характеризуется образованием обширных некрозов гепатоцитов и клеток поджелудочной железы, признаками катарально-геморрагического энтерита и нефрита. Возбудитель - звездоподобной формы вирус, присутствующий в большой концентрации в содержимом кишечника. Репродуцируется в утиных и куриных эмбрионах, индуцируя геморрагический гепатит. Выделенный вирус идентифицируют в РН.

Чума - герпесвирусная болезнь многих видов птиц разного возраста. Возбудитель имеет размеры от 90 до 181 нм. Чувствителен к липорастворителям. Эпизоотические штаммы герпеса репродуцируются в утиных, тогда как вакцинные - в куриных эмбрионах и их культуре клеток фибробластов. Характерные признаки болезни: множественные кровоизлияния в паренхиматозных органах, под серозной оболочкой или на слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта. Диагноз на чуму ставят по результатам вирусовыделения, обнаружения специфического антигена возбудителя методами РДП, МФА и ИФА, а также выявления специфических антител в сыворотке крови птицы. Для профилактики болезни применяют вакцины, обладающие высокой эффективностью.

Хламидиоз - болезнь 132 видов птиц, человека и млекопитающих. Течение - острое и латентное. Первую форму чаще регистрируют у молодняка уток до 6-8-месячного возраста. Клинические признаки не характерны. У некоторых особей перед гибелью наблюдают параличи ног и крыльев. Среди патологоанатомических изменений более отличительны - фибринозный плеврит, аэросаккулит и перикардит. Печень увеличена, шафранно-желтого цвета. Постоянно наблюдают энтерит и наличие множественных очагов некроза в тканях кишечника, печени и селезенки. Возбудитель имеет размеры от 25 до 450 нм, чувствителен к воздействию эфира и хлороформа. Выявление хламидий проводят введением исследуемого материала в куриные эмбрионы крысам, белым мышам, кроликам, морским свинкам или в культуры клеток. Мазки-отпечатки паренхиматозных органов куриных эмбрионов, а также монослой культуры клеток фиксируют на стеклах, окрашивают акридным оранжевым или по методу Романовского- Гимзы и просматривают в микроскопе для обнаружения цитоплазматических включений и возбудителя. Дополнительно диагноз подтверждают кожной пробой и по нарастанию уровня специфических антител в крови уток-реконвалесцентов.

Коронавирусная болезнь. Возбудитель полиморфный, имеет размер от 70 до 300 нм. Из клинических признаков паралич ног наиболее постоянен. В трупах утят после острой и подострой форм течения болезни чаще наблюдают кровенаполненность и темно-вишневый цвет паренхиматозных органов, отсутствие некротических очагов, обесцвечивания органов и фибринозного слоя на серозной оболочке. Выявление возбудителя проводят введением исследуемого материала утиным и куриным (СПФ) эмбрионам, постановкой РДП, РГА и ИФА, а также электронной микроскопией.

Синдром инфекционной атрофии клюва - парвовирусная болезнь уток разных пород, в том числе и мускусных. Гуси не болеют. Болезнь характеризуется острой формой и массовой гибелью. Возбудитель не репродуцируется в куриных эмбрионах. Переболевшие утята приобретают укороченный клюв, сохраняющийся до одномесячного возраста.

Иммунитет. В естественных и экспериментальных условиях переболевшие утята становятся иммунными и не восприимчивыми к заболеванию в течение 5-8 месяцев. После парентерального введения вакцинного штамма вируса у птицы отмечают выработку специфических антител, которые после инъекции можно выявить в сыворотке крови через 14-21 день. Установлено, что специфические антитела передаются трансовариально переболевший молодняк уток и гусей более устойчив к заболеванию, чем другие особи, полученные от неиммунного маточного поголовья.

Лечение. Не проводится.

Профилактика и меры борьбы. Мероприятия по профилактике болезни Держи включают: строгое поддержание надлежащего ветеринарно-санитарного режима на фермах мускусных уток и гусей, а также проведение вакцинации птицы. Для этого во Франции для профилактики болезни у гусят и уток применяют вакцину “Пальмивакс” из аттенуированного на утиных эмбрионах (15 пассажей) и культуре клеток утиных фибробластов (70 пассажей вируса). Парентеральное введение вакцины в четырехнедельном возрасте и перед периодом яйцекладки позволяет блокировать вертикальную передачу эпизоотического вируса, приводит к исчезновению классической формы болезни Держи и улучшению эксплуатационных качеств утят. В Венгрии и Голландии вакцинируют родительское стадо дважды: за 12 и 6 недель до начала периода яйцекладки, что обеспечивает более выраженную защиту молодняка.

Cheng Yonguan, Hu Qilin et al. (Китай, 1987) методами биотехнологии из парвовируса штамм Putian MPV получили аттенуированный вакцинный штамм MPV-P1, не патогенный для односуточных мускусных утят и пригодный для иммунизации. Вакцина, приготовленная на основе штамма MPV-P1, адаптированного к культуре клеток MDEF, индуцировала образование антител у уток на 7 сутки, с пиком на 21-30 сутки. Устойчивость к заболеванию сохранялась в течение 190 суток после внутримышечной инъекции биопрепарата.

Вакцина в лиофилизированном состоянии сохраняла иммуногенность при температуре плюс 22⁰С в течение 6 месяцев, при плюс 4-8⁰С и минус 20⁰С - 12 месяцев.

Вакцина безвредна, т.е. не провоцирует местную реакцию и клинические признаки болезни.

В неблагополучных хозяйствах России и других странах СНГ для профилактики болезни гусей используют живую вирусвакцину из штамма П-75 ВНИВИП.

Вакцину готовят на основе суспензии клеток гусиных эмбрионов, инфицированных аттенуированным парвовирусом. Гусят, полученных от невакцинированных птиц, прививают в 1-2-суточном возрасте, а полученных от вакцинированных - в 20-суточном возрасте. Иммунитет достигает напряженности к 10 дню после введения вакцины и продолжается до 3 месяцев. Гусей вакцинируют за 50 дней до начала яйцекладки, двукратно с интервалом в 20 дней. Повторную ревакцинацию проводят через 4 месяца. Для изучения антигенной активности вакцины Иващенко В.Г. (1986) предложил РНГА с использованием антигенного диагностикума на основе сначала формализированных, затем танизированных эритроцитов барана. В качестве сенситина были взяты вируссодержащие аллантоисная жидкость или поддерживающая среда культур клеток с активностью 5,0 lg ЭЛД₅₀ и 5,8 ТЦД₅₀/см³, соответственно.

Для выявления специфических антител отбирали пробы сывороток крови гусят 7-120-суточного возраста, полученных из яиц гусынь, дважды иммунизированных вакциной с активностью вируса не менее 6,5 lg ТЦД₅₀. (см. рис. 8)

Автор установил, что по чувствительности РНГА не уступает РН; совпадение её результатов с результатами РН составило 82%.

Таблица 21