Порядок проведения исследования

1. В промаркированной пробирке приготовить 0,8% взвесь исследуемых эритроцитов для чего надо смешать в пробирке 10 мкл эритроцитов и 1 мл раствора низкой ионной силы соли (название раствора зависит от фирмы изготовителя используемого оборудования). Выдержать при комнатной температуре 10 мин.

2. На пластиковой карте соответствующей специфичности написать Ф.И.О. обследуемого лица или штрих-код.

3. С микропробирок с гелем снять защитную фольгу и внести по 50 мкл 0,8% взвеси исследуемых эритроцитов.

4. Взвесь исследуемых эритроцитов внести также в контрольную пробирку.

5. Центрифугировать карты в специально предназначенной для них центрифуге с фиксированным временем и количеством оборотов в минуту.

6. Оценить результат реакции.

Контроль специфичности

Результат реакции в контрольной пробирке должен быть отрицательным. Если контроль положителен - определение недостоверно, исследование необходимо повторить после однократного отмывания образца эритроцитов изотоническим 0,9% раствором хлорида натрия.

Интерпретация результатов

Положительная реакция свидетельствует о наличии в исследуемых эритроцитах антигена D. Если гелевые карты содержат моноклональные антитела IgM, при отрицательных результатах реакции образцы крови доноров дополнительно исследуют на наличие слабого варианта антигена D с реактивами, содержащими анти-D IgG антитела.

Определение резус-принадлежности крови в непрямом антиглобулиновом тесте методом агглютинации в геле

Порядок проведения исследования

1. В промаркированной пробирке приготовить 0,8% взвесь исследуемых эритроцитов для чего надо смешать в пробирке 10 мкл эритроцитов и 1 мл раствора низкой ионной силы соли (LISS) (название раствора зависит от фирмы изготовителя используемого оборудования). Выдержать при комнатой температуре 10 мин.

2. Промаркировать каргу Coombs Anti-IgG (написать Ф.И.О. реципиента и донора или штрих-код). Снять защитную фольгу с карты.

3. Внести 50 мкл 0,8% взвеси исследуемых эритроцитов, приготовленной в растворе низкой ионной силы.

4. Внести 25 мкл реактива анти-D IgG.

5. Инкубировать карту 15 мин при +37°С.

6. Центрифугировать карты в специально предназначенной для них центрифуге с фиксированным временем и количеством оборотов в минуту.

7. Оценить результат реакции.

Интерпретация результатов

Положительная реакция свидетельствует о наличии в исследуемых эритроцитах антигена D (характер агглютинации в диапазоне 4+ - +.

Отрицательная реакция свидетельствует об отсутствии в исследуемых эритроцитах антигена D - резус принадлежность отрицательная.

Характер агглютинации + и может наблюдаться при наличии у пациента вариантов антигена D, диагностика которых возможна только при использовании специального набора реактивов.антигены А и В - реакция положительная с антителами анти-А+В, анти-А, анти-В. В исследуемой сыворотке отсутствуют анти-А н анти-В антитела, так как с тест-эритроцитами А, В и О - реакция отрицательная.

 

Определение группы крови системы АВО с помощью моноклональных антител на плоскости

Определение группы крови АВО проводится по наличию или отсутствию антигенов А и В на эритроцитах. Исследование выполняется на плоскости (пластине, планшете) при комнатной температуре (18-25°С) в помещении с хорошим освещением.

 

Порядок проведения исследования

1. Промаркировать пластину (написать Ф.И.О. обследуемого лица или штрих-код и специфичность моноклональных антител в порядке их нанесения: анти-А, анти-В).

2. Нанести по одной капле (50 мкл) моноклональных антител соответствующей специфичности.

3. Рядом нанести маленькую каплю (10 мкл) эритроцитов из пробирки с исследуемой кровью.

4. Капли перемешать, покачать пластину.

5. Результат реакции оценить через 5 мин. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов, видимой невооруженным глазом. При отрицательной реакции капля остается окрашенной равномерно в красный цвет.

 

Интерпретация результатов

Реакция гемагглютинации в каждой капле может быть положительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 сек от начала перемешивания в смеси появляются видимые невооруженным глазом мелкие агглютинаты (красные комочки), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие агглютинаты постепенно становятся более крупными или образуют хлопья неправильной формы.

При отрицательной реакции смесь эритроцитов с антителами (5 мин) остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких агглютинатов. Положительная реакция свидетельствует о наличии в исследуемых эритроцитах антигена, к которому направлены моноклональные антитела.

- При отрицательной реакции с обоими типами реактивов исследуемая кровь принадлежит к группе О.

- При положительной реакции только с реактивом анти-А - к группе А.

- При положительной реакции только с реактивом анти-В - к группе В.

- При положительной реакции с реактивами анти-А и анти-В - к группе АВ.

 

Контроль специфичности

При положительном результате реакции с обоими реагентами (анти-А, анти-В) необходимо исключить неспецифическую агглютинацию. Для этого на плоскость наносят одну каплю изотонического 0,9% раствора хлорида натрия и маленькую каплю исследуемых эритроцитов - объемное соотношение 5:1. При отсутствии реакции агглютинации делают заключение о принадлежности исследуемого образца к группе АВ.