Микроскопический метод в диагностике вирусных инфекций

Микроскопический метод это самостоятельный метод исследования, позволяющий определить в клиническом материале обследуемого возбудителя инфекционного заболевания на основе обнаружения
вирусного агента (электронная микроскопия) или его структурных компонентов (вирусные включения). Внутриклеточные включения формируются в заражённых вирусом клетках — это места синтеза и сборки вирусных структур. Они являются продуктами взаимодействия вируса и клетки. Внутриклеточные включения могут быть в цитоплазме и в ядрах зараженных вирусом клетках. По форме включения могут быть округлыми, кристаллоподобными, в виде тяжей и т.п. Выбор метода определяется характером заболевания и предполагаемым возбудителем и зависит от периода болезни.

Для обнаружения вирусных включений используют микроскопию с иммерсией. Обычно готовят мазки-отпечатки из пораженной ткани, например при бешенстве, герпетической инфекции или ветряной оспе.

Клинический материал при бешенстве: кусочки мозга, взятые при биопсии или мазки-отпечатки головного мозга или слюнных желез погибших людей. Мазки окрашивают по методу Селлера, где тельца Бабеша-Негри (вирусные включения) окрашиваются в пурпурно-красный цвет, а цитоплазма, ядро и ядрышки – в синий. В одной клетке могут быть обнаружены одно или несколько включений. Они окружены оболочкой и имеют внутреннюю структуру в виде базофильной зернистости. Тельца Бабеша-Негри появляются до 3-4 дней до момента наступления клинических симптомов, их количество и размеры увеличиваются в процессе прогрессирования болезни.

Задание 10.  В инфекционную больницу поступило в течение дня 15 жителей, проживающих в разных районах города. Установлено, что у всех имело место острое начало: высокая температура, общая интоксикация, воспалительные процессы в дыхательной системе. Отмечалась сильная головная боль, боли в глазных яблоках. Поражение эндотелия стенок кровеносных сосудов привело к точечным кровоизлияниям в слизистые верхних дыхательных путей, трахеи, бронхов. На 4 день от начала заболевания у 4 больных отмечена первичная гриппозная пневмония, она имела геморрагический характер, мокрота содержала прожилки крови. Главный врач больницы сообщил в службу санитарно-эпидемиологического контроля о случившемся. Необходимо определить этиологию заболевания для решения вопросов этиотропного лечения и эпидемиологического контроля за состоянием инфекции в городе. Предложите схему, необходимую для подтверждения клинического диагноза «грипп». Определите клинический материал для исследования.

Методические указания для выполнения работы

ЭКСПРЕСС- МЕТОДЫ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Быстрая диагностика позволяет обнаружить вирус в клиническом материале больного на основе его антигенных свойств (сероидентификация).

Разберем использования экспресс-метода на примере вируса гриппа. Возбудитель можно выделить из пораженной ткани и идентифицировать на основе антигенных свойств, используя серологические реакции. Вирусы,обладающие гемагглютинирующими свойствами (к их числу относится вирус гриппа), можно определить с помощью РГА (реакция гемагглютинации). Это основано на том, что эти вирусы хорошо агглютинируют эритроциты крови I(0) группы.

Для выполнения РГА на предметное стекло необходимо нанести каплю исследуемого материала и добавить каплю эритроцитов. Через несколько секунд, в случае наличия в материале гемагглютинирующего вируса, происходит выпадение агглютината в виде мелких зерен.

 

КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ МЕТОД В ДИАГНОСТИКЕ

ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

 

       Культуральный метод основан на выделении вируса из клинического материала и его идентификации. Концентрация вируса в клиническом материале недостаточна для прямого обнаружения вируса или его антигена. В этом случае вирус накапливают путем культивирования на культуре ткани или курином эмбрионе.

    Это очень трудоемкий процесс, требующий продолжительного времени

для его постановки. Поэтому результаты, полученные при культуральном методе исследования, чаще всего носят ретроспективный характер.

 

 

Рисунок 6.- Применение культурального мтода исследования

В вирусологической практике

 

Клиническим материалом для диагностических целей при гриппе является десквамативный эпителий слизистой оболочки носоглотки, кусочки легких или трахеи, полученные при аутопсии. Клинический материал обрабатывается смесью антибиотиков (с целью подавления бактериальной микрофлоры) и центрифугируется. Надосадочной жидкостью заражают куриный эмбрион (аллантоис). После гибели куриного эмбриона отбирается аллантоисная жидкость, содержащая накопленный вирус.

 Идентификация вируса проводится на основе его антигенных свойств, используя РТГА с набором типоспецифических сывороток (А₁- сыворотка, содержащая АТ (антитела) к вирусу А₁, А₂- сыворотка, содержащая АТ к вирусу А₂, А₃- сыворотка, содержащая АТ к вирусу А₃, В- сыворотка, содержащая АТ к вирусу В, С- сыворотка, содержащая АТ к вирусу С).

Для постановки РТГА нанести на поверхность стекла, разделенного на квадраты, типоспецифические сыворотки, в контрольный вариант – нормальная сыворотка крови кролика.

В каждый вариант вносится по 1-2 капли аллантоисной жидкости. Аккуратно перемешать смесь каждого варианта (обезвреженной бактериальной петлей) и добавить по 1-2 капли эритроцитов крови человека. Через несколько секунд результат учитывается:

А1	А2	А 3
В	С	нормальная сыворотка крови кролика