Противотуберкулёзные препараты. Механизмы дейсвия

Активностью в отношении M.tuberculosis обладает значительное число препаратов, отличающихся по происхождению, химической структуре и механизму действия. В основу современных классификаций положена клиническая эффективность и переносимость противотуберкулезных препаратов.

Наиболее распространенной является классификация, согласно которой все ПТП подразделяются на препараты I (изониазид, рифампицин, пиразинамид, стрептомицин,этамбутол) и II ряда (этионамид, протионамид, циклосерин, капреомицин, канамицин, амикацин, рифабутин, ципрофлоксацин, офлоксацин, парааминосалициловая кислота (ПАСК).

В классификацию ПТП Международного союза борьбы с туберкулезом и болезнями легких (МСТБЛ) не включены капреомицин, амикацин, рифабутин и фторхинолоны, входящие в стандарты химиотерапии многих стран.

Наиболее высокой активностью в отношении микобактерий туберкулеза обладают изониазид и рифампицин, поэтому стратегия современной химиотерапии пациентов с впервые выявленным туберкулезом строится на использовании сочетания именно этих препаратов. Комбинирование изониазида и рифампицина с другими ПТП I ряда (пиразинамид, стрептомицин и этамбутол) позволяет достичь излечения большинства пациентов. Наряду с комбинацией монокомпонентных средств применяются комбинированные ПТП, представляющие собой различные сочетания препаратов I ряда.

Препараты II ряда, или резервные, используются для лечения полирезистентного туберкулеза. Выбор препаратов и длительность их применения зависят от формы туберкулеза, клинического течения, характера предыдущего лечения, чувствительности M.tuberculosis и переносимости ПТП пациентами.

Свойства аминогликозидов и фторхинолонов, относящихся к ПТП, описаны выше (см. соотв. главы) и в этом разделе рассматриваться не будут.

Изониазид

Механизм действия связан с угнетением синтеза миколевой кислоты в клеточной стенке M.tuberculosis. Изониазид оказывает бактерицидное действие на микобактерии в стадии размножения и бактериостатическое - в стадии покоя. При монотерапии изониазидом к нему быстро (в 70% случаев) развивается устойчивость.

РифампицинОбладает бактерицидным эффектом, является специфическим ингибитором синтеза РНК.

Рифабутин

Оказывает слабое бактерицидное действие на M.tuberculosis, но выраженное «стерилизующее» действие, особенно внутри макрофагов и в очагах свежего воспаления. Действует на медленно размножающиеся микобактерии, в том числе располагающиеся вне- и внутриклеточно. На персистирующие формы наибольший эффект оказывает в кислой среде. Точный механизм действия не установлен

Активность этамбутола связана с ингибированием ферментов, участвующих в синтезе клеточной стенки микобактерий. Препарат оказывает бактериостатическое действие. Активен только в отношении размножающихся микобактерий, эффект развивается через 1-2 дня. Этамбутол

Противотуберкулезные средства — лекарственные препараты, оказывающие химиотерапевтическую эффективность в лечении различных форм туберкулеза.

Фармакологические эффекты. Основной фармакологический эффект — это специфическая бактериостатическая активность в отношении микобактерий туберкулеза. Как правило, свежие, остро протекающие туберкулезные процессы начинают лечить препаратами I ряда, обладающими наибольшей противотуберкулёзной активностью (изониазид и его производные, ПАСК и её производные, стрептомицин). Однако следует учитывать, что к препаратам I ряда довольно быстро развивается устойчивость микобактерийтуберкулеза. Препараты II ряда (этионамид, протионамид, этамбутол, пиразинамид, тиоацетазин, циклосерин, канамицин, флоримицин) менее активны по действию на микобактерии туберкулеза, чем препараты I ряда, но они действуют на микобактерии, ставшие химиорезистентными к препаратам I ряда.

Некоторые противотуберкулезные препараты оказались эффективны и для лечения других заболеваний. Например, этионамид применяют для лечения лепры; пасjмицин для лечения неспецифических Пневмоний, гнойных процессов, вызываемых чувствительными к стрептомицину бактериями, а также в предоперационном периоде у лиц, имеющих в анамнезе туберкулезный процесс. Рифампицин кроме лечения туберкулеза принимают при лепре, бронхитах, пневмонии (вызванных полирезистентными стафилококками), при остеомиелите, инфекциях моче и желчевыводящих путей,

острой гонорее. Он также оказывает вирулоцидное действие на вирус бешенства, подавляет развитие рабического энцефалита (комплексное лечение бешенства в инкубационном периоде).

Механизмы действия. Механизм действия большинства противотуберкулезных препаратов состоит в их способности тормозить различными способами биосинтез белка на уровне рибосом, угнетая рост и размножение и уменьшая вирулентность микобактерий туберкулеза.

23. ПРОТИВОВИРУСНЫЕ ПРЕПАРАТЫ, МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ. Противовирусные препараты — соединения природного или синтетического происхождения, применяющиеся для лечения и профилактики вирусных инфекций. Действие многих из них избирательно направлено на различные стадии развития вирусной инфекции и жизненного цикла вирусов

На стадии заражения вирус адсорбируется на клеточной мембране и проникает в клетку. В этот период применяются препараты, нарушающие этот процесс: растворимые ложные рецепторы, антитела к мембранным рецепторам, ингибиторы слияния вируса с клеточной мембраной.

На стадии пенетрации вируса, когда происходит депротеинизация вириона и «раздевание» нуклеопротеида, эффективны блокаторы ионных каналов и стабилизаторы капсида.

На следующем этапе начинается внутриклеточный синтез вирусных компонентов. На этом этапе эффективны ингибиторы вирусных ДНК-полимераз, РНК-полимераз, обратной транскриптазы, геликазы, праймазы, интегразы. На трансляцию вирусных белков действуют интерфероны (ИФН), антисмысловые олигонуклеотиды, рибозимы и ингибиторы регуляторных белков. На протеолитическое расщепление воздействуют ингибиторы протазы.

ИФН и ингибиторы структурных белков активно воздействует на сборку вируса.

Заключительный этап репликационного цикла включает выход дочерних вирионов из клетки и гибель инфицированной клетки-хозяина. На этом этапе эффективны ингибиторы нейраминидазы, противовирусные антитела и цитотоксические лимфоциты.

Противовирусные препараты — лекарственные средства, предназначенные для лечения различных вирусных заболеваний: гриппа, герпеса, ВИЧ-инфекции и др. Могут использоваться в профилактике заражения некоторыми вирусами..

ВОЗ в качестве противовирусных включил в свой модельный список Основных лекарственных средств (по состоянию на март 2007 — 15-я редакция) следующие препараты с доказанной эффективностью:• Противогерпетические: Ацикловир• Другие антиретровирусные лекарственные средства: Рибавирин• Антиретровирусные:• Нуклеозиды/Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы: Абакавир (ABC), Диданозин (ddI), Эмтрицитабин (FTC), Ламивудин (3TC), Ставудин (d4T), Тенофовир дизопроксил фумарат (TDF), Зидовудин (ZDV или AZT)• Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы: Эфавиренз (EGV или EFZ), Невирапин (NVP)• Ингибиторы протеазы: Индинавир (IDV), Лопинавир + ритонавир (LPV/r), Нельфинавир (NFV), Ритонавир, Сакинавир (SQV)

По принципу действия противовирусные препараты подразделяются на две группы: стимулирующие иммунную системы атаковать вирусы, и атакующие вирусы напрямую. Препараты второй группы различаются по этапу жизненного цикла вируса, на котором они активны: препятствующие проникновению вируса в клетку, препятствующие размножения вируса внутри клетки, и препятствующие выходу копий вируса из клетки.

24. ПРОТИВОГРИБКОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ,МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ. В настоящее время сущесвует 4 группы противогрибковых препаратов для системного действия: антибиотики, пиримидиновые производные, азолы и прочие препараты. Среди них по методу введения можно выделить препараты для применения только внурть или только парентерально, а также препараты, имеющие две формы: для применения внутрь и парентерально (в классификации препаратов отмечены звездочками). Все остальные препараты могут применяться только местно.

Механизм действия большинства противогрибковых препаратов связан с воздействием на основные ферменты, влияющие на процесс биосинтеза эргостерола, входящего в состав мембраны клеток гриба, однако уровень воздействия различен. Как известно, синтез эргостерола проходит стадии: Ацетил - коэнзим А - Сквален - Ланостерин - Эргостерол.

Противогрибковые средства (антимикотики) — лекарственные средства, обладающие фунгицидным или фунгистатическим действием и применяемые для профилактики и лечения микозов.

Для лечения грибковых заболеваний используют ряд лекарственных средств, различных по происхождению (природные или синтетические), спектру и механизму действия, противогрибковому эффекту (фунгицидный или фунгистатический), показаниям к применению (местные или системные инфекции), способам назначения (внутрь, парентерально, наружно).

Существует несколько классификаций лекарственных средств, относящихся к группе антимикотиков: по химической структуре, механизму действия, спектру активности, фармакокинетике, переносимости, особенностям клинического применения и др.

25. ОСЛОЖНЕНИЯ ПРИ АНТИБИОТИКОТЕРАПИИ И ПУТИ ИХ ПРЕОДОЛЕНИЯ. Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и на микробы, и на другие лекарственные средства.

Осложнения со стороны макроорганизма

Наиболее частыми осложнениями антимикробной химиотерапии являются:Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от свойств самого препарата, его дозы, способа введения, состояния больного и проявляется только при длительном и систематическом применении антимикробных химиотерапевтических препаратов, когда создаются условия для их накопления в организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к аналогичным структурам клеток макроорганизма. Токсическому действию антимикробных препаратов особенно подвержены дети, беременные, а также пациенты с нарушением функций печени, почек.

Побочное токсическое влияние может проявляться как нейротоксическое (например, гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до полной потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены, полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды, сульфаниламиды); общетоксическое (противогрибковые препараты — полиены, имидазолы); угнетение кроветворения (тетрациклины, сульфаниламиды, левомицетин/хлорамфеникол, который содержит нитробензен — супрессор функции костного мозга);

Предупреждение осложнений состоит в отказе от противопоказанных данному пациенту препаратов, контроле за состоянием функций печени, почек и т. п.

Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особенно широкого спектра, могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на чувствительные микроорганизмы нормальной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, поэтому нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и может развиться вторичная инфекция (в том числе эндогенная, например кандидоз, псевдомембранозный колит). Предупреждение последствий такого рода осложнений состоит в назначении, по возможности, препаратов узкого спектра действия, сочетании лечения основного заболевания с противогрибковой терапией (например, назначением нистатина), витаминотерапей, применением эубиотиков и т. п.

Отрицательное воздействие на иммунную систему. К этой группе осложнений относят прежде всего аллергические реакции. Причинами развития гиперчувствительности может быть сам препарат, продукты его распада, а также комплекс препарата с сывороточными белками. Возникновение такого рода осложнений зависит от свойств самого препарата, от способа и кратности его введения, индивидуальной чувствительности пациента к препарату. Аллергические реакции развиваются примерно в 10 % случаев и проявляются в виде сыпи, зуда, крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается такая тяжелая форма проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще дают бета-лактамы (пенициллины), рифамицины. Сульфаниламиды могут вызвать гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждениеосложнений состоит в тщательном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают некоторым иммунодепрессивным действием и могут способствовать развитию вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.

Эндотоксический шок (терапевтический). Это явление, которое возникает при лечении инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение антибиотиков вызывает гибель и разрушение клеток и высвобождение больших количеств эндотоксина. Это закономерное явление, которое сопровождается временным ухудшением клинического состояния больного.

Взаимодействие с другими препаратами. Антибиотики могут способствовать потенцированию действия или инактивации других препаратов (например, эритромицин стимулирует выработку ферментов печени, которые начинают ускоренно метаболизировать лекарственные средства разного назначения).

Побочное воздействие на микроорганизмы

Применение антимикробных химиопрепа-ратов оказывает на микробы не только прямое угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к формированию атипичных форм микробов (например, к образованию L-форм бактерий или изменению других свойств микробов, что значительно затрудняет диагностику инфекционных заболеваний) и персистирующих форм микробов. Широкое использование антимикробных лекарственных средств ведет также к формированию антибиотикозависимости (редко) и лекарственной устойчивости — антибиотикорезистентности (достаточно часто).

Антибиотики имеют множество побочных эффектов. В этой статье приводится практически все, осложнения при приеме антибиотиков. Аллергические реакции — патологическое состояние, обусловленное сенсибилизацией организма антибиотиками. Характер их бывает разнообразным:• реакция аллергического типа (шок, сывороточная болезнь);• кожные реакции;• органотропное действие антибиотиков в результате аллергизации.

Токсическое действие антибиотиков проявляется в нескольких формах:• Нейротоксическое действие (влияние на ЦНС, невриты, полиневриты, нервно-мышечный блок).• Токсическое действие на внутренние органы и систему кроветворения.• Тератогенное действие антибиотиков.

Поражение ЦНС — редкое осложнение. При назначении пенициллина отмечается в 1%. Возникают явления дезориентации, галлюцинаций, судорог, головных болей.

Невриты и полиневриты чаще возникают со стороны слухового нерва, что сопровождается потерей слуха и вестибулярными расстройствами (стрептомицин, неомицин, ристомицин, биомицин). Иногда поражается зрительный нерв; поражаются и периферические нервные стволы. Нервно-мышечный блок вызывается неомицином, стрептомицином, полимиксином. При этом развивается апноэ, как результат тотальной курарезации, и в результате этого остановка дыхания. Чаще всего это осложнение встречается после введения больших доз антибиотиков под наркозом. Это состояние лучше всего купируется введением хлористого кальция, чем прозерина.

Отрицательное действие на кроветворение отмечается рядом характерных изменений от угнетения одного из ростков до полной аплазии костного мозга. Чаще отмечается при применении левомицетина, стрептомицина. Лечение: смена препарата. Для профилактики: витамины В1, B2, B12, В6, аскорбиновая кислота.

Отрицательное действие на желудочно-кишечный тракт проявляется тошнотой, рвотой, поносом, Чаще всего возникает при пероральном применении тетрациклина.

Генез: повреждение слизистой, что приводит к легкому проникновению микробов через поврежденную слизистую; отмечается токсическое действие антибиотиков на печень и почки.

Органотоксическое действие может проявляться в действии на сердечно-сосудистую систему с развитиемстенокардии, экстрасистолии, падением артериального давления, возникновением геморрагического васкулита.

Токсическое воздействие антибиотиков на плод при лечении беременных женщин стрептомицином вызывает у плода поражение слуха, печени, почек. Отмечаются случаи поражения скелета, зубов, как результат применения тетрациклина.

Побочные реакции, обусловленные непосредственным фармакодинамическим действием антибиотиков:• Токсический шок.• Дисбактериозы.• Суперинфекции.

Реакция обострения (токсический шок) зависит от высокой концентрации антибиотиков, отличается быстротечностью и не требует специальной терапии.

Дисбактериоз развивается по следующему механизму: антибиотики при их воздействии на возбудителя инфекции действуют на все чувствительные к нему микроорганизмы, в том числе и на сапрофиты. Благодаря естественному антагонизму поддерживается определенная бактериальная среда в органах, например, в кишечнике. Изменение нормальной флоры — дисбактериоз, приводит к определенным клиническим проявлениям, снижению эффективности антибиотикотерапии, гипо или авитаминозам.

Профилактика развития осложнений состоит прежде всего в соблюдении принципов рациональной антибиотикотерапии

• Микробиологический принцип. До назначения препарата следует установить возбу-дителя инфекции и определить его индивидуальную чувствительность к антимикробным химиотерапевтическим препаратам. По результатам антибиотикограммы больному назначают препарат узкого спектра действия, Если возбудитель неизвестен, то обычно назначают препараты более широкого спектра, активные в отношении всех возможных микробов, наиболее часто вызывающих данную патологию.

• Фармакологический принцип. Учитывают особенности препарата — его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания препаратов. Дозы препаратов продолжительность лечения,

• Клинический принцип. При назначении препарата учитывают, насколько безопасным он будет для данного пациента, что зависит от индивидуальных особенностей состояния больного • Эпидемиологический принцип. Выбор препарата, особенно для стационарного больного, должен учитывать состояние резистентности микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже регионе.

26. Механизмы возникновения и распространения лекарственной устойчивости бактерий. Пути преодоления. Устойчивость микроорганизмов к действию антимикробных средств

Известно два типа устойчивости микроорганизмов к антимикробным средствам - естественная (природная) и приобретённая. Естественная резистентность относится к видовым признакам микроба. Она, в основном связана с отсутствием мишеней на клеточной стенке либо непроницаемостью последней для определённых ЛС.

Химиорезистентность у бактерий

К основным механизмам резистентности к действию антибактериальных средств относят способность к синтезу инактивирующих ферментов и модификация мишеней, с которыми взаимодействует лекарственный препарат. Устойчивость к фармакологическим воздействиям обусловливают естественные (внутренние) и приобретённые факторы.

Устойчивость, не связанная с наследуемыми свойствами

• Изменение метаболической активности клеток-мишеней. Большинство антибактериальных средств эффективно подавляет жизнедеятельность лишь активно растущих клеток. Значительная часть возбудителей, пребывая в латентной стадии, способна выживать в тканях в течение многих лет, оставаясь при этом резистентными к действию ЛС (например, микобактерии туберкулёза).
• Уменьшение количества мишеней для ЛС. Проводимая химиотерапия способна уменьшать количество мишеней для действия препарата. Например, под действием пенициллинов отдельные бактерии способны трансформироваться в L-формы, лишённые клеточной стенки и поэтому резистентные к действию антибиотиков с подобным механизмом действия.

Устойчивость, обусловленная изменениями генома

• Мутации приводят к изменениям структурных белков (например, в структуре 30 S субъединиц рибосом, поринов или пенициллин-связывающих белков клеточной стенки) и ферментов (например, ДНК-зависимых РНК-полимераз или ДНК-гираз). Также возможны мутации в локусе гена, кодирующего чувствительность к ЛС. Спонтанные мутации, наблюдаемые с частотой от 10-7 до 10-12, играют очень незначительную роль в формировании резистентности.
• Селекция штаммов. На фоне применения антибактериального средства часто происходит селекция штаммов, способствующая выживанию и последующему доминированию в популяции бактерий с резистентностью к ЛС. Подобным путём ряд штаммов золотистого стафилококка вырабатывает устойчивость к метициллину. Эти штаммы известны как MRSA [от англ. methicillin resistant S. aureus].

Плазмиды резистентности

Плазмиды резистентности обычно представлены внехромосомными молекулами ДНК. Бактерии, наиболее часто содержащие такие плазмиды, перечислены в табл. 9-1. Плазмиды могут включать один и более генов, кодирующих синтез ферментов, осуществляющих инактивацию или модификацию ЛС, а также опосредующих быструю элиминацию ЛС из клетки. Гены множественной устойчивости могут также кодировать транспозоны, интегрированные в плазмиды. Плазмиды грамотрицательных бактерий, или R-факторы [от англ. resistance, устойчивость] могут придать устойчивость к одному или нескольким ЛС одновременно. Плазмиды способны вызывать состояние эпидемической резистентности передачей соответствующих дочерних популяций плазмид посредством бактериальной конъюгации или трансдукции.

Механизмы формирования лекарственной устойчивости

Защиту бактерий от действия ЛС обеспечивает комплекс факторов, основными из которых считают ферментативную инактивацию препаратов и удаление либо маскировку рецепторов для них. Гены, кодирующие синтез продуктов, обусловливающих лекарственную устойчивость, могут быть хромосомными либо включенными в состав R-плазмид, передаваемых в бактериальной популяции. Ферментативная инактивация ЛС

Ферментативная инактивация ЛС реализуется внеклеточно и внутриклеточно. Изменения активности ферментов связаны с мутациями генов, кодирующих их структуру, либо с увеличением образования числа копий генов, кодирующих его (амплификация).

р-Лактамазы. Механизм действия обусловлен разрушением р-лактамного кольца в молекулах антибиотиков (рис. 9-11). Стафилококки секретируют ферменты после попадания препарата в окружающую их среду, что приводит к снижению его концентрации. Для них характерна попу-ляционная резистентность - большая доза инфекционного агента вызывает более интенсивное развитие устойчивости. Синтез ферментов кодируют индуцибельные гены, то есть р-лактамазы более интенсивно образуются в присутствии препарата. Более тонкая клеточная стенка грамотрицательных бактерий позволяют антибиотикам проникать внутрь клетки, где они взаимодействуют с р-лактамазами в периплазматическом пространстве. Грамотрицательные бактерии (эшерихии, синегнойная палочка) проявляют более выраженную резистентность (по сравнению с грамположительными бактериями), не зависящую от дозы инфекционного агента. По специфичности действия р-лактамазы, продуцируемые грамотрицательными бактериями, разделяют на несколько групп (взаимодействующие только с пенициллинами, или цефалоспоринами, или и с обеими группами антибиотиков). У грамотрицательных бактерий синтез $-лактамаз происходит перманентно, вне зависимости от наличия ЛС. Ацетилтрансферазы, фосфорилазы и нуклеотидазы стрептококков, стафилококков, эн-теробактерий и синегнойной палочки модифицируют аминогликозиды, препятствуя их связыванию с рибосомами (механизм действия хлорамфеникол ацетилтрансферазы, продуцируемой стафилококками и энтеробактериями аналогичен действию ацетилтрансфераз аминогликози-дов). Ферменты расположены на поверхности ЦПМ и инактивируют лишь часть препарата, проникшего в клетку, так что концентрация препарата в биологических жидкостях снижается незначительно (не более чем на 0,5%).

Изменения проницаемости клеточной стенки

Способность к проникновению ЛС в бактерию детерминирована самой природой клеточной стенки. Например, большинство антибиотиков легко попадает внутрь грамположительных бактерий, в то время как оболочка грамотрицательных микроорганизмов служит барьером для многих из них, в особенности, если мишени расположены в цитоплазме и препараты проявляют выраженную гидрофильность (тетрациклины, аминогликозиды, макролиды и др.). Порины - образующие каналы в мембране энтеробактерий белки, опосредующие проникновение многих гидрофильных антибиотиков; различные факторы (например, мутации) изменяют структуру канала и тем самым снижают проницаемость клеточной стенки. ЛПС ингибируют проникновение через клеточную стенку гидрофобных (липофильных) антибактериальных агентов. R-формы, лишённые полисахаридной капсулы и содержащие незначительные количества ЛПС, обычно чувствительны к большинству антибиотиков. Изменения электронного транспорта. Проникновение аминогликозидов прямо зависит от переноса электрона к атому кислорода; такие препараты неэффективны против анаэробов и факультативных бактерий, пребывающих в анаэробных условиях (например, при образовании абсцессов). Ферментирующие бактерии (например, стрептококки) также резистентны к их действию.

27. диско-дифффузионный метод определения чувствительности бактерий к антибиотикам. Критерии интерпретации результатов. Диффузионные методы

Диффузионные методы менее точны, чем методы разведений, но более просты в исполнении и позволяют определять чувствительность к нескольким ЛС одновременно. Поэтому их чаще применяют на практике. Исходный метод. Чашки Петри заполняют питательной средой, соответствующей пищевым потребностям возбудителя, слоем в 4-5 мм. После застывания агар подсушивают в термостате при 37 °С в течение 20 мин. Посев тест-культуры можно осуществлять внесением в полуостывший агар, но чаще микробную взвесь наслаивают на агар. После равномерного распределения по поверхности излишки взвеси удаляют, а чашки подсушивают в термостате. В агаре пробивают лунки и в каждую вносят по 0,1 мл раствора исследуемых препаратов, после чего инкубируют 18 ч при 37 °С (срок инкубации может варьировать в зависимости от скорости роста микроорганизма). Активность учитывают, измеряя диаметр зоны подавления роста для каждого препарата. Метод дисков. В настоящее время вместо классического (исходного) метода повсеместно применяют модификацию, предложенную Кйрби и Бауэром и признанную стандартным тестом (рис. 9-13). После посева тест-культуры на агар наносят диски из фильтровальной бумаги, пропитанные различными антимикробными препаратами (используют коммерческие образцы, содержащие известные концентрации). После инкубации при 37 °С в течение времени, необходимого для роста выделенного возбудителя, проводят определение диаметра зоны торможения роста. Размеры зон, полученные в опыте, сравнивают с величинами зон задержки роста, указанными в инструкциях, прилагаемых к дискам, после чего выделенные микроорганизмы относят к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

 

 

28. метод серийных разведений для определения чувствительности бактерий к антибиотикам. Критерии интерпретации результатов. Методы определения чувствительности к антимикробным агентам

Критериями активности того или иного препарата выступают минимальная ингибирую-щая концентрация (МИК) - наименьшая концентрация препарата, тормозящая рост тест-культуры и минимальная бактерицидная концентрация (МБК) - наименьшая концентрация препарата, вызывающая бактерицидный эффект.

Серийные разведения в жидких средах

Метод серийных разведений в жидких средах позволяет установить МИК и МБК препарата для выделенного возбудителя. Исследования можно выполнять в различных объёмах питательной среды (1-10 мл). Используют жидкие питательные среды, соответствующие пищевым потребностям возбудителя. В пробирках (обычно восьми) готовят серию двойных разведений препарата на питательной среде. Концентрацию уменьшают соответственно от 128 до 0,06мкг/мл (базовая концентрация может варьировать в зависимости от активности препарата 0.25,0.5, 1,2,4,8,16,32….). Конечный объём среды в каждой пробирке составляет 1 мл. Контролем служит пробирка, содержащая чистую питательную среду. В каждую пробирку вносят по 0,05 мл физиологического раствора, содержащего 106/мл микробных клеток. Пробирки инкубируют 10-18 ч при 37 °С (или до появления бактериального роста в контрольной пробирке). По истечении указанного срока результаты учитывают по изменению оптической плотности среды визуально или нефелометрически (рис. 9-12). Также можно применять модифицированный метод, используя среду, дополненную глюкозой и индикатором. Рост микроорганизмов сопровождается изменением рН среды и, соответственно, окраски индикатора.

Серийные разведения в плотных средах

Метод серийных разведений в плотных средах во многом аналогичен методу разведений в жидких средах, но определение МБК требует более сложных манипуляций. Готовят двойные серийные разведения препарата от 1:10 000 до 1:320 000, затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие по 4 мл (или 9 мл) охлаждённого до 45 °С агара. Процедуру проводят одной пипеткой с перенесением препарата от меньшей концентрации к большей. Содержимое пробирок можно быстро внести в чашки Петри, либо пробирки «скашивают» до застывания агара. Затем агар засевают исследуемой стандартизированной тест-культурой (петлёй или специальным дозатором, засевающим чашку 36 видами различных микроорганизмов) и инкубируют 18-20 ч при 37 °С. После инкубации определяют МИК по отсутствию роста на чашках (пробирках), содержащих наименьшие концентрации препарата.