Минимальные доказательства, необходимые для доказательства существования ДНК ВИЧ

Если «ДНК ВИЧ» является геномом уникальной ретровирусной частицы, тогда самым основным требованием является доказательство существования уникального молекулярного объекта «ДНК ВИЧ», то есть уникальных фрагментов ДНК, идентичных по составу и длине у всех инфицированных людей., Утверждение о том, что участок РНК (кДНК) представляет собой уникальную молекулярную единицу, которая составляет геном уникального ретровируса, может быть принято тогда и только тогда, когда будет показано, что РНК принадлежит частице с морфологическими, физическими и репликативными характеристиками ретровирусная частица. Доказательство этих свойств может быть получено только путем выделения предполагаемых вирусных частиц, то есть путем получения их отдельно от всего остального. извлечение нуклеиновых кислот и демонстрация того, что такие частицы идентичны (их составляющие, включая их нуклеиновые кислоты, идентичны) и заразны. Правильные процедуры, которые теперь используются более полувека для достижения этого доказательства, требуют демонстрации того, что: 1. В «инфицированных» клеточных культурах (сокультурах) есть частицы диаметром 100-120 нм, содержащие «конденсированные внутренние тела (ядра).) "и поверхности", усыпанные выступами (шипами, шишками) "; (82) 2. В градиентах плотности сахарозы полосы частиц при плотности 1,16 г / мл; 3. При плотности 1,16 г / мл это не что иное, как частицы с морфологическими характеристиками ретровирусных частиц; 4. Частицы содержат только РНК, а не ДНК, и что РНК всегда имеет одинаковую длину (количество оснований) и состав независимо от того, сколько раз повторяется эксперимент; 5. Когда частицы вводятся во вторичные культуры, но при этом следует помнить о важном предостережении, обсуждаемом ниже: (а) частицы захватываются клетками; (b) вся РНК подвергается обратной транскрипции в кДНК; (c) вся кДНК вставлена ​​в клеточную ДНК; (d) ДНК транскрибируется в РНК, которая транслируется в белки; 6. В результате 5 клетки вторичных культур выделяют частицы в культуральную среду; 7. Частицы, высвобождаемые во вторичных культурах, имеют точно такие же характеристики, что и исходные частицы, то есть они должны иметь идентичную морфологию, полосу 1,16 г / мл и содержать те же РНК и белки.

Предостережение состоит в том, что, хотя введение большинства инфекционных частиц в культуры клеток и последующее высвобождение подобных частиц является доказательством того, что такие частицы действительно заразны, этого недостаточно для ретровирусов. Основанием для этого исключения является тот факт, что «одной из наиболее ярких особенностей, отличающих ретровирусы от всех других вирусов животных, является присутствие в хромосомах нормальных неинфицированных клеток, геномов с геномами инфекционных вирусов». (83) Фактически, клетка может содержать геном многих ретровирусов. Еще в 1976 году ретровирологи признали, что «неспособность выделить эндогенные вирусы от определенных видов может отражать ограничения методов сокультивирования in vitro» (84). Другими словами,

Один из способов, который предложит, но не докажет, что клетки приобрели вирус извне (экзогенно приобретенный ретровирус, инфекционный ретровирус) и не собрали ретровирус из информации, уже существующей в нормальных клетках (эндогенный ретровирус), - это проведение экспериментов с использованием контроля. то есть работать параллельно с тестовыми культурами / сокультурами, контрольными культурами / сокультурами. Единственное различие между тест-культурами и контрольными культурами должно заключаться во внесении частиц в тест-культуры. Другими словами, кроме введения частиц, во всех остальных отношениях с контрольными культурами нужно обращаться одинаково. Например: (а) поскольку обнаружение ОТ и ретровирусных генетических последовательностей и высвобождение ретровирусных частиц зависит от метаболического состояния клеток, физиологическое состояние клеток, используемых в контрольных культурах, должно быть максимально приближено к таковому у больных СПИДом; (b) поскольку простой акт совместного культивирования сам по себе может привести к высвобождению эндогенных ретровирусных частиц, если тестируемые клетки совместно культивируются, то же самое должно происходить с клетками, используемыми в контрольных экспериментах; (85) (c) экстракты даже из нормальных нестимулированных клеток при добавлении к культурам могут увеличивать экспрессию эндогенных ретровирусов. (86) Из-за этого, когда клетки культивируются с «ВИЧ» (супернатант или материал с полосами 1,16 г / мл), контроли должны культивироваться с аналогичным материалом из клеточных культур, происходящих от больных людей с заболеваниями, сходными со СПИДом, которые есть подходящие люди с подавленным иммунитетом; (d) появление эндогенного ретровируса может быть ускорено, а урожайность увеличена в миллион раз за счет стимуляции культур митогенами, (87) мутагенами, химическими канцерогенами и радиацией. (88,89) Если тестируемые культуры подвергаются воздействию или используют такие агенты. так должны элементы управления; (e) поскольку пациенты со СПИДом и лица с риском развития синдрома подвергаются воздействию сильных окислителей (79,90), контрольные клетки также должны происходить от таких пациентов; (g) во избежание предвзятости наблюдателя и в интересах науки следует проводить слепой анализ тестовых и контрольных культур / сокультив. (e) поскольку пациенты со СПИДом и лица с риском развития синдрома подвергаются воздействию сильных окислителей (79,90), контрольные клетки также должны происходить от таких пациентов; (g) во избежание предвзятости наблюдателя и в интересах науки следует проводить слепой анализ тестовых и контрольных культур / сокультив. (e) поскольку пациенты со СПИДом и лица с риском развития синдрома подвергаются воздействию сильных окислителей (79,90), контрольные клетки также должны происходить от таких пациентов; (g) во избежание предвзятости наблюдателя и в интересах науки следует проводить слепой анализ тестовых и контрольных культур / сокультив.