Определение общей железосвязывающей способности.

Принцип метода:

Трансферрин в сыворотке крови связывает ионы Fe³⁺ до 1/3 своего объема. Для полного насыщения трансферрина добавляют в сыворотку избыточное количество ионов Fe³⁺. Не связанные ионы выделяют из раствора при помощи карбоната магния. Концентрацию железа в супернатанте определяют с феррозином и судят об ОЖСС.

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Ход определения:

№	Реагенты	Опытная проба
1. 2.	Сыворотка крови (или плазма) Насыщающий раствор	0,5 1,0
Тщательно перемешать и через 5 минут добавить:
3.	Карбонат магния	1 ложечку

Выдержать 30 минут при комнатной температуре, встряхивая каждые 5-10 минут. Центрифугировать 10 минут при 3000 об/мин.

Провести определение концентрации железа в супернатанте по реакции с феррозином.

Нормальное значение ОЖСС – 50-72 мкмоль/л.

Увеличение содержания сывороточного железа наблюдается при:

· Гемохроматозе (нарушении ограничения всасывания железа);

· Нарушении включения железа в гем (при сидероахристической анемии, свинцовой интоксикации);

· Поражении печени (острый гепатит, острый некроз печени).

Уменьшение содержания сывороточного железа наблюдается при:

· Нарушении поступления железа;

· Заболеваниях желудочно-кишечного тракта (гастриты с пониженной кислотностью, поражения кишечника);

· Железодефицитной анемии.

 

НАТРИЙ.

Натрий - основной внеклеточный катион. Вместе и ионами хлора обуславливает осмотическую активность плазмы и других биологических жидкостей. Ионы натрия обеспечивают перенос воды в организме, особенно в почках. Концентрация этих ионов в плазме во многом зависит от секреции в кровь минерало- и глюкокортикоидов, оказывающих влияние на реабсорбцию ионов натрия через стенку канальцев почек. Главные гуморальные  механизмы, отвечающие за состояние водно-натриевого обмена – система ренин-ангиотензин-альдостерон-вазопрессин.

Концентрация ионов натрия в плазме во многом определяется и состоянием водного баланса: при потере воды она возрастает и, наоборот, при «перегрузке» организма водой снижается. Концентрация ионов натрия в плазме крови здоровых людей 130-156 ммоль\л.

Определение натрия в биологических жидкостях проводится:

· Методом пламенной фотометрии;

· С помощью ион-селективных электродов;

· Химическим методом.

Химический метод определения натрия

(набор реактивов фирмы «Ольвекс»).

Принцип метода:

Содержащийся в образце натрий связывается осаждающим реагентом. Оставшиеся в растворе ионы осадителя образуют окрашенный комплекс с тиогликолятом. Концентрация натрия пропорциональна разности между контрольной (без преципитации) и опытной пробами.

Исследуемый материал: сыворотка крови.

Реактивы:

1. Реагент № 1,осаждающий реагент.

2. Реагент № 2, тиогликолят аммония.

3. Стандартный раствор – 150 ммоль/л.

Ход определения:

№	Реактивы	Опыт	Стандарт	Контроль
1. 2. 3. 4.	Осаждающий реагент Сыворотка крови Стандартный раствор Бидистиллированная вода	1,00 0,02 - -	1,00 - 0,02 -	1,00 - - 0,02
Пробы тщательно перемешивают, через 5 минут снова перемешивают (не менее 30 секунд) и инкубируют 30 минут в темноте. Центрифугируют все пробы при 900 об/мин в течение 10 минут. Для дальнейшего анализа используется супернатант.
5. 6.	Супернатант Тиогликолят натрия	0,02 2,00	0,02 2,00	0,02 2,00

Измерьте оптическую плотность опытной, стандартной и контрольной проб против воды при длине волны 365 или 405 нм. Окраска стабильна 25 минут после окончания инкубации (при предохранении от солнечного света).

Расчет результатов:

	Dк –  Dо
Со =	------------	* Cст
	Dк –  Dст

 

 

С_ст = 150 ммоль/л

Обратите внимание: интенсивность окраски обратно пропорциональна концентрации натрия в исследуемом образце.

Увеличение содержания натрия наблюдается при:    

Относительного характера при потере воды или сниженном поступлении воды в организм.

Абсолютного характера при:

· Повышенном поступлении натрия в организм;

· Гиперальдостеронизме;

· Пониженном выведении через почки (почечная недостаточность);

· Несахарном диабете.

Уменьшении содержания натрия наблюдается при:

Относительного характера при повышенном парентеральном поступлении жидкости.

Абсолютного характера:

· Пониженное поступление натрия;

· Потеря натрия через желудочно-кишечный тракт (рвота, понос);

· Потеря натрия через почки при полиурической фазе;
острой почечной недостаточности, лечении диуретиками;

· Недостаточности коры надпочечников;

· Чрезмерное потоотделение.

 

КАЛИЙ.

Калий - основной внутриклеточный катион. Во внеклеточной жидкости находится менее 2% общего количества калия организма. Возбудимость нервных и мышечных клеток требует поддержания концентрации калия в плазме и интерстициальной жидкости в  пределах достаточно узкого диапазона концентрации. Так, при гиперкалиемии сердце может остановиться в диастолу, а при гипокалиемии - в систолу. Уровень калия в клетке зависит от активности метаболических процессов, состояния КОС. Недостаточность калия в организме в первую очередь проявляется на уровне внутриклеточных миофибрилл и митохондрий. Концентрация калия в крови не отражает его запасов в организме, гипокалиемия - свидетельство тяжелого дефицита калия.

Нормальное содержание калия - 3,6-53 ммоль\л.

Определение калия в биологических жидкостях проводится также как и натрия.

· Методом пламенной фотометрии;

· С помощью ион-селективных электродов;

· Химическим методом.

Химический метод определения калия

(набор реактивов фирмы «Ольвекс»).

Принцип метода:

В результате реакции между ионами калия и тетрафенилбората образуется стабильная суспензия. Мутность суспензии пропорциональна концентрации ионов калия.

Исследуемый материал: сыворотка крови, плазма.

Ход определения:

№	Реактивы	Опытная проба	Стандартная проба	Контроль
1. 2.   3. 4.	Монореагент Сыворотка крови (или плазма) Стандартный раствор Дистиллированная вода	2,00 0,05   - -	2,00 -   0,05 -	2,00 -   - 0,05

Сыворотку, стандартный раствор и воду медленно введите в монореагент без перемешивания, через 1,5-2 минуты перемешайте и инкубируйте точно 10 минут при 18-25ºС. Перед фотометрированием пробы энергично перемешайте. Измерьте оптическую плотность опытной и стандартной проб против контрольной пробы при длине волны 570-590 нм в кювете 5 мм.

Расчет результатов:

	Dо
Концентрация калия =	-------	* Cст
	Dст

С_ст = 5 ммоль/л

Повышение концентрации может наблюдаться при:

· Массивном парентеральном введении калия;

· Недостаточности коры надпочечников;

· Уменьшении выделения калия через почки при почечной
недостаточности;

· При повреждении, омертвлении тканей: обширный некроз, внутрисосудистый гемолиз, ожоги, опухоли, тяжелые травмы и т.д.

Снижение концентрации:

· Недостаточное поступление (чаще всего у больных после хирургического вмешательства, получающих питание через зонд);

· Потеря калия через желудочно-кишечный тракт: длительный понос, рвота;

· Потеря калия через почки при почечной недостаточности, лечении диуретиками, гипотензивными препаратами;

· При гиперальдостеронизме;

· После введения инсулина за счет перемещения калия в клетки;

· Повышенное потоотделение.

 

ХЛОРИДЫ

Хлор - основной анион, компенсирующий влияние катионов, в первую очередь натрия, во внеклеточной жидкости. В физиологических условиях изменения концентрации хлора вторичны к изменениям других электролитов и направлены в первую очередь на создание электронейтральности среды: когда повышается натрий, то увеличивается хлор. Присутствует в виде солей натрия, калия, кальция и магния. Наряду с перечисленными катионами анионы хлора являются наиболее важными и осмотически активными ионами плазмы крови, лимфы и других жидкостей.

Нормальное содержание хлора - 95-110 ммоль\л.

Определение содержания хлора в биологических жидкостях проводится следующими методами:

· Титрометрический метод;

· Химический метод;

· Использование анализатора с ион-селективной мембраной.

Химический метод определения хлоридов

(по набору реактивов фирмы «Ольвекс»)

Принцип метода:

В присутствии ионов хлора в кислой среде тиоцианат ртути образует тиоцианат-ионы, формирующие окрашенный комплекс с Fe³⁺. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации хлорид-ионов в пробе.

Исследуемый материал:

1. Сыворотка крови (без гемолиза);

2. Плазма гепаринизированная;

3. Моча, разбавленная в 2 раза дистиллированной водой.

Реактивы:

1. Реагент №1 содержит тиоцианат ртути;

2. Стандартный раствор хлоридов;

3. Реагент № 2 нитрат железа.

Подготовка реагентов к процедуре анализа:

Для приготовления рабочего раствора реагента необходимо смешать реагент № 1 и реагент № 2 в соотношении 9:1.

Ход определения:

№	Реактивы (мл)	Опытная проба	Стандартная проба	Контроль
1. 2. 3. 4.	Рабочий реагент Исследуемый материал Стандартный раствор Дистиллированная вода	2,00 0,01 - -	2,00 - 0,01 -	2,00 - - 0,01

Пробы тщательно перемешайте и выдержите 5 минут при 20-25ºС. Опытные и стандартные пробы фотометрируют против контроля при длине волны 540 нм в кювете 5 мм.

Расчет результатов:

	Dо
Со =	-----	* Cст
	Dст

 

С_ст = 100 ммоль/л

Увеличение содержания ионов хлора в сыворотке крови отмечается при:

· Нарушении водного баланса: обезвоживание, вызванное недостаточным поступлением в организм жидкости, гипервентиляция;

· Заболевания почек: ОПН, нефропатия, воспалительные заболевания почек;

· Нарушение функции сердечно-сосудистой системы: глубокое нарушение сердечной деятельности, несахарный диабет.

Уменьшение концентрации ионов хлора в сыворотке крови выявляется при:

· Усиленном потреблении воды;

· Задержке воды в организме вследствие нарушения выделительной функции почек;

· В послеоперационном периоде;

· Потере хлора при неукротимой рвоте, длительном поносе;

· Тяжелых инфекционных заболеваниях.

 

ФОСФОР.

Фосфор - элемент, обмен которого тесно связан с кальцием. Принимает участие в обеспечении организма энергией. 80-85% фосфора входит в состав скелета, остальное количество распределено между тканями и жидкостями организма. Фосфор участвует в образовании нуклеиновых кислот, нуклеотидов, фосфолипидов и других соединений. Концентрация неорганического фосфора ниже 0,3 ммоль\л ведет к нарушению энергетического обмена клеток. Содержание неорганического фосфора в циркулирующей крови зависит от интенсивности всасывания его в кишечнике, функции паращитовидных желез и потребления витамина Д, а также от функции почек, процесса обмена веществ в костной ткани, характера питания. Метаболизм фосфата контролируется паратгормоном, кальцитонином и кальцитриолом.

Нормальное содержание фосфора -1-2 ммоль\л.

Определение фосфора в биологических жидкостях проводится:

· Колориметрическим методом;

· С помощью ион-селективных электродов.