Определение протеолитических свойств бактерий.

Протеолитическая активность бактерии определяется их способностью разжижать желатину, свернутую сыворотку крови, образовывать при расщеплении белков индол, сероводород, аммиак.

газ      индикатор.Признаки положительного роста

аммиак лакмус синеет

сероводород     Индикатор пропитанный уксусно-кислым растворои свинца       чернеет

индол Щавелевая кислота           розовеет

 

Определение сахаролитических свойств бактерий.

Сахоролитические свойства бактерий выявляются в способности ферментировать углеводы с образованием различных кислых продуктов с образованием газообразных веществ. Для этого использу.ют короткий и длинный «пестрый» ряд. Первый включает в себя среды Гисса с моно-дисахаридами (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза) и с шестиатомным спиртом – маннитом.

В длинный пестрый ряд вводят дополнительно среды с моносахаридами, полисахаридами и спиртами. В качестве индикатора во все среды добавляют реактив Андрале (щелочной раствор кислого фуксина).

Чистую культуру исследуемых бактерий засевают на среды пестрого ряда. Если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды; при разложении углевода до кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляются пузырьки газа. При отсутствии ферментации цвет среды не меняется.

 

Определение каталазной активности заключается в способности разлагать активные формы кислорода.

Методика. На середину предметного стекла наносят 2-3 капли Н2О2 с помощью петли исследуемая культура вносится в перекись водорода и перемешивается. Если появляются пузырьки, то каталазная активность положительна.

 

Определение чувствительности микробов к антибиотикам.

Метод дисков.

На поверхность агара в чашке Петри вылить 1 мл взвеси бактерий и распределить ее по поверхности, остаток культуры убрать пипеткой. После высыхания поверхности чашки на ее сектора нанести пинцетом диски с антибиотиками. Выдержать чашки в течение 30 мин, после чего поместить в термостат.

Метод разведений.

Взять два ряда пробирок: 1-7 физраствора, 2-8 пробирок по 1 мл бульона. В первую пробирку первого ряда внести 1 мл пенициллина, содержащий 160 единиц. Содержимое пробирки перемешать и 1 мл перенести во вторую пробирку, из второй пробирки 1 мл перенести в третью и т.д. таким образом, в пробирках будет 80, 40, 20, 10, 5 единиц и т.д пенициллина в 1 мл.

В каждую пробирку второго ряда (кроме восьмой) внести по 0,2мл разведения пенициллина из соответствующей пробирки первого ряда. Получаем разведения пенициллина 8, 4, 2, 1 и т.д в 1 мл бульона. В каждую пробирку засеять одну петлю суточной бульонной культуры испытуемого микроба.

Результат учитывается через сутки пребывания пробирок в термостате. Отметить наименьшую концентрацию антибиотика (наибольшее его разведение), при которой отсутсвует рост микроба (бактерицидная концентрация), а также ту концентрацию, при которой лишь наблюдается задержка рост культуры (бактериологическая концентрация) по сравнению с контрольной восьмой пробиркой. 

Постановка опыта Бухнера.

На поверхность агара в чашке Петри налить по 1 мл будьнной культуры, равномерно распределить по поверхности, остаток удалить пипеткой. кружочки стерильной бумаги поместить на поверхность агара и осветить открытую чашку прямыми солнечными лучами в течение 1-2 часов, после чего чашку закрыть крышкой и поставить в термостат

Микробиологические исследования чистоты воздуха.

Методом Коха., для чего чашку с питательным агаром поставить на горизонтальную поверхность, открыть ее на 5 минут, после чего поместить в термостат. При учете результатов подсчитать число выросших колоний на чашке Петри и рассчитать микробной число воздуха, для чего используется таблица Омелянского.

Типирование бактерий с помощью бактериофагов.

Методика:

1)       На чашку петри с питательной средой наносят 1-2мл исследуемой жидкой бактериальной культуры и равномерно распределяют ее.

2)       Чашку расчерчивают на сектора

3)       С помощью бактериальной петли на дистальный конец каждого сектора наносят соответствующий бактериофаг

4)       После подсыхания чашки ставят в термостаи на сутки

5)       Далее выявлябт зону лизиса

S-, R- формы колоний.

Признак S тип R тип

 морфологя                           

1)       подвижность     Изначальная форма          После действия фактора полиморфизм

2)       подвижность     изначальная       Временная потеря подвижности

3)       капсулообразование                         Временная потеря капсулы

колониеобразование         Колонии овальной формы или округлой, с ровными краями с гладкой или блестящей поверхностью    Колонии неправильной формы с неровными краем, шероховатой поверхностью средней или больщой величины

Аг состав           изначальный      Потеря части аг

верулентность   изначальная       Теряет активность

 

Опыт трансформации.

Поместить в пробирку 1 мл раствора ДНК – культуры донора, смесь инкубировать в течение 20 мин при температуре 37 градусов, после чего произвести высев петлей на селективную питательную среду, содержащую 100 ед/мл стрептомицина. Одновременно произвести контрольные высевы культуры- реципиента и раствора ДНК. При учете результатов обратить внимание на наличие роста в вывесе из трансфорамационной смеси при отсутствии роста в контрольных вывесах.

Опыт трансдукции.

В пробирку поместить 1 мл 4-часовой культуры-реципиента, добавить 1 мд суспензии трансдуцирующего фага, содержащего в 1 мл 10 в шестой степени, смесь инкубировать в течение 60 мин при температуре 37 градусов, после чего 0,1 мл смеси нанести на среду Эндо и распределить стеклянным шпателем по поверхности чашки. Контролем служит посев 0,1 мл культуры-реципиента на ту же среду. Чашки инкубировать в термостате. При учете результатов следует определить число выросших колоний, способных расщеплять лактозу (окрашенных в красный цвет).

Простериализаванной бактериологической петлей отбирают материал и наносят его на стенку пробирки у верхнего уровня среды и слегка встряхивав пробирку смывают его средой. Край пробирки и пробку обжигают и быстро закрывают.