Плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP)

Тромбоциты активируются, либо путем адгезии к молекулам, которые подвергаются воздействию на эндотелий потерпевшего, таких как фактор фон Виллебранда (ФВ), коллаген, фибронектин и ламинин, либо физиологический агонистов, таких как тромбин, АДФ, коллаген, тромбоксан А2, эпинефрин, и активирующего тромбоциты фактора [18].был использован клинически у людей с 1970 года своими целебными свойствами отнести аутологичных GF и секреторных белков, которые могут усилить процесс заживления на клеточном уровне [19]. Кроме того, PRP усиливает вербовки, пролиферации и дифференцировки клеток, участвующих в регенерации тканей [20]. PRP-родственные продукты, также известный как обогащенной тромбоцитами концентрата тромбоцитов гель, подготовка богатый факторов роста (PRGF) и тромбоцитов высвобожденной, были изучены с в пробирке и в естественных экспериментов в области хирургической науки главным образом [21].

В зависимости от устройства и используемой методики PRP может содержать различные количества плазма, эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. Концентрации тромбоцитов должна быть увеличена выше базового или весь концентрацию в крови. Существует общее мнение, что при PRP должны иметь как минимум в 5 раз количества тромбоцитов по сравнению с исходными значениями для цельной крови считать «богатой тромбоцитами» [22].

Этот вывод подтверждается в пробирке работы показывает положительную зависимость доза-реакция между концентрации тромбоцитов и пролиферацию человеческих мезенхимальных стволовых клеток, пролиферацию фибробластов, и производство коллагена типа I. [23]. Это говорит о том, что применение аутологичных PRP может улучшить заживление ран, как это было продемонстрировано в контролируемых исследованиях на животных для мягких и твердых тканей [24, 25].

Аутологичной PRP представляет эффективное лечение для ее использования в процессе заживления ран, как хронические диабетические язвы ног из-за многочисленных факторов роста, является безопасным для его аутологичных природы, и производится по мере необходимости из крови пациента. Как мы уже говорили, ключ для самовосстановления [26].

После активации тромбоцитов освободить их гранулярное содержимое в окружающую среду. Тромбоцитов гранул альфа изобилии и содержат много GFs ответственных за инициацию и поддержание заживления [14]. Эти GFs было показано, играют важную роль на всех этапах лечения. Активный секреции этих белков тромбоцитов начинается в течение 10 минут после свертывания, при этом более 95% от синтезированного GFs секретируемых в течение 1 часа. После этого первоначального всплеска, тромбоциты синтезируют и секретируют дополнительные белки для баланса их жизни (5-10 дней) [10].

Матрица фибрина, образовавшихся после активации тромбоцитов также имеет стимулирующее действие на заживление ран. Фибринового матрикса формы путем полимеризации фибриногена плазмы после либо внешнее управление с кальцием или тромбин или внутренней активации эндогенного тканевого тромбопластина [23]. Эта матрица ловушки тромбоцитов позволяет медленное высвобождение природное сочетание GF обеспечивая при этом предварительную матрицу, которая обеспечивает физическую основу для ран стволовых клеток и миграцию фибробластов и представления других биологических медиаторов, таких как клей гликопротеины [27, 28].с тромбоцитами концентрации по меньшей мере 1 000 000 тромбоцитов / м л в 5 мл плазмы связано с повышением заживления [29]. PRP может привести к усилению заживления по доставке различных GF и цитокинов из альфа-гранул, содержащихся в тромбоцитах и имеет 8-кратное увеличение концентрации GF сравнению с цельной крови [30].

Использование PRP для повышения регенерации костных и мягких тканей созревания резко возросло в области ортопедии, пародонтологии, челюстно-лицевой хирургии, урологии и пластической хирургии в последние годы. Тем не менее, противоречия существуют в литературе относительно дополнительное преимущество этой процедуры. В то время как некоторые авторы сообщают о существенном росте в формировании костей и созревания цены [21], другие не наблюдали улучшения [31].

Процесс заживления ран представляет собой сложный механизм характеризуется четыре разных, но перекрытия, фазы: гемостаз, воспаление, пролиферацию и ремоделирование [8]. Пролиферативной фазы включает в себя формирование кровеносных сосудов эндотелиальными клетками и костного синтеза остеобластов. Все эти события координируются межклеточных взаимодействий и растворимым GF, изданных различными типами клеток. Последние отзывы подчеркнули необходимость дополнительных исследований, направленных на характеризуют PRP с точки зрения содержания и GF их физиологическую роль в заживлении ран [32 - 34].

Тромбина представляет собой сильную индуктором активации тромбоцитов, ведущей к GF релиз [35]. Известно также, что частицы трансплантаты, в сочетании с кальцием и тромбин рассматриваться PRP, обладают лучшими характеристиками управляемости и выше GF содержанию [31]. Как правило, тромбин концентраций, используемых в клинической практике варьировать от 100 до 200 единиц на мл [21], в то время агрегации тромбоцитов максимальна в диапазоне от 0,5 до 4 единиц на мл [36].

Основные цитокины, выявленных в тромбоциты играют важную роль в клеточной пролиферации, хемотаксис, дифференцировку клеток, регенерации и ангиогенеза [28].Конкретное значение PRP, что эти цитокины родной всех присутствующих в «нормальных» соотношения биологической. Тромбоцитов в PRP поставляются в сгусток, который содержит несколько молекул клеточной адгезии, включая фибронектин, фибрин, и витронектин. Эти молекулы адгезии клеток играют важную роль в миграции клеток и, следовательно, также добавить к потенциальной биологической активностью ПРП. Сгусток само по себе может также играть роль в заживлении ран, выступая в качестве проводящей матрицы или «эшафот», на которой клетки могут придерживаться и начать Процесс заживления ран [28].может быть сделано только с антикоагулированной крови. Подготовка PRP начинается добавлением цитрата в цельной крови для связывания ионизированного кальция и ингибируют свертывание [15]. Далее следуют один или два шага центрифугирования. Первый шаг центрифугирования отделяет красных и белых клеток крови от плазмы и тромбоцитов. Второй стадии центрифугирования далее концентратов тромбоцитов, производя PRP отдельно от бедной тромбоцитами плазмы [19].

Важным моментом является то, что приводит к свертыванию активации тромбоцитов, что приводит к высвобождению GF от альфа-гранул, иначе известный как дегрануляции. Примерно 70% хранится GFs сообщаются в течение 10 минут, а почти 100% GFs сообщаются в течение 1 часа. Небольшие количества GF может продолжать быть получена тромбоцитов в течение остальной части своей жизни (1 неделя) [21].

Метод задержки выпуска GF возможно путем добавления хлорида кальция (CaCl ₂), чтобы инициировать образование автогеном тромбина из протромбина. CaCl ₂ добавляют во время второй стадии центрифугирования и приводит к образованию плотной матрицы фибрина. Интактные тромбоциты впоследствии оказавшихся в фибрин матрицы и высвобождение GF медленно, в течение 7-дневного периода. Матрица фибрина сама по себе может также способствовать заживлению путем предоставления проводящим каркасом для миграции клеток и формирования новой матрице [27].

Факторы роста (GFS)

Тромбоциты, как известно, содержат высокие концентрации различных GF и имеют чрезвычайно важное значение в регенеративных процессов; активация тромбоцитов эндотелиальной травмы инициирует Процесс заживления ран [30]. Когда тромбоциты активированы, их гранул альфа выпущены, что приводит к увеличению концентрации GF в ране среде [14].

Существует все больше доказательств того, что клеточные мембраны тромбоцитов и сами играют важную роль в заживлении ран через их GF рецепторов [28]. GFs находятся в широком спектре клеток и тромбоцитов гранул альфа [37]. Таблица 1 дает обзор некоторых из наиболее широко изучены GFs и их участие в заживлении ран. Есть еще очень много, как открытых и неоткрытых, СГФ. Тромбоцитов является чрезвычайно важной ячейки в заживлении ран, поскольку он инициирует и играет важную роль в процессе регенеративной раны [38].

Первым обнаруженным GF EGF была в 1962 году Коэн [39].Он не был до 1989 года, до клинических испытаний с EGF были попытался продемонстрировать улучшение заживления раны. Исследование было показано, что EGF может ускорить регенерацию эпидермиса и повышения заживления хронических ран [40].была обнаружена в 1974 году и является вездесущим в организме. Известно, который будет выпущен альфа-гранул тромбоцитов во время заживления раны и стимулируют пролиферацию многих клеток, включая клетки соединительной ткани. В самом деле, до сих пор, с высоким сродством рецепторов клеточной поверхности специфичные для PDGF только были продемонстрированы на клетки соединительной ткани. При отпускании PDGF хемотактичен на моноциты, нейтрофилы и фибробласты. Эти клетки выпускают свои собственные PDGF, создавая тем самым положительный аутокринные обратной связи [41]. Другие функции включают PDGF воздействие на клеточный рост, миграцию клеток, метаболические эффекты и модуляция рецепторов клеточной мембране [42].впервые были идентифицированы как продукты тромбоцитов которые стимулируют пролиферацию в пробирке соединительной ткани типов клеток, таких как фибробласты [43].

Система PDGF, содержащего четыре изоформы (PDGF-A, - B, - C и-D) и две цепи рецептора (PDGFR-альфа и-бета), играет важную роль в заживлении ран, атеросклероз, фиброз и злокачественных новообразований. Компоненты системы экспрессируются конститутивно или индуцибельно в большинстве клеток почек [42]. Они регулируют множество патофизиологических событий, начиная от клеточной пролиферации и миграции в накоплении внеклеточной матрицы, производство про-и противовоспалительных медиаторов, проницаемость тканей и регуляции гемодинамики [43]. Инактивация PDGF-B и PDGF бета-рецептора (PDGFRb) генов путем гомологичной рекомбинации в эмбриональных стволовых клетках показывает, сердечно-сосудистой, гематологической и почечной дефектов. Последнее особенно интересно, поскольку он состоит из специфического клеточного дефекта: полную потерю почки клубочковой мезангиальных клеток и отсутствие мочи в мочевом пузыре [43].C и PDGFR-альфа способствовать формированию почечной корковых интерстиций. Почти во всех экспериментальных и почек человека заболевания характеризуются измененную экспрессию компонентов системы PDGF. Инфузионный или системного сверхэкспрессией PDGF-B или-D вызывает известный мезангиопролиферативный изменений и фиброза почек. Вмешательство исследования идентифицировали PDGF-C в качестве медиатора почечный интерстициальный фиброз и PDGF-B-и D в качестве основных факторов, участвующих в мезангиопролиферативный заболевание почек и интерстициальный фиброз [43 - 45].

Фрешетт соавт., Показал, что выход PDGF-B, TGF-бета1, BFGF и VEGF значительно регулируется количество кальция и тромбина добавлен к PRP и PRP супернатантов более митогенная для эндотелиальных клеток, чем цельной крови Супернатанты [11]. Другие GFs, таких как эпидермальный фактор роста (EGF), трансформирующий фактор роста-альфа (TGF-альфа), инсулин-подобный фактор роста-1 (IGF-1), ангиопоэтин-2 (Ang-2) и интерлейкина-1 бета (IL -1-бета), как известно, играют важную роль в процессе заживления ран [28]. В 2008 году Вальстром соавт., Показали, что факторы роста освобожден из тромбоцитов было мощное воздействие на разрушение и заживление ран. Кислый прилива заживления ран, то есть рН в ранах и переломах, изменяется от кислого рН до нейтральной и щелочной рН, что и процесс заживления прогрессирует [44]. Они исследовали влияние рН на Лизированные концентратов тромбоцитов в связи с освобождением из факторов роста. Концентраты тромбоцитов бесплатно лейкоцитов компонентов лизировались и инкубировать в буферы с рН от 4,3 до 8,6. Костного морфогенетического белка-2 (BMP-2), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), трансформирующий фактор роста-бета (TGF-бета) и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) измеряли с помощью количественного иммуноферментного анализа. BMP-2 был обнаружен только в наиболее кислых препарат (рН 4,3), который интересен тем, что ВМР-2, было сообщено, что эндогенный медиатор репарации переломов и нести ответственность за инициирование заживление переломов. Эти результаты показывают, что тромбоциты выпустить значительное количество БМП-2 только в условиях низкого рН, среды, связанные с критическим начальной стадии заживления переломов [44].

Недавно Бира др., показали стромальной клетки, полученные фактор 1 - б (SDF-1 б) PRP от диабетических мышей. Концентрация (мкг/мл) в различных факторов роста было значительно выше в группе PRP, чем в бедной тромбоцитами плазмы (БТП) группой. Концентраций (пг/мл) SDF-1 б (10790 ± 196 против 810 ± 39), PDGF-BB (45352 ± 2698 против 958 ± 251), VEGF (53 ± 6 против 30 ± 2), BFGF (29 ± 5 против 9 ± 5), IGF-1 (20628 ± 1180 по сравнению с 1214 ± 36) были значительно выше в группе PRP, чем в ППС группы соответственно [46].

Тромбоциты GF как лечение