Основные дифференциальные признаки бактерий E. Coli, Citobacter, Klebsiella, Enterobacter, Proteus и Salmonella

Морфологи-ческие и биологичес-кие признаки	E. coli	Citrobac-ter	Kleb-siella	Entrobacter			Proteus		Sal-mo-nella
				E. cloa-sae	E. aere-ge-nes	E. lique faci-lus	P.vul-garis	P. mira-bilis
Подвижность	+ или -	+ реже-	-	+	+	+	+	+	+ реже -
Глюкоза	+	+	+	+	+	+	+	+	+ кг (си-няя)
Лактоза	+ или -	+ или -	+	+	+	(+)	-	-	- (сл. розо-вая)
Сахароза	+ или -	+ или -	-	+	+	+	+	+ или -	- (сл. розо-вая)
Маннит	+	+	+	+	+	+	-	-	+ кг (си-няя)
Дульцит	+ или -	+ или -	+ или -	-	-	-	-	-	+ или -
Адонит	-	-	+	+или-	+	-	-	-	-
Инозит	-	+ или -	+	-	+	(+)	-	-	+ или -
Индол	+ реже-	+ или -	-	-	-	-	+	-	-
Сероводород	+ реже-	+ или -	-	-	-	-	+	+	+ реже-
Реакция с метилротом	+	+	-	-	-	+ или -	+	+	+
Реакция Фогес-Проскауэра	-	-	+	+	+	+ или -	-	+ или -	-
Усвоение цитратных и аммонийных солей	-	+	+	+	+	+	+ или -	+ или -	+
Разложение мочевины	-	+ или -	(+)	-	-	-	+	+	-
Разжижение желатины	-	-	-	(+)	+ или -	+	+	+	+ или -
Мальтоза	+

E. coli чаще изолируют из паренхиматозных органов (печень, легкие, почки), костного мозга, кишечника, желчного пузыря, крови, яичных фолликул и т.д. отобранных не позднее 6 часов после гибели уток. При отсутствии возможности быстрой доставки отдельных органов или их частей материалы консервируют, помещая в стерильный раствор глицерина или 10% раствор хлористого натрия.

Патологический материал отбирают не ранее, чем через 5 суток после обработки птицы антибиотиками или другими антибактериальными препаратами.

Выделение и идентификацию кишечной палочки проводят в следующем порядке:

1. Посев материала на жидкие (МПБ, ТСБ, ТГС) и плотные - МПА, Эндо или Левина среды, а также среды обогащения.

Из плотных сред чаще используют агар Эндо, агар Плоскирева, агар виспут-сульфитный, агар с эозинметиловым синим. Содержимое кишечника или фецес разводят 1:100 и вносят в селективно-дифференциальные среды – среды Эндо, Плоскирева и эозин-метиловый синий.

Отмечено, что кровь более пригодна для высева E. coli только при висцеральном колибактериозе с первых часов болезни. При септической форме концентрация бактерий может достигать 100 клеток в 1 мл крови.

Посевы выращивают при 37°C в течение 18-20 часов (на висмут-сульфитном агаре – 48 часов).

На МПБ рост E. coli вызывает равномерное помутнение с образованием рыхлого осадка. Типичные колонии эшерихий на плотной среде имеют округлую форму (S-форму) с выпуклой поверхностью. На среде Эндо колонии гладкие, с ровными краями, малинового цвета, на среде Левина – черного или фиолетового цвета.

2. Выделение чистых культур E.coli, изучение морфологических и тинкториальных свойств.

Две типичные S-формы колоний пересевают в МПБ, откуда через 4-6 часов бактерии переносят:

· в среды Гисса для изучения биохимических свойств и определения родовой принадлежности микроорганизма;

· 0,2-0,3% полужидкий МПА для выявления подвижности и дифференциальные среды;

3. Определение патогенности E. coli.

Готовят взвеси бактерий на ЗФР рН 7,2-7,6 для заражения белых мышей, морских свинок, утят восприимчивого возраста (1-3 и 40-50 суток), в аллантоисную полость утиных и куриных эмбрионов 11-13-суточной инкубации. Гибель подопытных животных и эмбрионов происходит на 2-5 сутки.

4. Идентификация Е. coli.

Получение бактериальных клеточных культур для реакции агглютинации (РА) с целью обнаружения К-, L-, B-антигенов проводят кипячением эшерихий при температуре 100°С в течение 60 минут, тогда как А-антиген - путём автоклавирования при 100 кПа (1 атм.) в течение 2 часов.

Методы постановки РА с поли- и моновалентными сыворотками, а также учет результатов описаны в соответствующих наставлениях.

Энтеропатогенные E. сoli серогрупп О111 содержат десять фаготипов, серогрупп О55 - восемь. Фаготип культуры бактерий не меняется при хранении. Существуют наборы, при помощи которых проводят фаготипирование изолятов.

Колибактериоз необходимо дифференцировать от сальмонеллеза, пастереллеза, вирусного гепатита утят, гриппа, коронавирусной болезни, парвовирусного энтерита мускусных уток и гусей, чумы, астровирусной инфекции и хламидиоза.

Иммунитет. При колибактериозе иммунитет у уток непродолжительный и ненапряженный.

Секреторные иммуноглобулины(Ig), подобные IgG, вместе с IgA и другими веществами предотвращают развитие и размножение E. coli на слизистой оболочке кишечника. Названные глобулины образуются после IgM на более поздней стадии инфекции или после вакцинации. IgG обладают лизирующей, нейтрализующей, агглютинирующей, преципитирующей активностью, фиксируют комплемент, а также участвуют в опсонизации. Например, низкий уровень неспецифических иммуноглобулинов в крови цыплят первых дней жизни служит одной из причин массового заболевания энтеротоксическим колибактериозом и другими желудочно-кишечными болезнями.

Лечение. После установления диагноза больную и подозреваемую птицу подвергают лечению. Рекомендуют применять синтомицин, колимицин, фурозалидон и формалин согласно разработанным схемам. Выбор лекарственного препарата проводят с учетом чувствительности к ним возбудителя. Фурозалидон, например, дают с кормом в дозе 3-5 мг на 1 кг живой массы утятам и 15-20 мг - уткам. Формалин, растворённый в воде (1:1000), обладает высокой эффективностью в дозе 0,1 мл на 1 кг живой массы 1 раз в сутки в течение 1-3 дней. Высокими лечебными свойствами обладают энтеросептол, окситетрациклин, стрептомицин, полимиксин М-сульфат и другие.

При колибактериозе активны и малотоксичны норсульфазол натрия, сульфазин натрия, сульфацил натрия, этазол натрия, сульфапиридазин натрия, сульфантрол, дисульформин, суметролим, сульфахлорпиридазин (Cosimix), тримеразин. Для превентивной терапии их назначают перорально в дозах 50-100 мг/кг на протяжении трех-пяти суток. Аэрозольно сульфамиды не применяют из-за высокой щелочной реакции. E. coli чувствительны к клиндамицину, левомицитину, ампициллину и другим антибиотикам.

При колибактериозе используют следующие лучшие сочетания препаратов: тилозин+эритромицин или хлорамфеникол, олеандомицин, тетрациклин. Затем хлорамфеникол+олеандомицин или спектимицин. Наименьший синергизм у тилозина и гентамицина.

E. coli, выделенные из проб патологического материала (желательно, крови), необходимо определить на чувствительность к наиболее широко используемым антибиотикам. Каждый вид или близкая группа бактерий обладает характерным спектром и уровнем чувствительности. Необходимо учитывать, что E. coli в результате мутации, рекомбинации или иммиграции могут даже во время инфекционного процесса приобретать измененную устойчивость к антибиотикам. В связи с этим чувствительность необходимо определять через каждые 5-7 суток. В настоящее время рекомендовано несколько методов: серийных разведений в бульоне или плотных питательных средах, «укола» или диффузии препарата в агар из бумажных дисков, а также исследование на куриных (вероятно, и на утиных) эмбрионах.

Для определения чувствительности E. coli методом серийных разведений используют МПБ с рН 7,2-7,6 с конечной концентрацией антибиотиков от 100 мкг до 1 мкг, а микроорганизмов 200 тыс. в 2 см³ бульона. Основной раствор готовят из 1000 мкг (ED) препарата в 1 см³. Необходимо учитывать, что антибиотики тетрациклинового ряда (вес указан в наставлении) предварительно разводят в 0,01 Н растворе соляной кислоты, 10 г левомицетина - в 1 см³ 96° этилового спирта, тогда как стрептомицин сернокислый, полимиксин, неомицин - в ФБР рН 6,0-6,2, 10 г сульфаниламидных препаратов в 1 см³ 0,1 Н раствора NaOH с последующим добавлением 49 см³ дистиллированной воды, чтобы получить конечную концентрацию 200 мкг/см³. После смешивания рабочих разведений антибиотиков и исследуемой культуры E. coli результаты учитывают через 18-24 часа при 37°С. Микроорганизм считается чувствительным, если антибиотик в концентрации до 25 мкг/см³ бульона подавляет рост культуры. Метод серийных разведений в плотной среде базируется на способности растворенного в МПА антибиотика ингибировать культуры E. coli. В лунки агара с каждой из трех концентраций антибиотика вносят по 5 капель 3-4-суточной культуры. Посевы инкубируют при 37°С до появления роста бактерий в контроле. Задержка роста в присутствии трех концентраций антибиотика определяет его высокую, среднюю и умеренную активность.

Метод «укола» основан на внесении сухого антибиотика в слой МПА или среды Хоттингера спустя 20-30 минут после нанесения на поверхности 1 см³ 4-5-суточной бульонной культуры или взвеси колоний в концентрации 1 млрд/см³. Укол проводят пастеровской пипеткой, предварительно смоченной ЗФР рН 7,2-7,4. Оценку результатов проводят по диаметру зон задержки: до 10 мм – малая чувствительность, более 10 мм – чувствительная, нет зоны - бактерии устойчивые.

Исследования методом бумажных дисков проводят с применением МПА и двухмиллиардной взвеси бактерий на МПА. После нанесения бактерий на поверхность агара в чашке Петри размещают стандартные 5 дисков с интервалом более 2 см. Результаты учитывают по диаметру задержки роста: менее 15 мм – малочувствительные, 15-25 мм – чувствительные и более 25 мм – высокочувствительные.

Во ВНИВИП разработан метод определения активности препаратов на КЭ 9-11-суточной инкубации, которым вводят в разведениях антибиотики в аллантоисную полость или на ХАО. Затем через 6 часов в то же место вносят культуру E. coli.

На каждое разведение препарата (5, 10, 50, 100 мг/кг массы эмбриона) используют не менее 4 эмбрионов.

Оценку проводят через 2-3 суток. Определено, что в дозе 10мг/кг препарат высокоэффективен, 25 - достаточно эффективен, 50 мг/кг – эффективен.

Исследования, проведенные во многих странах, показывают, что большинство штаммов E. coli обладает множественной лекарственной устойчивостью, обусловленной наличием К-плазмид бактерий.

Во время лечения проводят мероприятия, направленные на укрепление резистентности организма птицы.

В России производят препарат «Ромакол», полученный методом генной инженерии в Институте молекулярной генетики РАН и ВИЭВ с использованием штамма E. coli М17 (р74). Биотехнологически производят полипептидное вещество – микроцин, ингибирующий развитие энтеробактерий (эшерихии, сальмонеллы и т.д.). Применение препарата «Ромакол» с 1994 года показало его высокую лечебную и профилактическую эффективность (4).

Изучено лечебно-профилактическое действие гипохлората натрия при колибактериозе утят. Установлено, что вещество является малотоксичным препаратом при выпаивании 600 мг/л в течение 7 суток. Препарат обладает слабой антимикробной активностью.

Профилактика и меры борьбы. Опыты, проведенные в СССР и России, показали возможность использования формол-вакцины из штамма E. coli серогруппы 02 для профилактики колибактериоза птиц. Данный препарат обладает эффективностью и при болезни, обусловленной кишечной палочкой других серогрупп - 08, 01, 0128. Профилактика колибактериоза заключается в постоянном сохранении естественной резистентности организма уток. Важными факторами для предотвращения болезни являются: полноценное кормление птицы, использование корма, свободного от патогенной E. coli; отдельное содержание возрастных групп уток; строгое соблюдение занятости помещений по принципу - "все пусто, все занято"; тщательная уборка помещений от помета и подстилки после сдачи каждой партии птицы; создание оптимальных режимов вентиляции воздуха; проведение механической очистки, мойки и дезинфекции оборудования, стен и пола, а также бактериологический контроль во время санитарных разрывов, которые должны быть не менее 14 суток. Дезинфекцию можно проводить 2-3% растворами едкого натрия, 1% раствором формальдегида, 20% взвесью свежегашеной извести при экспозиции от 2 до 3 часов, хлорамином, гипохлоридом натрия и т.д.

Важным фактором в профилактике колибактериоза является прединкубационная двукратная дезинфекция яиц и обработка инкубаторов после вывода каждой партии утят.

В неблагополучном по колибактериозу хозяйстве проводят следующие мероприятия: больных, подозрительных по заболеванию и слабых уток уничтожают и утилизируют внутри хозяйства, тогда как клинически здоровую птицу обрабатывают антибиотиками или другими бактерицидными препаратами.

При массовом заболевании молодняк и взрослое поголовье подвергают убою и утилизации на мясоперерабатывающих комбинатах с соблюдением установленных правил, исключающих распространение инфекции.

Завоз новых уток и яиц проводят из благополучных хозяйств, размещают их в заведомо подготовленные помещения.

Во ВНИВИП выпускают вакцину против колибактериоза птиц инактивированную сорбированную, а также вакцину против колибактериоза и пастереллеза птиц ассоциированную инактивированную и тоже сорбированную.

НПП «АВИВАК» производит вакцину против сальмонеллеза, колибактериоза и пастереллеза инактивированную «АВИВАК – САЛЬМО – КОЛИ – ПАСТОВАК». Вакцина изготовлена на основе поверхностных антигенов вирулентных штаммов Р.мультоцида, Салм. ентеритидис С – 5 – АТ и адгезивных антигенов токсигенных штаммов Е коли в смеси с масляным адъювантом. Биопрепарат предназначен для уток, гусей, кур и индеек.

Список литературы

Артемьева, С.А. Колибактериоз птиц / С.А. Артемьева. - Л.: Колос, 1977. - 96 с.

1. Виноходов, В.О. Колибактериоз водоплавающих. Биотехнология профилактики колибактериоза птиц / В.О. Виноходов // Архив вет. наук. - СПб, Ломоносов, 2000. - Т. 2 (49). - С. 314-320.

2. Жолобова, И.С. Эффективность применения раствора гипохлората натрия при диарейных заболеваниях птиц (колибактериоз, сальмонеллёз и микоплазмоз) / И.С. Жолобова // Тр. Куб. гос. аграр. ун-та. – 1999. – Вып. 375. – С. 157-161.

3. Промышленное изготовление лиофилизированного бактерийного препарата "Ромакол" для профилактики колибактериоза сельскохозяйственных животных и птицы / Н.И. Зенов, Н.Д. Скичко, Э.А. Шигидевич [и др.] // Пробл. инфекц. патол. с.-х. ж-ных: тез. докл. конф., посвящ. 100-летию открытия ящура. - Владимир, 1997. - С. 208-209.

4. Шагинян, И.А. Идентификация и типирование патогенных бактерий: современные подходы / И.А. Шагинян // Вестник РАМН. – М., 2000. – С. 22-28.

5. Шахов, А.Г. Системно-экологический подход к защите животных от инфекций, вызываемых условно-патогенными возбудителями / А.Г. Шахов, В.С. Бузламова // 100 лет Курской биофабрике и агробиол. пром-сти России: тез. докл. науч.-произв. конф. - Курск, 1996. - С. 348-352.

 

 

КОРОНАВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ УТОК

 

Ко­ро­на­ви­рус­ная бо­лезнь (ин­фек­ци­он­ный ге­па­то­неф­рит утят, энтерогепатит утят, коронавирусный эн­те­рит уток) – кон­та­ги­оз­ная ин­фек­ция, ха­рак­те­ри­зую­щая­ся ас­фик­сией и па­ра­ли­чом ног, при­зна­ка­ми эн­те­ри­та, ге­па­ти­та, неф­ри­та, вос­па­ле­ни­ем же­ле­зи­сто­го же­луд­ка и лег­ких с про­яв­ле­ни­ем ге­не­ра­ли­зо­ван­но­го рас­строй­ства ге­мо­ди­на­ми­ки па­рен­хи­ма­тоз­ных ор­га­нов.

Ис­то­ри­че­ская справ­ка. Болезнь зарегистрирована в феврале 1987 г. Князевым В.П. в Московской области РФ. Пер­вые со­об­ще­ния о бо­лез­ни опуб­ли­ко­ва­ны в 1987 го­ду Кня­зе­вым В.П., Ка­ра­се­вой Е.М., Ла­гут­ки­ным Н.А., Виш­ня­ко­вым И.Ф., Еро­хи­ной Л.М. и др. Они опи­са­ли бо­лезнь и ус­та­но­ви­ли ее рас­про­стра­нен­ность в Рос­сии, Ук­раи­не и Бе­ло­ру­ссии. С 1987 по 1999 гг. бо­лезнь за­ре­ги­ст­ри­ро­ва­на в большинстве круп­ных ут­ко­вод­че­ских хо­зяй­ст­в стран СНГ: Рос­сии – Став­ро­поль­ский край (1987), Ом­ская (1988), Мо­с­ков­ская (1989, 1991-1999), Ас­т­ра­хан­ская (1991-1992), Вла­ди­мир­ская (1991), Ли­пец­кая (1991-1992), Оренбургская (1999) об­лас­ти; Ук­раи­не – Ива­но-Фран­ков­ская (1987, 1989), Чер­ни­гов­ская (1988-1990), Чер­кас­ская (1989, 1990, 1995), Ни­ко­ла­ев­ская (1989), Сум­ская (1991, 1992), Лу­ган­ская (1992) и Крым­ская (1992) об­лас­ти и Бе­ло­ру­ссии – Бре­ст­ская об­ласть (1991) (3,4, 9, 10, 12, 15).

Эко­но­ми­че­ский ущерб, при­чи­няе­мый бо­лез­нью, зна­чи­телен. Он оп­ре­де­ля­ет­ся сни­же­ни­ем про­дук­тив­но­сти пти­цы, в том числе: яйцекладки - до 40%, выводимости утят - с 87 до 50%, возрастанием неоплодотворенности яиц - с 3 до 52%, ле­таль­но­стью утят - до 90%, а также за­тра­та­ми на про­ве­де­ние ве­те­ри­нар­но-са­ни­тар­ных ме­ро­прия­тий по ог­ра­ни­че­нию рас­про­стра­не­ния и ликвида­ции ин­фек­ции (1, 4, 8, 10).

Воз­бу­ди­тель. Ко­ро­на­ви­рус (Coronavirus). Этиологическая роль установлена Князевым В.П. Патоген впервые изолирован в октябре 1987 г. из проб органов павших утят, принадлежащих хозяйствам Ивано-Франковской области Украины и Ставропольского края РФ. Пред­ва­ри­тель­но он клас­си­фи­ци­ро­ван как пред­ста­ви­тель ро­да Coronavirus се­мей­ст­ва Coronaviridae. Ви­рио­ны по­ли­морф­ные: ша­ро­вид­ной, вы­тя­ну­той или изо­гну­той формы. Раз­ме­ры ви­рус­ных час­тиц сфе­ри­че­ской фор­мы от 80 до 200 нм, вы­тя­ну­той - 70-300 нм. На обо­лоч­ке по всей по­верх­но­сти рас­по­ло­же­ны пе­п­ло­ме­ры дли­ной от 7 до 12 нм, об­ра­зую­щие ко­ро­ну. Пла­ву­чая плот­ность в са­ха­ро­зе - 1,19-1,20 г/см³, хло­ри­стом це­зии - 1,20-1,26 г/см³ (3, 9, 11).

Вирус чув­ст­ви­те­лен к воз­дей­ст­вию хло­ро­фор­ма, эфи­ра, фор­маль­де­ги­да (в ко­неч­ной кон­цен­тра­ции не ме­нее 0,15%), бе­та-про­пио­лак­то­на (1:750), пе­ре­ки­си во­до­ро­да, тем­пе­ра­ту­ры 58±2^оC в те­че­ние 30 ми­нут и лио­фи­ли­за­ции без ста­би­ли­за­то­ров под ва­куу­мом. Пя­ти-се­ми­крат­ное за­мо­ра­жи­ва­ние при ми­нус 35-40^оС с по­сле­дую­щим от­таи­ва­ни­ем при плюс 22-35^оС сни­жа­ет ак­тив­ность с lg 6,0 до 2,0 ЭЛД₅₀ /см³. Он не об­ла­да­ет ге­магг­лю­ти­ни­рую­щей ак­тив­но­стью к эрит­ро­ци­там уто­к, цы­п­лят, кур, овец, мор­ских сви­нок, кро­ли­ков, крыс и че­ло­ве­ка с 0(I) груп­пой крови. Вирус агглютинирует эритро­циты сам­цов белых мышей (Мусукаева Ф.Б. и др., 1996) (10).

Ан­ти­ген­ная струк­ту­ра не изу­че­на. Изо­ля­ты ви­ру­са, вы­де­лен­ные с 1987 по 1999 год, в ан­ти­ген­ном от­но­ше­нии иден­тич­ны ме­ж­ду со­бой. С ан­ти­ге­на­ми ко­ро­на­ви­ру­са реа­ги­ру­ют два ви­да мо­но­кло­наль­ных ан­ти­тел к нук­ле­опро­теи­ну и бел­ку Е воз­бу­ди­те­ля транс­мис­сив­но­го га­ст­ро­эн­те­ри­та сви­ней(14). Установлено перекрестное антиген­ное родство между гемагг­лютининами коронавируса уток и возбудителя коронавирус­ного энтерита крупного рога­того скота (10). Автор статьи неоднократно получал положительные результаты в РДП при использовании САТ гипериммунной сыворотки морской свинки (на КВУ из УЭ) и САГ КВ штамма Массачусетс 41 из набора для диагностики ИБК. Контроли реакции были действительными (1990 – 1994гг).

В мае 2003 г. на канале НТВ телевидения России высказана версия о том, что коронавирус уток является предшественником возбудителя атипичной пневмонии человека (SARS), изолированного от жителей Китая, Канады и других стран в зимний период 2002-2003 гг.Филогенетические тесты, проведённые в более10 странах показали следующие результаты, отбражённые на рисунке.

       Филогенетическое дерево с максимально возможной достоверностью, построенное на основе выравненных последовательностей 405 нуклеотидов открытой рамки считывания 1b гена полимеразы коронавируса (номера нуклеотидов с 15173 по 15578 на основе полного генома коронавируса крупного рогатого скота инвентарный номер NC_003045), для сравнения коронавируса SARS с другими коронавирусами человека и животных.

На дереве видны три основные антигенные группы в Роду коронавирусов (I, II и III), представленные человеческим коронавирусом 229E (HcoV-229E), собачьим коронавирусом (CcoV), вирусом инфекционного кошачьего перитонита (FIPV), вирусом инфекционного гастроэнтерита свиней (TGEV), вирусом эпидемической диареи свиней (TGEV), человеческим коронавирусом OC43 (HcoV-OC43), коронавирусом крупного рогатого скота (BcoV), гемагглютинирующим вирусом энцефаломиелита свиней (HEV), вирусом крысиного сиалодакриоаденита (SDAV), вирусом гепатита мышей (MHV), коронавирусом индюков (TcoV) и вирусом инфекционного бронхита птиц (IBV). КВ уток, выявленный в России, не был использован для исследований.Значения бутстрепов для автоматической компенсации погрешностей (на основе 100 повторов), полученные из дерева консенсуса на основе 50 % принципа большинства, показаны на основных внутренних ветвях филограммы. Длины ветвей пропорциональны количеству нуклеотидных замен.

 

Cравнение полных геномов коронавирусов не позволяет выявить наиболее близкий к вирусу SARS геном, хотя наибольшее число совпадающих линий наблюдается между SARS и бычьим коронавирусом 2-ого типа. Поэтому эволюционные сравнения необходимо проводить по кластерам генов. Хотя и здесь разбиение на кластеры также сопряжено с трудностями. В некоторых участках генома вируса SARS наблюдается наибольшее сходство с бычьим коронавирусом, в других участках генома вируса SARS, наоборот, сходство между птичьим коронавирусом и вирусом SARS выше. Правда, при этом степень гомологии очень низка со всеми известными коронавирусами. Блочный тип эволюции (и возможные точки рекомбинации) можно просчитать более точно, но для этого необходимо время и информация по структуре большего числа штаммов коронавирусов. Возбудитель SARS (ТОРС) наиболее близок к бычьему коронавирусу. Известно, что так называемые «бычьи» вирусы, как правило, оказываются также и вирусами мелких грызунов и даже кошек, живущих вместе или рядов с коровами. Поэтому гипотеза о кошачьей природе возбудителя ТОРС (SARS), а не утиной (птичьей), имеет законные права на существование.

Однако, все КВ, в том числе и SARS вирус, очень быстро мутируют, поэтому необходимы тщательные изучения многих штаммоввозбудителей, чтобы создать точные диагностические тесты и эффективные способы лечения. Коронавирусы обладают потенциалом изменяться больше, чем другие РНК-вирусы, главным образом, потому, что их геном значительно больше и высокая частота рекомбинации является их особенностью. Рекомбинация, вероятно, ограничивается лишь обменом фрагментами генома с близкородственными вирусами животных. 

­Вы­де­ле­ние КВУ п роводили с учетом постулатов Коха: возбудитель должен обнаруживаться у всех больных с данным заболеванием; он должен быть выделен из хозяина и культивирован в чистой культуре; и культура, выделенная таким образом должна воспроизводить болезнь у других организмов, с подъемом уровня специфических антител после заражения.

Оп­ти­маль­ной био­ло­ги­че­ской сис­те­мой для ­вы­де­ле­ния и куль­ти­ви­ро­ва­ния ви­руса яв­ля­ют­ся раз­ви­ваю­щие­ся ути­ные эм­брио­ны 9-12-суточной­ ин­ку­ба­ции. Ви­рус мак­си­маль­но на­ка­п­ли­ва­ет­ся в хо­рио­ал­лан­то­ис­ной обо­лоч­ке (ХАО) и пе­че­ни эм­брио­на (до 6,0 lg ЭЛД₅₀), ал­лан­то­ис­ной жид­ко­сти (lg 3,0), туш­ке и го­лов­ном моз­ге (до lg 2,0). По­сле­до­ва­тель­ные 3 - 5 пас­са­жей (при вве­де­нии изо­ля­тов ви­ру­са в ал­лан­то­ис­ную по­лость или на­слое­нии на ХАО) спо­соб­ст­ву­ют по­вы­ше­нию ак­тив­но­сти воз­бу­ди­те­ля с lg 2,0 до 4,0-6,0 ЭЛД₅₀/см³. Ку­ри­ные эм­брио­ны ме­нее при­год­ны для куль­ти­ви­ро­ва­ния: ис­ход­ная ле­таль­ность сни­жа­ет­ся с lg 5,0-6,0 ЭЛД₅₀/см³ до 2,0 в пер­вых двух пас­са­жах и остаётся на та­ком уров­не в по­сле­дую­щих де­ся­ти, сохраняя патогенность для УЭ и утят.

В пер­вич­но трип­си­ни­зи­ро­ван­ных куль­ту­рах клеток ХАО, фиб­роб­ла­стов УЭ и КЭ, а так­же пе­ре­ви­вае­мых – ПСГК, МДВК, РК-15, ПЭЛ, ПС, CV-1 и VERO ко­ро­на­ви­рус не вы­зы­ва­ет ци­то­па­ти­че­ского дей­ст­вия, трех-че­ты­рехкрат­ное пас­си­ро­ва­ние в этих куль­ту­рах сни­жа­ет кон­цен­тра­цию ви­руса и его па­то­ген­ность для УЭ.

Па­рен­те­раль­ное вве­де­ние кон­цен­три­ро­ван­но­го, очи­щен­но­го в гра­ди­ен­те плот­но­сти са­ха­ро­зы ви­ру­са ин­ду­ци­ру­ет об­ра­зо­ва­ние спе­ци­фи­че­ских ан­ти­тел у бе­лых крыс, кро­ли­ков, мор­ских сви­нок и свиней.

Князевым В.П. разработан метод получения специфичных сывороток крови животных, включающий следующие этапы:

1. Репродукция вируса в УЭ 10-12-суточной инкубации.

2. Сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости с активностью не менее lg 5,5 ЭЛД₅₀. Хранение супернатанта при температуре от плюс 4⁰ до минус 70ºС.

3. Получение надосадка аллантоисной жидкости при 10000-13000 об/мин. Хранение при плюс 4-8ºС.

4. Очистка вируса путём осаждения его через раствор сахарозы при 40000-90000 об/мин в течение 60-120 минут. Ресуспендирование осадка вируса в 3ФР рН 7,2-7,4. Отбор проб вируса для определения биологической активности.

5. Смешивание 1:1 иммуногена (коронавируса) с полным адъювантом Фрейнда для четырёхкратного парентерального введения по 0,5 см³ крысам, кроликам и морским свинкам. Уткам вводят осветлённую аллантоисную жидкость, содержащую коронавирус с активностью не менее 6,0 lg ЭЛД₅₀.

6. Испытание полученных специфических сывороток в РДП, РСК, ИФА и РН. Для обнаружения антигена в печени павших утят были пригодны РДП и непрямой ИФА. Антитела сывороток всех животных не обладали комплементсвязывающей и вируснейтрализующей активностью.

Эпи­зо­ото­ло­ги­че­ские дан­ные. Се­зон­ность про­яв­ле­ния бо­лез­ни не от­ме­че­на. В ес­те­ст­вен­ных ус­ло­ви­ях к ко­ро­на­ви­рус­ной бо­лез­ни вос­при­им­чи­вы ут­ки пе­кин­ской и мус­кус­ной по­род с 3-су­точ­но­го воз­рас­та. За­бо­ле­ва­ние дру­гих ви­дов птиц, мле­ко­пи­таю­щих и человека не вы­яв­ле­но. Ис­точ­ни­ком воз­бу­ди­те­ля ин­фек­ции яв­ля­ет­ся боль­ная пти­ца. У уток-ви­ру­со­но­си­те­лей, боль­ных и пе­ре­бо­лев­ших осо­бей в со­дер­жи­мом ки­шеч­ни­ка и фе­це­се па­то­ген­ный коронави­рус со­дер­жит­ся в кон­цен­тра­ции до 1х10⁸ ви­рио­нов/см³. Ус­та­нов­ле­на прямая кор­ре­ля­ция ме­ж­ду кон­цен­тра­ци­ей воз­бу­ди­те­ля в ки­шеч­ни­ке, летальностью и ре­зуль­та­та­ми об­на­ру­же­ния спе­ци­фи­че­ско­го ан­ти­ге­на ви­ру­са в про­бах па­рен­хи­ма­тоз­ных ор­га­нов пав­ших уток.

       Воз­бу­ди­тель бо­лез­ни вы­де­ля­ет­ся во внеш­нюю сре­ду из же­лу­доч­но-ки­шеч­ного тракта. Ус­та­нов­лен тран­со­ва­ри­аль­ный путь пе­ре­да­чи ви­ру­са и заболевание утят в 3-суточном возрасте в изолированных условиях.

       Про­яв­ле­нию ин­фек­ции в кли­ни­че­ски вы­ра­жен­ной фор­ме спо­соб­ст­ву­ет не­ка­че­ст­вен­ное и ог­ра­ни­чен­ное корм­ле­ние, а так­же низ­кий уро­вень зоо­ги­гие­ни­че­ских ус­ло­вий со­дер­жа­ния пти­цы. Практическими ветеринарными специалистами утководческих хозяйств Московской и Оренбургской областей Калашниковым В.А. и Будкиным Ю.Е. в 1991 –1999 гг. было замечено влияние качества корма на возникновение, проявление коронавирусной болезни уток и повышение уровня летальности. Наблюдения свидетельствуют о том, что использование в качестве основного корма для утят комбикормов ПК 1 - (3 Ф) – 3150.01 – 97 – 211 и ПК 1 – (3 Ф) – 3189. 98 – 99 – 220, предназначенных для кур-несушек 15–18-месячного возраста, с содержанием в рецептуре 7,5–9,5% соевых шрот и до 8,5% известковой муки может провоцировать острое течение коронавирусной болезни уток на фоне неконтролируемого латентного вирусоносительства. В зависимости от фи­зио­ло­ги­че­ского со­стоя­ния уток и ви­ру­лент­но­сти ви­ру­са те­че­ние бо­лез­ни в от­дель­ных груп­пах про­дол­жа­ет­ся от 4 до 35 су­ток с ле­таль­но­стью от 5 до 90%; пик мас­со­вой ги­бе­ли ча­ще от­ме­ча­ют у 12-30-суточно­го мо­лод­ня­ка.

В ес­те­ст­вен­ных ус­ло­ви­ях оп­ре­де­ле­на ас­со­циа­ция ко­ро­на­ви­рус­ной бо­лез­ни с ко­ли­бак­те­рио­зом и саль­мо­нел­ле­зом.

Те­че­ние и сим­пто­мы бо­лез­ни. Ко­ро­на­ви­рус­ная бо­лезнь про­те­ка­ет в ост­рой, по­до­ст­рой и хро­ни­че­ской фор­мах. Пер­вые две ча­ще на­блю­да­ют у мо­лод­ня­ка, то­гда как хро­ни­че­скую – у уток ма­точ­но­го по­го­ло­вья.

Ост­рая фор­ма бо­лее от­чет­ли­во вы­ра­же­на у утят 5-30-суточного­ воз­рас­та. Про­дол­жи­тель­ность ин­ку­ба­ци­он­но­го пе­рио­да и вре­мя про­яв­ле­ния сим­пто­мов со­став­ля­ют от 1 до 7, ре­же 10 су­ток. Вне­зап­но, сна­ча­ла у от­дель­ных осо­бей, об­на­ру­жи­ва­ют по­лу­па­ра­ли­чи и па­ра­ли­чи ног (ос­нов­ной кли­ни­че­ский при­знак). За­тем ко­ли­че­ст­во боль­ных уве­ли­чи­ва­ет­ся, и про­цент за­бо­лев­ших со­став­ля­ет 5-20% от об­ще­го по­го­ло­вья пти­цы. Утя­та мед­лен­но пе­ре­дви­га­ют­ся на по­лу­со­гну­тых ко­неч­но­стях или пол­за­ют на плюс­нах. Пе­ред ги­бе­лью ста­но­вят­ся апа­тич­ны­ми, ма­ло­под­виж­ны­ми, ог­ра­ни­чен­но при­ни­ма­ют корм и во­ду. У боль­шин­ст­ва за­бо­лев­ших утят от­ме­ча­ют се­роз­но-ка­та­раль­ный конь­юнк­ти­вит, ри­нит, си­ну­сит и диа­рею. В не­ко­то­рых слу­ча­ях ре­ги­ст­ри­ру­ют кру­го­вые дви­же­ния го­ло­вой и пе­рио­ди­че­ское вы­тя­ги­ва­ние крыль­ев. За­тем на­сту­па­ет ко­ма­тоз­ное со­стоя­ние и ги­бель. При ост­рой фор­ме по­ги­ба­ет от 8 до 40% утят (1, 3, 6, 9, 10,12, 14, и 15).

По­до­ст­рая фор­ма. Уг­не­тен­ное со­стоя­ние, по­лу­па­ра­ли­чи и па­ра­ли­чи ног, ог­ра­ни­чен­ный при­ем кор­ма и во­ды, про­грес­си­рую­щее ис­ху­да­ние и диа­рею у боль­но­го мо­лод­ня­ка ре­ги­ст­ри­ру­ют в те­че­ние 8-15 су­ток. Од­но­вре­мен­но в не­бла­го­по­луч­ных груп­пах мож­но вы­явить здо­ро­вых, боль­ных и пе­ре­бо­лев­ших (ма­ло­вес­ных) утят. Пе­ри­од ги­бе­ли про­дол­жа­ет­ся до 1-3 ме­ся­цев, ле­таль­ность со­став­ля­ет от 30 до 90%. В свя­зи с от­сут­ст­ви­ем на­пря­жен­но­го им­му­ни­те­та у утят-ре­кон­ва­лес­цен­тов не­ред­ко на­блю­да­ли по­втор­ное про­яв­ле­ние бо­лез­ни с ле­таль­но­стью до 100%.

В хо­зяй­ст­вах, где еже­год­но ре­ги­ст­ри­ровали бо­лезнь мо­лод­ня­ка, по­сто­ян­но от­ме­чали хро­ни­че­скую фор­му те­че­ния бо­лез­ни у ма­точ­но­го по­го­ло­вья, про­яв­ляю­щую­ся, в ос­нов­ном, сни­же­ни­ем уров­ня яй­це­нос­ко­сти на 25-30%. У не­ко­то­рых уток родительского стада раз­ви­ва­лись се­роз­но-ка­та­раль­ный саль­пин­гит и клоа­цит.

При на­ру­ше­нии зоо­ги­гие­ни­че­ских ус­ло­вий и ог­ра­ни­че­нии в корм­ле­нии в груп­пах уток-ви­ру­со­но­си­те­лей воз­мож­но вы­явить пти­цу с ост­рой и по­до­ст­рой фор­мами те­че­ния бо­лез­ни. При катарах ле­таль­ность дос­ти­га­ет 12%.

В экс­пе­ри­мен­таль­ных ус­ло­ви­ях ин­ку­ба­ци­он­ный пе­ри­од про­дол­жа­ет­ся от 6 до 30 су­ток. По­сле па­рен­те­раль­но­го вве­де­ния ви­ру­са с ак­тив­но­стью не ме­нее lg 3,0 ЭЛД₅₀/см³ у утят и взрос­лых уток в 10-20% слу­ча­ев раз­ви­ва­лись ост­рая или по­до­ст­рая фор­мы бо­лез­ни, иден­тич­ные на­блю­дае­мым в ес­те­ст­вен­ных ус­ло­ви­ях. Ас­со­ции­ро­ван­ное трех-че­ты­рех­крат­ное внут­ри­мы­шеч­ное и пе­ро­раль­ное вве­де­ние с ин­тер­ва­лом 24-48 ча­сов по­вы­ша­ет ве­ро­ят­ность за­бо­ле­ва­ния, со­кра­ща­ет ин­ку­ба­ци­он­ный пе­ри­од до 4-10 су­ток, спо­соб­ст­ву­ет про­яв­ле­нию ост­рой формы бо­лез­ни и бо­лее вы­со­ко­му уров­ню ле­таль­но­сти. В ран­ней ста­дии ост­рой фор­мы у уток от­ме­ча­ли не­ус­той­чи­вость по­ход­ки и мед­лен­ное пе­ре­дви­же­ние на по­лу­со­гну­тых ко­неч­но­стях или плюс­нах. В даль­ней­шем из-за па­ра­ли­ча ног пти­ца ле­жит и ог­ра­ни­чен­но при­ни­ма­ет корм. У не­ко­то­рых осо­бей на­блю­да­ет­ся се­роз­но-ка­та­раль­ный конь­юнк­ти­вит, ка­та­раль­ный или ка­та­раль­но-ге­мор­ра­ги­че­ский ри­нит, диа­рея с эва­куа­ци­ей фе­ка­лий тем­но-зе­ле­но­го цве­та. В со­стоя­нии вы­ра­жен­но­го уг­не­те­ния пти­ца по­ги­ба­ет на 3-10 су­тки по­сле на­ча­ла про­яв­ле­ния кли­ни­че­ских при­зна­ков.

Многолетние наблюдения показали, что в естественных условиях доминирует форма болезни с поражением желудочно-кишечного тракта, тогда как в экспериментальных дополнительно раскрывается лёгочная, характерная для искусственного многоразового заражения птицы (Князев В.П., 1987-1992 гг.).

При по­до­ст­рой фор­ме в те­че­ние 5-12 су­ток до­пол­ни­тель­но от­ме­ча­ют про­грес­си­рую­щее ис­ху­да­ние, за­держ­ку рос­та и от­сут­ст­вие бле­ска перь­е­во­го по­кро­ва, во­гну­тость по­верх­но­сти ко­жи над си­ну­са­ми. Во­круг глаз об­ра­зу­ет­ся оре­ол из влаж­но­го или вы­со­хше­го пе­ра. Из но­со­вых от­вер­стий вы­де­ля­ет­ся се­рая мут­ная сли­зи­стая мас­са, в 5-10% слу­ча­ев (пе­ред ги­бе­лью) с при­ме­сью кро­ви.

Пе­ре­бо­лев­шие ут­ки дли­тель­ное вре­мя (20-60 дней) вос­ста­нав­ли­ва­ют свой кон­ди­ци­он­ный вес. При этом до 10-20% ре­кон­ва­лес­цен­тов в те­че­ние дан­но­го пе­рио­да по­ги­ба­ют из-за де­ст­рук­ции и на­ру­ше­ния функ­ций внут­рен­них ор­га­нов. Ис­кус­ст­вен­ное за­ра­же­ние пе­ре­бо­лев­ших уток вы­зы­ва­ет по­втор­ное их за­бо­ле­ва­ние по­сле ин­ку­ба­ци­он­но­го пе­рио­да в 4-7 су­ток с по­сле­дую­щим про­яв­ле­ни­ем ост­рой фор­мы бо­лез­ни и ле­таль­но­стью до 100%. За­ра­же­ние цы­п­лят с 5-суточного­ и старше воз­рас­та, а так­же взрос­лых кур, не вы­зы­ва­ет раз­ви­тия ко­ро­на­ви­рус­ной бо­лез­ни.

Па­то­ге­нез. Изу­чен не­дос­та­точ­но. Тран­со­ва­ри­аль­ным и, пред­по­ло­жи­тель­но, али­мен­тар­ным пу­тем ко­ро­на­ви­рус по­па­да­ет в ки­шеч­ник, ад­сор­би­ру­ет­ся на клет­ках эпи­те­лия вор­си­нок и ре­про­ду­ци­ру­ет­ся в них, что со­про­во­ж­да­ет­ся их ис­тон­че­ни­ем, фраг­мен­та­ци­ей и от­тор­же­ни­ем. Ак­тив­ное вос­про­из­вод­ст­во ви­рус­ных час­тиц и рас­пад энтероци­тов при­во­дит к ин­тен­сив­но­му воз­рас­та­нию кон­цен­тра­ции воз­бу­ди­те­ля в содержимом ки­шеч­ни­ка. Ко­ро­на­ви­рус про­ни­ка­ет в кро­ве­нос­ные со­су­ды, де­по­ни­ру­ет­ся в пе­че­ни, се­ле­зен­ке, поч­ках и лег­ких, где ин­ду­ци­ру­ет вос­па­ли­тель­ный про­цесс и рез­кое рас­строй­ство ге­мо­ди­на­ми­ки (Князев В.П., 1990 г.).

Па­то­ло­го­ана­то­ми­че­ские из­ме­не­ния. После 1-2-суточного периода болезни внешний вид пав­ших утят чаще не имеет изменений. Тру­пы утят и уток не ис­то­ще­ны, с туск­лым, за­гряз­нен­ным перь­е­вым по­кро­вом. У многих от­ме­чается циа­но­тич­ное ок­ра­ши­ва­ние клю­ва и ниж­них час­тей ног (лап). В но­со­вых по­лос­тях со­дер­жит­ся про­зрач­ная сли­зи­стая жид­кость или гус­тая се­розная мас­са. В 20-60% слу­ча­ев ре­ги­ст­ри­ру­ют ка­та­раль­ный или ка­та­раль­но-гем­ор­ра­ги­че­ский ри­нит, си­ну­сит и конь­юнк­ти­вит. Цвет мышц блед­но-ро­зо­вый, объ­ем их мень­ше, чем у кон­троль­ных осо­бей. Веретенообразное расширение пищевода не­ко­то­рых утят пе­ре­пол­нено кор­мом.

При ост­рой фор­ме на сли­зи­стой оболочке тра­хеи ви­ди­мых из­ме­не­ний не от­ме­ча­ют, то­гда как при по­до­ст­рой – ка­тар или, ре­же (на 10-15 су­тки те­че­ния бо­лез­ни), диф­те­ри­ти­че­ское на­ло­же­ние фиб­ри­на на верх­ней 1/3 час­ти ор­га­на.

Лег­кие ин­тен­сив­но-ро­зо­во­го или тем­но-крас­но­го цве­та. В 20-30% слу­ча­ев ре­ги­ст­ри­ру­ют ка­та­раль­ную пнев­мо­нию.

В же­ле­зи­стом же­луд­ке отмечают ка­та­раль­ное вос­па­ле­ние и обиль­ное со­дер­жа­ние се­ро-бе­лой сли­зи. В 40-80% наблюдают ка­та­раль­но-ге­мор­ра­ги­че­ский эн­те­рит, ча­ще 12-пер­ст­ной кишки и тон­ко­го от­де­ла ки­шеч­ни­ка. На сли­зи­стой обо­лоч­ке клоа­ки и пря­мой киш­ки по­сто­ян­но при­сут­ст­ву­ют