Аналитические характеристики набора

Продолжительность АЧТВ в контрольной плазме без активатора в диапазоне 25-35 сек.

Продолжительность АЧТВ в контрольной плазме с активатором в диапазоне 75-130 сек.

Коэффициент вариации определений АЧТВ в контрольной плазме без активатора или с активатором не более 10%.

Допустимый разброс результатов при определении АЧТВ в контрольной плазме без активатора или с активатором при использовании реагентов из разных наборов одной серии не более 10%.

Порядок применения

При проведении исследования определяют 4 показателя:

1. АЧТВ контрольной плазмы без активатора;

2. АЧТВ контрольной плазмы с активатором;

3. АЧТВ плазмы пациента без активатора;

4. АЧТВ плазмы пациента с активатором.

Результаты анализа представляют в виде нормализованного отношения (НО, усл. ед.) по формуле:

       ,

 

где: АРТТ_а - АЧТВ плазмы с активатором, сек;

  АРТТ - АЧТВ плазмы без активатора, сек;

(АРТТ_а /АРТТ)_В – отношение активированного АЧТВ пациента к АЧТВ того же

пациента без активации, усл. ед.;

(АРТТ_а /АРТТ)_Н  - отношение активированного АЧТВ плазмы-калибратора к

АЧТВ плазмы-калибратора без активации, усл.ед.;.

Интерпретация результатов

У здоровых лиц НО составляет 0,7 - 1,3 усл. ед. Значение НО ниже 0,7 свидетельствует о значительных нарушениях в системе протеина С (функциональная неполноценность, сниженный синтез протеина С, протеина S) или о наличие мутантного фактора V (Лейден), резистентного к действию протеина С.

 

РеаХром-Протеин С тест
Набор реагентов для определения активности протеина С
фотометрическим методом

Набор РеаХром-Протеин С тест предназначен для определения активности протеина С в плазме крови человека высокочувствительным фотометрическим методом с хромогенным субстратом.

Набор предназначен для проведения 20 определений при расходе 0,05 мл раствора плазмы-калибратора на одно определение.

Принцип метода.

Метод определения активности протеина С в образце плазмы основан на способности активированного протеина С гидролизовать пептидный хромогенный субстрат. Количество высвобождаемого при этом пара-нитроанилина (р NА) прямо пропорционально активности протеина С в образце плазмы. Протеин С плазмы активируется при добавлении к ней очищенного экстракта яда Agkistrodon contortrix contortrix.

Процесс идет по следующей схеме:

Протеин С + активатор (избыток) Þ Активированный протеин С

Активир.Пр.С+ Пептид-рNА Þ Пептид + рNА (желтый)

 

Аналитические характеристики набора

Линейность определяемых значений активности протеина С в плазме крови человека в диапазоне активностей от 30 до 120%.

Коэффициент вариации – 10%.

Чувствительность метода – 10%.

Допустимый разброс результатов при использовании разных наборов одной серии не более 10%.

Активность протеина С в нормальной плазме здоровых лиц составляет 70–140%.

РеаРrC/FV тест
Набор реагентов для определения резистентности активированного фактора V
к протеину C

Выявлена особая наследственная форма тромбофилии, в основе которой лежит наличие у пациентов мутантного ф. V - так называемого ф. V (Leiden). Мутантный ф. V (Leiden) обладает резистентностью к действию активированного протеина С, что приводит к повышению свертывания крови по внутреннему и внешнему механизмам и повышает частоту тромбозов (тромбозы периферических вен, инфаркты миокарда, тромбоэмболии легочной артерии, тромбозы вен

Принцип метода

Инкубация нормальной плазмы с активатором протеина С (очищенным ферментом из яда щитомордника Agkistrodon сontortrix сontortrix) и с фактором контакта вызывает активацию эндогенного протеина С и коагуляционного каскада по внутреннему пути. Процесс свертывания запускается при добавлении ионов кальция. Активированный протеин С совместно с эндогенным протеином S инактивирует прокоагулянтные ф. VIIIa и ф. Va, что удлиняет время свертывания плазмы в тесте АЧТВ.

Время образования сгустка в плазме со сниженной активностью системы протеина С увеличивается в значительно меньшей степени. В плазме больных с дефицитом системы протеина С, а также у носителей мутантного ф. V (Leiden) удлинение АЧТВ при добавлении активатора выражено в меньшей степени, чем в норме.

При проведении исследования определяют 4 показателя:

АЧТВ смешанной контрольной плазмы без активатора;

АЧТВ смешанной контрольной плазмы с активатором;

АЧТВ смешанной плазмы больного без активатора;

АЧТВ смешанной плазмы больного с активатором.

Результаты результаты анализа представляют в виде нормализованного отношения (НО, усл. ед.) по формуле (см с.11)

Интерпретация результатов

У здоровых лиц НО составляет 1,1±0,3 усл. ед. Значение НО ниже 0,7 свидетельствует о возможном наличии мутантного ф. V (Leiden), резистентного к действию активированного протеина С.

 

ГЕПАРИН И ГЕПАРИНОТЕРАПИЯ

Гепарин, кислый мукополисахарид, вырабатываемый тучными клетками, является естественным противосвертывающим фактором. Относится к антикоагулянтам прямого действия, т. е. влияющим непосредственно на факторы свертывания (XII, ХI, Х, IX, VII и II). Гепарин применяют для профилактики и терапии различных тромбоэмболических заболеваний и их осложнений. Действие гепарина контролируют путем определения времени свертывания крови. После его введения наблюдаются значительное замедление рекальцификации плазмы, понижение толерантности к гепарину, удлинение тромбинового времени, резкое увеличение свободного гепарина (за счет введения антикоагулянта).

Несмотря на широкое применение стандартного (нефракционированного) гепарина в клинической практике, у этого препарата имеется ряд существенных недостатков. Во-первых, это высокая степень связывания гепарина с белками плазмы и его быстрая инактивация эндотелиальными клетками и макрофагами. Во-вторых, имеет место относительная кратковременность действия гепарина, вследствие чего требуется постоянная внутривенная инфузия в течение суток (или многократные подкожные инъекции препарата). Кроме того, гепарин не обладает последействием, и после окончания его применения условия для образования тромба восстанавливаются. Возможна активация тромботического процесса, что выражается в увеличении числа эпизодов ишемии миокарда и развитии инфаркта миокарда.

Наличие нежелательных свойств у стандартного (нефракционированного) гепарина потребовало создания антикоагулянтов нового поколения. Таковыми стали синтезированные из нефракционированного гепарина препараты, именуемые низкомолекулярными гепаринами.

Низкомолекулярные гепарины получают путем деполимеризации стандартного гепарина, при этом молекулярная масса фрагментов колеблется от 2 500 до 6 500 дальтон. Низкомолекулярные гепарины тормозят каскад свертывания крови на более высокой ступени - на уровне ф. Ха. Однако они тормозят и образование некоторого количества тромбина, что связывают с наличием в них полисахаридных фрагментов с молекулярной массой выше 5 400 дальтон. Именно в содержании последних лежит основное различие между низкомолекулярными гепаринами разного производства. Уменьшение размеров молекул отразилось на особенностях фармакокинетики и фармакодинамики низкомолекулярных гепаринов. Группу низкомолекулярных гепаринов характеризует большая продолжительность биологической активности, что позволяет назначать препараты 1- 2 раза в сутки. Низкомолекулярные гепарины в значительно меньшей степени, чем обычный гепарин, связываются с белками плазмы и клетками эндотелия. Этим объясняют их высокую биодоступность (после глубокой подкожной инъекции > 90%, у стандартного гепарина - 15-20%). Клиренс препаратов более медленный и более равномерный, чем обычного гепарина. Низкомолекулярные гепарины характеризует более предсказуемая антикоагулирующая реакция на введенную дозу и соответственно при их применении требуется меньший лабораторный контроль. Важным преимуществом низкомолекулярных гепаринов перед стандартным гепарином является значительно меньшее влияние на тромбоциты и низкая частота развития тромбоцитопении.

При проведении гепаринотерапии необходим лабораторный контроль содержания гепарина в плазме крови пациента.

 Компания РЕНАМ производит 2 диагностических набора реагентов для определения активности гепарина в плазме крови пациентов, а также набор плазм-калирбраторов для построения калибровочных графиков и набор контрольных плазм для проверки правильности исследований.

 

Код	Наименование, состав набора, краткое описание	Число анализов
ГП-1	РеаХром Гепарин для определения активности гепарина (анти-Ха активность) фотометрическим методом. Состав: - антитромбин III, лиофильно высушенный (1,0 мл) – 2 фл., - ф. X, лиофильно высушенный (2,0 мл) – 2 фл., - хромогенный субстрат, лиофильно высушенный (2,0 мл) – 2 фл., - концентрат буфера (5,0 мл) – 1 фл.	20
ГП-2	РеаКлот-Гепарин для определения активности гепарина (анти Ха активность) клоттинговым методом. Состав: - смесь ф. Ха с фосфолипидами, лиофильно высушенная (2,0 мл) -2 фл., - субстратная плазма, лиофильно высушенная (1,0 мл) - 2 фл., - раствор СаСl2 (5,0 мл)-1 фл.	80
ГП-3	Набор плазм-калибраторов для исследования гепарина. Состав: 3 уровня активности гепарина (0; 0,3-0,5; 0,7-1,0), лиофильно высушенные (1,0 мл)– 6 фл.	6 х 1 мл
ГП-4	Набор контрольных плазм для исследования гепарина. Состав: 2 уровня активности гепарина (0,3-0,5; 0,5-0,7), лиофильно высушенные (1,0 мл) – 6 фл.	6 х 1 мл

 

 

РеаХром Гепарин
Набор реагентов для определения анти-Xa активности гепарина
фотометрическим методом

Набор РеаХром Гепарин предназначен для определения активности гепарина в плазме крови человека с помощью метода нейтрализации ф. Ха. Активность гепарина в плазме крови исследуют при контроле антикоагулянтной терапии, которую проводят при инфаркте миокарда, легочной эмболии, остром тромбозе глубоких вен, гемодиализе, использовании аппарата сердце-легкие, при дооперационной и послеоперационной профилактике тромбоэмболии. Набор предназначен для проведения 20 макро- и 100 микроопределений при расходе 0,20-0,04 мл раствора хромогенного субстрата на одно определение.

Принцип метода.

Метод основан на способности комплекса антитромбин III-гепарин нейтрализовать активность ф. Ха. Активность гепарина определяют в плазме после добавления избытка антитромбина III (АТ III) и ф. Ха. При этом происходит ингибирование ф. Ха комплексом АТ III-гепарин прямо пропорционально активности гепарина в плазме. Остаточная активность ф. Ха катализирует отщепление пара-нитроанилина (pNa) от синтетического хромогенного субстрата.

Концентрация свободного pNa, определяемая при длине волны 405 нм, обратно пропорциональна активности гепарина в плазме.

Процесс идет по следующей схеме:

Антитромбин III (избыток) + гепарин Þ АТIII-гепарин

АТIII-гепарин + Ха (избыток) Þ АТIII-гепарин-Ха +Ха (остаток)

Пептид–pNa + Ха (остаток) ÞПептид-Ха + pNa (желтое окрашивание).