Индивидуальные очистные сооружения: К классу индивидуальных очистных сооружений относят сооружения, пропускная способность которых...
Типы сооружений для обработки осадков: Септиками называются сооружения, в которых одновременно происходят осветление сточной жидкости...
Топ:
Эволюция кровеносной системы позвоночных животных: Биологическая эволюция – необратимый процесс исторического развития живой природы...
Характеристика АТП и сварочно-жестяницкого участка: Транспорт в настоящее время является одной из важнейших отраслей народного...
Интересное:
Распространение рака на другие отдаленные от желудка органы: Характерных симптомов рака желудка не существует. Выраженные симптомы появляются, когда опухоль...
Как мы говорим и как мы слушаем: общение можно сравнить с огромным зонтиком, под которым скрыто все...
Подходы к решению темы фильма: Существует три основных типа исторического фильма, имеющих между собой много общего...
Дисциплины:
2020-05-10 | 134 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123, г.Москва, ул. Новогиреевская, дом 3А, e-mail: [email protected][6].
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ – Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством.
ПРИЛОЖЕНИЕ А. Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-сорб-12»
Для повышения чувствительности рекомендуется провести предварительное ультрацентрифугирование 1 мл плазмы в течение 1 ч при скорости центрифуги не менее 24000 g при температуре от 2 до 8 °С. Затем отобрать 900 мкл надосадочной жидкости и работать с осадком (100 мкл) как описано ниже. Ультрацентрифугирование проводится в пробирках с завинчивающимися крышками на 1,5 мл.
Порядок работы
1. Лизирующий раствор и раствор для отмывки ВИЧ (если они хранились при температуре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре 60 °С до полного растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая отрицательный и положительный контроли экстракции). Промаркировать пробирки.
|
3. На дно каждой пробирки внести по 10 мкл ВКО ВИЧ-М- FRT.
4. В пробирки внести по 450 мкл лизирующего раствора.
При большом объеме образцов для облегчения процедуры экстракции допускается смешивание в отдельном одноразовом флаконе лизирующего раствора и ВКО (из расчета на один образец 450 мкл лизирующего раствора и 10 мкл ВКО)с последующим внесением по 450 мкл смеси в заранее приготовленные пробирки на 1,5 мл.
При экстракции РНК из 12 проб, включая контроли, допускается добавление во флакон с лизирующим раствором 130 мкл ВКО ВИЧ-М- FRT. После тщательного перемешивания внести по 450 мкл смеси в заранее приготовленные пробирки на 1,5 мл. Смесь лизирующего раствора с ВКО ВИЧ-М- FRT хранить не более 2 ч.
5. В пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя наконечники с фильтром. Закрыть крышки и перемешать на вортексе. Осадить на центрифуге для сброса капель жидкости с крышки.
6. Для каждой панели необходимо поставить положительные контроли (ПК-1, ПК-2). Для этого в приготовленную пробирку ПКО-1 с лизирующим раствором добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-1-ВИЧ, а в приготовленную пробирку ПКО-2 с лизирующим раствором добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-2-ВИЧ, перемешать содержимое пробирок на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
7. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для этого в пробирку с лизирующим раствором добавить 100 мкл ОКО, перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
8. Ресуспендировать сорбент, интенсивно перемешивая на вортексе. Добавить в каждую пробирку отдельным наконечником по 25 мкл ресуспендированного сорбента.
9. Перемешать содержимое пробирок на вортексе и оставить на 10 мин при комнатной температуре, тщательно перемешивая каждые 2 мин.
10.Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 7 тыс g (например, 10 тыс об/мин для центрифуги MiniSpin, Eppendorf) в течение 1 мин.
|
11.Отобрать надосадочную жидкость из каждой пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
12.Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки ВИЧ. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 7 тыс g в течение 1 мин. Отобрать надосадочную жидкость из каждой пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
13.Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 7 тыс g в течение 1 мин. Отобрать раствор для отмывки 3 из каждой пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
14.Повторить отмывку раствором для отмывки 3.
15.Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 7. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 7 тыс g в течение 1 мин. Полностью отобрать раствор для отмывки 7 из каждой пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
16.Высушить сорбент, поместив пробирки с открытыми крышками в термостат при температуре 60 °С на 10 мин.
17.Добавить в каждую пробирку по 50 мкл буфера для элюции и ресуспендировать сорбент. Прогреть в термостате при температуре 60 °С 5 мин, перемешать на вортексе и осадить сорбент на центрифуге при 12 тыс g (например, 13 400 об/мин для центрифуги MiniSpin, Eppendorf) в течение 1 мин.
РНК-пробы готовы к постановке реакции ОТ-ПЦР, которую рекомендуется проводить сразу же после получения очищенной РНК.
Примечание – При появлении признаков взмучивания сорбента необходимо вновь осадить сорбент на центрифуге при 12 тыс g в течение 1 мин.
РНК-пробы не рекомендуется хранить дольше 30 мин при температуре от 2 до 8 °С. Для длительного хранения препарата необходимо, не захватывая сорбент, перенести надосадочную жидкость в стерильную пробирку и хранить при температуре не выше минус 16 °С в течение 1 мес или не выше минус 68 °С в течение года.
ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-преп»
Для повышения чувствительности рекомендуется провести предварительное ультрацентрифугирование 1 мл плазмы в течение 1 ч при скорости центрифуги не менее 24000 g при температуре от 2 до 8 °С. Затем отобрать 900 мкл надосадочной жидкости и работать с осадком (100 мкл) как описано ниже. Ультрацентрифугирование проводится в пробирках с завинчивающимися крышками на 1,5 мл.
|
Порядок работы
1. Раствор для лизиса (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре до 65 °С до полного растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая отрицательный и положительный контроли экстракции). Промаркировать пробирки.
3. На дно каждой пробирки внести по 10 мкл ВКО ВИЧ-М- FRT.
4. В пробирки внести по 300 мкл раствора для лизиса.
При большом объеме образцов для облегчения процедуры экстракции допускается смешивание в отдельном одноразовом флаконе раствора для лизиса и ВКО (из расчета на один образец 300 мкл раствора для лизиса и 10 мкл ВКО)с последующим внесением по 300 мкл смеси в заранее приготовленные пробирки на 1,5 мл.
5. В пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя наконечники с фильтром. Закрыть крышки и перемешать на вортексе. Осадить на центрифуге для сброса капель жидкости с крышки.
6. Для каждой панели необходимо поставить положительные контроли (ПК-1, ПК-2). Для этого в приготовленную пробирку ПКО-1 с раствором для лизиса добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-1-ВИЧ, а в приготовленную пробирку ПКО-2 с раствором для лизиса добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-2-ВИЧ, перемешать содержимое пробирок на вортексе.
7. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для этого в пробирку с раствором для лизиса добавить 100 мкл ОКО, перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
8. Содержимое пробирок прогреть 5 мин при 65 °С в термостате, перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
9. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для преципитации, перемешать на вортексе.
10.Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 5 мин при 12 тыс g (например, 13 400 об/мин для центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
11.Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
12.Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть крышки, осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
|
13.Центрифугировать при 12 тыс g в течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
14.Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
15.Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть крышки и осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
16.Центрифугировать при 12 тыс g в течение 2 мин на микроцентрифуге.
17.Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
18.Поместить пробирки в термостат при температуре 65 °С на 5 мин для подсушивания осадка (при этом крышки пробирок должны быть открыты).
19.Добавить в пробирки по 50 мкл РНК-буфера. Перемешать на вортексе. Поместить в термостат при температуре 65 °С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе.
20.Центрифугировать пробирки при 12 тыс g в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК.
РНК-пробы готовы к постановке реакции ОТ-ПЦР, которую рекомендуется проводить сразу же после получения очищенной РНК.
РНК-пробы не рекомендуется хранить дольше 30 мин при температуре от 2 до 8 °С. Для длительного хранения препарат необходимо хранить при температуре не выше минус 16 °С в течение 1 мес или не выше минус 68 °С в течение года.
ПРИЛОЖЕНИЕ В. Экстракция РНК с использованием автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот NucliSENS easyMAG (bioMerieux, Франция)
|
|
Индивидуальные и групповые автопоилки: для животных. Схемы и конструкции...
Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...
Таксономические единицы (категории) растений: Каждая система классификации состоит из определённых соподчиненных друг другу...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!