Приготовьте посуду к стерилизации: пипетки и чашки Петри. Сделайте ватно-марлевую пробку.

Билет №1

Приготовьте посуду к стерилизации: пипетки и чашки Петри. Сделайте ватно-марлевую пробку.

Приготовление пробок: Для приготовления пробок лучше брать простую, плохо смачивающуюся вату, так как пробки из гигроскопичной ваты легче намокают и таким образом становятся хорошей средой для обитания микробов. Для приготовления пробки берут плоский кусок ваты, загибают края и скатывают ее валиком. Для придания пробке прочности ее прокатывают между ладонями, а лучше между ладонью и чистым стеклом, лежащим на столе. Длина пробки для пробирки должна быть около 4-6 см и входить в нее на 1,5-2,0 см. Для сохранения формы пробки вынимают из горлышка, вращая.

Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-5 штук или в пеналах.

Пастеровские пипетки по 3-5-10-15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

Дайте характеристику различным видам и способам стерилизации.

Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, за­гружают в стерилизатор (или в сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный, надежный прогрев стерилизуемого материала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора, необходимо строго следить за температурой, так как при понижении ее не осуществится стери­лизация, а при нагреве выше 180° бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80°, так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего.выгру­жать посуду только после того, как температура в стерилизаторе сравняется с комнатной.

 

Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилиза­ции в этом случае существенно зависит от объема сосудов и тол­щины стекла. Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. Следует иметь в виду, что в автоклаве посуда увлажняется.

 

Методы стерилизации

· Термическая: паровая и воздушная (сухожаровая)

· Химическая: газовая или химическими растворами (стерилянтами)

· Плазменная (плазмой перекиси водорода)

· Радиационная стерилизация — применяется в промышленном варианте

· Метод мембранных фильтров — применяется для получения небольшого количества стерильных растворов, качество которых может резко ухудшиться при действии других методов стерилизации(бактериофаг, селективные питательные среды, антибиотики)^[1]

Термические методы стерилизации

Преимущества термических методов стерилизации:

· Надёжность

· Отсутствие необходимости удаления стерилянтов с предметов медицинского назначения

· Удобство работы персонала

· Стерилизация проводится в упаковках, что позволяет сохранить стерильность некоторый период времени.

==== Паровая стерилизация

Осуществляется подачей насыщенного водяного пара под давлением в паровых стерилизаторах (автоклавах).

Паровая стерилизация под давлением считается наиболее эффективным методом, так как чем выше давление, тем выше температура пара, стерилизующего материал; бактерицидные свойства пара выше, чем воздуха, поэтому для стерилизации применяют пересыщенный пар.

Паровой стерилизации подвергают изделия из текстиля (бельё, вату, бинты, шовный материал), из резины, стекла, некоторых полимерных материалов, питательные среды, лекарственные препараты.

Тиндализация

Основная статья: Тиндализация

Тиндализацию применяют для стерилизации растворов, неустойчивых к действию высокой температуры. Она состоит в неоднократном нагревании до температуры 70—100°С с промежутками в 24 ч.

Возбудитель коклюша Bordetellapertussis и паракоклюша Bordetellaparapertussis

 

БИЛЕТ 2

1. Произведите посев: «газоном», бактериальной петлей из пробирки в пробирку, с ч.Петри в пробирку.

Расскажите о используемых методах культивирования анаэробов.

Сущность условий, необходимых для культивирования анаэробов, заклю­чается в снижении парциального давления молекулярного кислорода.

В тетради!

2. Оцените реакцию агглютинации на стекле с поливалентными дизентерийными сыворотками.

БИЛЕТ 3

1.Приготовьте среду Гисса с мальтозой 50 мл. Перечислите этапы приготовления, требования и цели использования питательных сред.

1.Этапы приготовления питательных сред. Классификация питательных сред. Приготовить 50 мл МПА.

1.Этапы приготовления сред:

Варка – варят среды на открытом огне, водяной бани, в автоклавах, или в варочных котлах.

Установление pH – ориентировочно производят с помощью индикаторных бумажек, а для точного определения pH пользуются потенциометром.

Осветление – производят с помощью Куринного яйца. Среду подогреть до 50ºС, вливают белок куриного яйца, который предварительно взбит с двойным количеством воды, перемешивают и кипятят. Свертываясь белок увлекает в осадок взвешенные в среде частицы.

Фильтрация – если среда жидкая, то проводят через бумажный фильтр. Если среда агаровая, то её просто отстаивают.

Розлив – разливают среду в пробирки, флаконы, колбы, не более чем на 2/3 объема. Среды которые стерилизуют при температуре выше 100ºС разливают в чистую сухую посуду. Среды, которые стерилизуют при более низкой температуре, разливают в стерильную посуду. Посуду со средой закрывают ватно-марлевыми пробками и обязательно прикрепляют этикетку, где указывают название среды и дату приготовления.

Стерилизация – она зависит от состава среды: прокаливание на огне, кипячение, стерилизация сухим жаром, стерилизация насыщенным паром под давлением, стерилизация текущим паром, тиндализация, пастеризация, стерилизация с помощью ультрофиалета.

Контроль

Контроль стерильности – среды ставят в термостат на 2 суток после чего просматривают, если на них не появилось роста м/о то среду считают стерильной.

Химический контроль – его проводят в лабораториях, при этом проверяют pH и количество основных ингредиентов.

Биологический контроль – среды засевают специально подобранными м/о (музейными) и по их росту судят о питательных свойствах среды.

Классификация питательных сред:

По исходным компонентам:

Натуральные - их готовят из продуктов животного происхождения и растительного происхождения. Например, костная мука, дрожжи, сгустки крови, кусочки мяса.

Синтетические – их готовят из определённых химически чистых органических и не органических соединений взятых в точно указанной концентрации и растворенных в дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в том что их состав постоянный.

По консистенциям:

Жидкие питательные среды

Плотные питательные среды

БИЛЕТ 4

1. Приготовьте препарат из культуры, выращенной на плотной питательной среде, окрасьте по ГР и промикроскопируйте препарат. Сделайте вывод.

Методика окраски по Граму

Цель: позволяет дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки, определить морфологические и тинкториальные свойства.

1.        Приготовить фиксированный мазок

2.        На мазок кладём фильтровальную бумагу

3.        На бумагу капнуть 1-2 капли генцианвиолета и окрасить в течение 1 минуты

4.        Краску вместе с бумагой смыть (промывать водой не надо)

5.        Окрасить препарат раствором Люголя на фильт. бумаге в течение 1 минуты

6.        Краску слить и на мазок с фильтр. Бумагой капнуть на 0,5 минуты этилового спирта

7.        Промыть препарат водой

8.        Окрасить разведённым фуксином Циля в течение 2 минут также на фильтровальной бумаге

9.        Промыть водой, подсушить и промикроскопировать

Грам «+» окрашиваются в синий цвет, грамм «-» в розовый.

Методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

Приготовить рабочий стол → Зажечь спиртовку и прокалить бактериальную петлю → Петлёй нанести на предметное стекло каплю воды → Петлю обжечь → Петлёй взять небольшое количество исследуемого материала, соблюдая правила стерильности → Перенести материал в каплю воды на предметном стекле и тщательно растереть, чтобы получилось мутное пятно → Петлювновь обжечь → Зафиксировать мазок, проведя над пламенем 3-4 раза → Дать мазку подсохнуть → Окрасить.

Дайте характеристику ГР(+) и ГР(-) бактериям.

Отличия ГР(+) и ГР(-) бактерий

Отношение к окраске по Граму – важный для систематики признак бактерий, который зависит от структуры и химического состава клеточной стенки бактерий. Выделяют две большие группы - грамположительные (“грам+”) и грамотрицательные (“грам-“) бактерии. Стенка грамположительных бактерий после окраски по Граму сохраняет комплекс йода с генциановым фиолетовым (окрашены в сине-фиолетовый цвет), грамотрицательные бактерии теряют этот комплекс и соответствующий цвет после обработки и окрашены в розовый цвет за счет докрашивания фуксином.

Особенности клеточной стенки грамположительных бактерий.

Мощная, толстая, несложно организованная клеточная стенка, в составе которой преобладают пептидогликан и тейхоевые кислоты, нет липополисахаридов (ЛПС), часто нет диаминопимелиновой кислоты.

Особенности клеточной стенки грамотрицательных бактерий.

Клеточная стенка значительно тоньше, чем у грамположительных бактерий, содержит ЛПС, липопротеины, фосфолипиды, диаминопимелиновую кислоту. Устроена более сложно - имеется внешняя мембрана, поэтому клеточная стенка трехслойная.

2. Укажите на предложенной чашке с ЖСА один из дифферинциально-диагностических признаков.

Назовите признак, являющиеся дифференциально-диагностическими для стафилококков.

Дифференциально – диагностический признак: при росте стафилококки образуют пигмент: золотистый лимонно-желтый или белый, который не растворяется в воде и растворяется в ацетоне, эфире, спирте.

На МПА колонии стафилококка выпуклые, круглые, непрозрачные, блестящие, размером 2-4 мм с ровными краями. На агаре с кровью вокруг колонии образуется зона гемолиза. На бульоне – равномерное помутнение и осадок на дне.

На ЖСА вокруг колоний выявляется продукция лецитиназы - мутная зона и «радужные» венчики.

 

3. Через 10 лет после перенесенного сыпного тифа у больного без повторного заражения появились симптомы этого заболевания. Назвать это явление и используемые методы диагностики.

Рецидив - повторение болезни после кажущегося полного выздоровления.

Основным методом лабораторной диагностики сыпного тифа являются серологические реакций: агглютинации, связывания комплемента и непрямой гемагглютинации. Реакция агглютинации со специфическим диагностикумом из риккетсий Провачека высокочувствительна и становится положительной на 3—5-й день. Диагностическим титром антител считают разведение сыворотки 1: 100—1: 160. Антитела исчезают в течение года после заболевания. РСК бывает положительной с 7—8-го дня болезни; титр антител максимальный к 12—14-му дню, а затем наблюдается медленное снижение. Небольшое количество комплемент- связывающих антител обнаруживают долгие годы. РНГА становится положительной на 7—8-й день заболевания. Диагностическим считают титр антител 1: 160 — І: 200 при условии его дальнейшего нарастания при повторной постановке РНГА.

БИЛЕТ 5

1. Окрасьте препарат метиленовой синью, промикроскопируйте, сделайте вывод.

 Расскажите методику приготовления мазка из культуры, выращенной на ЖПС.

Окрасить препарат метиленовой синью:

1.        препарат положить на поверхность исследуемым материалом вверх;

2.        пипеткой нанести на препарат р-р красителя на 5-7 мин;

3.        краску слить, промыть водой;

4.        просушить;

5.        м/с с иммерсией.

Для приготовления мазка необходимо иметь:

• Чистое обезжиренное предметное стекло.

• Бактериологическую петлю

• Культуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне.

• Спиртовку.

• Набор красок.

Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры на­носят петлей на предметное стекло.

 

2.Выберите культуры с характерным для сальмонелл ростом на двухсахарной среде.

 Перечислите и охарактерактеризуйте исследования для дифференциации этого возбудителя.

 

3.У больного был взят мазок из зева и посеян на питательную среду. Для фаготипирования был использован стафилококковый бактериофаг, но зоны подавления роста через 24 часа инкубации не появилось.

 Дать заключение по этим данным.

 

БИЛЕТ 6

1.Промикроскопитуйте готовый препарат, сделайте вывод.

 Расскажите устройство и правила работы со световым микроскопом.

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 х в рабочее положение, т. е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение. При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте - точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.

 

 

2. Произведите учет реакции связывания комплемента (Реакция Вассермана). Назовите цель проводимой реакции и перечислите используемые ингредиенты.

Реакция Вассермана (RW), или ЭДС (экспресс-диагностика сифилиса) — метод диагностики сифилиса

Для постановки реакции необходимы следующие ингредиенты: 1) исследуемая сыворотка, 2) антигены, 3) комплемент, 4) гемолитическая сыворотка, 5) эритроциты барана.

Все ингредиенты для реакции Вассермана берут в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл.

Степень положительности реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов + + ++ полная задержка гемолиза, жидкость не окрашена, все эритроциты в осадке; + + + выраженная задержка гемолиза, жидкость розовая, эритроциты в осадке; + + частичная задержка гемолиза, жидкость окрашена интенсивно, осадок эритроцитов ясно виден; + слабая задержка гемолиза, жидкость интенсивно окрашена, осадок незначительный, слабо заметен; — полный гемолиз, жидкость окрашена интенсивно, осадка нет

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: язвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI.Методы микробиологического исследования используемые для анализа данной пробы.Методика взятия биоптата со слизистой желудка и 12 – перстной кишки.

ПЦР обычно дает положительный (возбудитель есть) или отрицательный результат (возбудителя нет). Метод ПЦР позволяет выявить даже ничтожно малое количество хеликобактерпилори с целью прогнозирования заболевания, выявления возможной склонности к язвенной болезни, гастриту или раку желудка.

БИЛЕТ 7

1. Промикроскопируйте и опишите морфологические признаки бактерий, из предложенных препаратов (№ 1,2). Дайте характеристику различным морфологическим группам.

По внешнему виду бактерии делятся на три формы: палочковидные, шаровидные (кокки) и извитые (вибрионы и спириллы). 

Кокковые формы различаются по форме деления и расположению в мазках. Они делятся в одной, двух, трех и более взаимно перпендикулярных плоскостях. При делении в одной плоскости они располагаются парами (диплококки) или цепочками (стрептококки); в двух плоскостях — по четыре (тетракокки), в трех плоскостях образуют пакеты (сарцины); при беспорядочном делении располагаются одиночно (микрококки) или в виде гроздьев винограда (стафилококки). Извитые формы имеют вид спирали. Микроорганизмы палочковидной формы подразделяются на бактерии, бациллы и клостридии.

К бактериям относятся палочковидные микроорганизмы, не образующие спор (кишечная палочка, сальмонеллы, возбудители туберкулеза и т.д.).

К бациллам и клостридиям (лат. closter — веретено) принадлежат микробы, образующие споры (сибиреязвенная, столбнячная палочки, возбудители анаэробной инфекции).

По форме палочковидные бактерии бывают короткими, длинными или средних размеров: с закругленными (большинство палочек), заостренными (фузобактерии), обрубленными (сибиреязвенная палочка) и булавовидными (коринебактерии) концами. Некоторые бактерии могут образовывать ветвления в виде боковых выростов (микобактерии туберкулеза).

По взаимному расположению палочковидные формы распределяются на три подгруппы:

диплобациллы и диплобактерии располагаются попарно; стрептобактерии и стрептобациллы — цепочками; беспорядочно расположенные бактерии и бациллы — в виде римских цифр II, V и т.д.

Извитые формы бактерий. К этой группе относятся вибрионы, спириллы и спирохеты.

Вибрионы — изгиб клетки равен 1/3—1/4 завитка спирали, имеющие вид запятой (холерный вибрион).

Спириллы имеют изгибы с одним или несколькими оборотами спирали.

Спирохеты имеют штопороподобную форму, размеры колеблются в больших пределах (ширина 0,3— 1,5 мкм и длина 7 — 500 мкм).

Палочковидные формы бактерий, подобно коккам, располагаются по длине парами — диплобактерии или цепочками — стрептобактерии. Палочковидные формы могут быть прямые и искривленные, строго цилиндрические и неравномерно утолщенные, с концами закругленными, заостренными или обрубленными.

 

БИЛЕТ 8

1. Приготовьте мазок из кислотоустойчивых бактерий и окрасьте.

Назовите цель, используемые красители, этапы окраски. Расскажите методику приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

БИЛЕТ 9

1. Приготовьте среду Гисса с сахарозой 50 мл.

Расскажите классификацию и требования, предъявляемые к питательным средам.

Требования, предъявляемые к питательным средам.

Любая питательная среда должна отвечать следующим тре­бованиям: содержать все необходимые для размножения микроорганизмов вещества в легкоусвояемой форме; иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по воз­можности прозрачной. Каждую питательную среду стерилизуют определенным способом в зависимости от ее состава.

 

2. Укажите колонии с ростом микроорганизмов, характерным для сальмонелл на ВСА.

Назовите исследования используемые для идентификации этого возбудителя.

На ВСА они образуют колонии черного цвета, оставляющие цвет после того, как их снимают петлей (кроме сальмонелл паратифа А).

 Бактериологический и серологический метод(реакция Видаля – серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов).

3. У ребенка 6 лет отмечалась высокая температура, незначительные боли в горле, при осмотре обнаружена гиперемия зева, отек гортани, а так же налет на миндалинах в виде фибринозной пленки, предположительный диагноз дифтерия.

Перечислите материалы и методы исследования используемые для дифференциации этого возбудителя.

Метод исследования

Микробиологический метод.

Материалом для исследования служат дифтеритическая пленка или отделяемое из мест поражения, а также слизь из носа и глотки. Материал берут стерильным ватным тампоном и немедленно отправляют в лабораторию. Если материал не может быть засеян в течение ближайших 3—4 ч, то во избежание снижения высеваемости его берут тампоном, смоченным 5% раствором глицерина в изотоническом растворе хлорида натрия. С этой же целью материал забирают тампоном, смоченным 2% раствором теллурита калия.

 

БИЛЕТ 10

1. Опишите морфологические признаки бактерий, предложенных препаратов (№ 1,2). Сделайте вывод. Дайте характеристику различным морфологическим группам.

 

2. Определите по предложенному биохимическому тесту семейство, род и вид возбудителя:

Сероводород – (-);

Мочевина – (-);

Лактоза – (-);

Индол – (+);

АгарСиммонса – (-);

Подвижность – (-);

Ацетатеыйагар – (-)

Семейство: Enterobactertaceace, род - Еscherichia, вид - coli

 

3. Из материала слизи, взятого у больного из зева, выросли колонии микробов, расщепляющих тирозин.

 Назвать семейство род, вид.

БИЛЕТ № 11

1. Определите тинкториальные свойства предложенной культуры микроорганизмов (ч. Петри № 4).

Сделайте вывод.

2. Произведите отбор проб методом смыва, посейте на МПА.

Дайте характеристику санитарно-показательным микроорганизмам. Расскажите методику смыва с рабочего места – стола, халата.

 

В зависимости от целей исследования в смывах определяют:

1) наличие БГКП;

2) ОМЧ;

3) наличие S. Aureus.

 Для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общественного питания, детских, лечебно-профилактических учреждений, предприятий пищевой торговой сети определяют бактериологическую загрязненность рук работающего персонала и предметов окружающей обстановки. Эти исследования необходимы также при выявлении путей распространения инфекционных заболеваний. Метод смывов позволяет определить как присутствие жизнеспособных микроорганизмов на поверхности объекта, так и их количество на 1 см2.

Отбор проб: используют ватный тампон или салфетку 5х5см. кторую захватывают стерильным пинцетом

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: яэвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI. Перечислите факторы способствующие сохранению и колонизации H. Pylori на слизистой желудка.

БИЛЕТ 11

1. Определите тинкториальные свойства предложенной культуры микроорганизмов (ч. Петри № 4).

Сделайте вывод.

 

Тинкториальные свойства - свойства бактерий, грибов и простейших, характеризующие их способность вступать в реакцию с красителями и окрашиваться определенным образом.

Грамположительные бактерии хорошо удерживают комплекс генцианового фиолетового с йодом и устойчивы к обесцвечиванию спиртом. После обработки фуксином они окрашиваются в фиолетово-пурпурный цвет.

Грамотрицательные бактерии обесцвечиваются спиртом, то есть теряют комплекс генциа-нового фиолетового с йодом, и хорошо поглощают фуксин. В мазках они окрашиваются в малиново-красный цвет.

 Кислотоустойчивые бактерии. Клеточная стенка некоторых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Подобные бактерии называют кислотоустойчивыми, их трудно окрашивать по Граму (хотя кислотоустойчивые бактерии рассматривают как грамположительные). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена.

 

2. Произведите отбор проб методом смыва, посейте на МПА.

Дайте характеристику санитарно-показательным микроорганизмам. Расскажите методику смыва с рабочего места – стола, халата.

Санитарно- показательные микроорганизмами – являются постоянными обитателями поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющихся из организма теми же путями что и патогенные микробы. Поэтому чем больше выделено СПМ, тем большая вероятность попадания патогенных микробов в окружающую среду.

 

Методика смыва с рабочего места – стола.

Цель: Исследование смывов с предметов проводится для оценки санитарно-гигиенического состояния предметов.

Смывы со стола: Делают из нескольких мест. Исследованные участки ограничивают рамкой трафарета с площадью 50 на 50 или 100 на 100 см². Трафарет изготавливают из проволки и перед употреблением прижигают под пламенем горелки.

Исследование на БГКП. 1 день: Смывы засевают на среду Кода. При росте кишечной палочки среда меняет цвет. При изменении среды материал пересевают на среду Эндо. 2 день: Изучают колонии на среде Эндо. Из подозрительных колоний делают мазки и м/с. Выявление S. aureus. Получение смывы засевают на ЖСА в ч Петри и параллельно на 6,5% солевого бульона (среда накопления). На ЖСА можно сделать посев тампоном. Бульон предварительно разливают в пробирки по 5 мл и в каждую засевают 0,2-0,3 мл смыва. Посевы инкубируют при 37ºС в течение 24 ч.  

Определение ОМЧ: 1 день: К 2 мл взятых смывов прибавляют 8 мл NaCl. Получить разведение 1:5. Тампоны тщательно отмывают встряхиванием. 1 мл засевают в ч Петри и заливают 12 мл расплавленного и остуженного до 45ºС агара. Чашки инкубируют в термостате при температуре 37ºС в течение 24 ч. 2 день: посевы вынимают, подсчитывают количество выросших колоний и делают пересчет на 1 см² исследуемой поверхности.

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: яэвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI. Перечислите факторы способствующие сохранению и колонизации H. Pylori на слизистой желудка.

Важным фактором колонизации H. pylori является подвижность, связанная с наличием мощных жгутиков, которые обеспечивают быстрое движение микроорганизма в слое густой слизи вдоль градиента рН и служат одним из факторов его вирулентности, а также способствуют агрегации H. pylori на поверхности эпителия.

Колонизация желудка H. Pylori- он наделен достаточно плотной гладкой клеточной стенкой, кнаружи от которой определяется капсулоподобная оболочка — гликокаликс и способностью к образованию уреазы. Гликокаликс способствует невосприимчивости бактерии к антибиотикотерапии и защищает микроорганизм от иммунного ответа хозяина. В его состав входят углеводсодержащие полимеры (липополисахариды) и белки, необходимые для адгезии H. pylori на поверхности эпителиоцитов, вызывающие развитие воспаления слизистой желудка.

Продукция большого количества фермента уреазы способствует расщеплению мочевины с образованием углекислого газа и аммиака, который нейтрализует соляную кислоту желудочного сока, создавая вокруг бактерии локальную среду с рН 7, наиболее благоприятную для его существования.

Уреаза, вырабатываемая H. pylori, представляет собой никель-содержащий гексадимер и является собственно маркером инфекции. Наличие уреазы представляет собой основу для проведения различных диагностических тестов с целью обнаружения H. Pylori

БИЛЕТ 12

1. Приготовьте 50 мл МПА.

МПА. В готовый МПБ добавляют 3% нарезанного агара, агар расплавляют в текучем паре в аппарате Коха, устанавливают рН 7,6, осветляют яичным белком, фильтруют через бумажный фильтр, стерилизуют 30 мин при 120.

Расскажите этапы приготовления питательных сред и классификацию.

Классификация:

I. По исходным компонентам:

· Натуральные- их готовят из продуктов животного и растительного происхождения (рыбная мука, костная мука, дрожжи, сгустки крови, кусочки мяса, печени).

· Синтетические- их готовят из определенных химических соединений, взятых в точно указанной концентрации и растворяют в 10 л воды. Приемущество: их состав постоянен.

 

II. По консистенции:

· Жидкие бульоны

· Плотные

· Полужидкие

Плотные и полужидкие питательные среды готовят из жидких к которым добавляют агар- агар (полисахарид, получаем из определенных сортов морских водорослей, служит для уплотнения среды, плавится при 80- 100 градусах, застывает при 45), желатин (белок животного происхождения, плавится при 30 градусах, является питательным веществом).

III. По составу:

· Простые (МПБ, МПА, питат желатин, пептонная вода)

· Сложные (готовят путем прибавления к простым средам кровь, сыворотку, углеводы).

IV. По назначению:

· Основные- служат для выращивания большинства микроорганизмов- мпа, мпб.

· Специальные- для выявления микроорганизмов, не растущих на простых средах- сахарный бульон, среды с кровью.

· Элективные- избирательные, для выделения определенного вида микроорганизмов, задерживая или подавляя рост других микроорганизмов. В среды добавляют аб, соли или изменяют ph.

· Дифференциально- диагностические: позволяют отличить один вид микроорганизмов от др по ферментат активности (среды Гисса).

· Консервирующие- для первичного посева и транспортировки иссл матер (глицериновая смесь).

Этапы приготовления.

1) варка. На открытом огне, на водяной бане, в автоклавах или варочных котлах.

2) Установление ph. С помощью индикаторной бумаги.

3) Осветление. С помощью куриного яйца, среду подогревают до 50 град, вливают белок яйца, который предварительно взбит с двойным количеством воды. Перемешивают и кипятят. Свертываясь белок увлекает за собой взвешенные частицы.

4) Фильтрация. Если среда жидкая то через бумажный фильтр, если агаровая- отстаиванием.

5) Разлив. В пробирки, колбы, не более чем на 2/3 объема. Закрывают ватно- марлиевыми пробками и прикрепляют этикетки с датой приготовления и названием.

6) Стерилизация.

7) Контроль. Контроль стерильности: среды ставят в термостат на 2 суток после чего просматривают не появилось ли роста. Хим контроль: проверяют ph и количество основных ингридиентов. Биологический контроль: среды засевают спец подобранными микроорг и по их росту судят о питат свойствах среды.  

Приготовление обычных питательных сред. МПБ. К мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% химическо чистого NaCl, кипятят на слабом огне 10-15 мин, для растворения веществ. Устанавливают рН среды 7,6—7,8, и снова кипятят 30-40 мин до выпадения осадка. Фильтруют через бумажный фильтр, доливают до первоначального объема водой и стерилизуют при 120 С в течение 20 мин.

2. Произведите посев бактериальной петлей с плотной питательной среды на сектор и с плотной питательной среды в пробирку с жидкой питательной средой. Покажите способ приготовления микробной взвеси.

 

Произвести посев бактериальной петлей с плотной питательной среды на сектора.

Чашку со стороны дна расчерчивают на секторы, посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру. Необходимо следить, чтобы штрихи не заходили на соседние сектора.

Посев плотной питательной среды в пробирку с жидкой питательной средой.

Чашку с посевным материалом ставят перед собой крышкой вверх, левой рукой приоткрывают крышку и вводят под неё обожженную петлю. Остудив петлю, набирают посевной материал с отмеченного участка. Вынимают петлю, закрывают крышку и в левую руку берут пробирку со средой, снимают крышку, обжигают кроя пробирки над спиртовкой, погружают петлю с материалом в среду, и 3-5 сек ополаскивают в ней. Методика приготовления микробной взвеси.

Микробную взвесь готовят путем суспендирования в физиологическом растворе изолированных колоний из 24-часовой культуры, выращенной на неселективных средах до определённой концентрации по Мак-Фарланду.

 

3. При заборе материала у ребенка 6 лет, медсестра, вынимая ватный тампон из зева, задела небные миндалины и корень языка.

 Расскажите правила забора материала при коклюше ватным тампоном и перечислить методы диагностики.

Для взятия материала пользуются двумя тампонами. Один сухой, второй смоченный питательной средой КУА. Перед взятием материала томпон вынимают из пробирки, сгибают его под углом 120º. Ребёнку предлагают открыть рот, стерильным шпателем надавливают на корень языка и вводят тампоном в полость рта до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки. При этом у ребёнка появляется кашлевой рефлекс, который сопровождается выделением слизи. Затем помпон осторожно вынимают и делают посев на поверхность среды КУА в чашки Петри: сначала несколько штрихов на одном месте, а затем растирают по всей поверхности среды. Засеянные чашки ставят в термостат. Второй тампон дважды смачивают средой КУА (KH2PO4 и Na2NPO4, агар и активированный уголь). Эту смесь разливают во флаконы, перед смачиванием её растапливают на водяной бане. Материал собирают так же, как и сухим тампоном, но после взятия материала тампон помещают обратно в пробирку и доставляют в лабораторию, где производят посев.

 

БИЛЕТ 13

1. Приготовьте, окрасьте и промикроскопируйте препарат (ч. Петри № 2), сделайте вывод.

Расскажите методику окраски по Граму. Назовите цель и используемые красители, этапы окраски. 

 

1. приготовить фиксированный мазок;

2. на мазок налить Генциан-Виолет на 1-2 мин;

3. слить окраску, препарат не промывать водой;

4. налить р-р Люголя на 1 мин;

5. слить окраску, препарат не промывать водой;

6. нанести на препарат спирт на 0,5-1 мин;

7. препарат промыть водой;

8. окрасить препарат разведенным фуксином на 1-2 мин;

9. промыть водой, просушить, м/с с иммерсией;

Результат: Гр(-) красные бактерии, Гр(+) синие бактерии.

Цель: структура бактериальной клетки.

 

2. Выберите из выросших на трехсахарном агаре культуры, характерные для ЭПКП. Назовите признаки являющиеся дифференциально-диагностическими. Ответ поясните.

 

Материал из изолированных колоний засевают по поверхности скошенной части и путем прокалывания столбика среды. Посевы инкубируют при температуре 37 С в пробирках с неплотно закрытыми пробками 24 часа.

ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ В случае ферментации только глюкозы скошенная часть среды становится красной (щелочной), среда в столбике – желтой (кислой).

Желтый цвет скошенного агара и столбика означает, что тестируемый организм ферментирует все три сахара.

Красный цвет скоса и столбика указывает на то, что микроорганизм не является ферментером.

В случае образования сероводорода: наблюдается почернение в столбике среды.

На образование газа указывает появление пузыр