Работа с иммерсионной системой.

Работа с иммерсионной системой.

При работе с иммерсионной системой необходимо соблюдать следующие правила: после нанесения на поверхность препарата небольшой капли иммерсионного под контролем глаза сбоку погрозить в нее фронтальную линзу иммерсионного объектива,затем глядя в окуляр,при помощи макроскопического,а затем микроскопического винта установить препарат в фокусе микроскопа. После работы иммерсионная система и столик должны быть очищены от масла.

 

1.3.Приготовление  нативного препарата"раздавленная капля".

На середину предметного стола нанести каплю жидкой бактериальной культуры. Осторожно покрыть ее покровным стеклом,чтобы не было пузырьков воздуха, после чего микроскопировать с малым с малым сухим, а затем с большим сухим и иммерсионным объективами. 1.3.1.берется из колбы бактериальная культура. 1.3.2.береться из чашки Петри и смешивается с физ.раствором.

 

1.4. Приготовление нативного препарата "висячая капля".

На середину поурочного стекла нанести каплю исследуемой жидкой культуры. Каплей вниз опустить покровное стекло на предметное стекло с углублением(лункой), края которого смазаны вазелином. Капля должна свободно свисать и не касаться дна углубления. Создается такая закрытая камера,в которой бактерии могут наблюдаться 4-6 часов. Микроскопировать с малым сухим,затем с большим сухим и иммерсионным объективами. 1.4.1. Смотри выше. 1.4.2.⬆️

Прижизненная окраска бактерии.

Для такой окраски применяются сильно разбавленные растворы красителей, которые не оказывают токсического действия на бактерии. На предметное стекло нанести каплю 0,001% раствора метиленового синего,в которую внести взвесь бактерий,после чего приготовить препарат "раздавленная капля" и микроскопировать его.

 

Приготовление фиксированных препаратов.

Для фиксации мазков высушенный препарат проводят через пламя горелки 3-4 раза,при чем в пламени нельзя выдерживают препарат больше 2 с. Если фиксация произошла правильно,то стекло при прикосновении с тыльной поверхностью руки тотчас после окончания процесса слегка обжигает кожу.

 

Простой метод окраски препаратов.

Простой метод окрашивании мазков заключается в окрашивании мазков одним красителем и ознакомлением с общей морфологией микробов. Доя окраски используют: метиленовый синий,кристаллический фиолетовый,фуксин,гематоксилин и тд.

 

Окраска по методу Грамма.

1)на фиксированный препарат поместить полоску фильтровальной бумаги и на нее нанести раствор карболового генцианвиолета на 1-2 мин.

2)краситель слить,снять фильтровальную бумагу и обработать препарат в течение 1-2 мин. раствором Люголя до почернения препарата.

3) слить раствор Люголя и на препарат нанести несколько капель этилового спирта на 30-60 с.

4)помыть водой и докрасить препарат водным фуксином в течение 1-3 мин.

5)слить окраску,промыть водой,высушить и микроскопировать препарат с иммерсионной системой.

Граммположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет,а граммотрицательные- в красный или розовый.Сушность метода заключается в том что клеточная стенка грамм+ бактерий прочно фиксирует комплекс генцианвиолет-раствор Люголя,не обесцвечиваются этанолом и поэтому не воспринимает дополнительный краситель,а грамм- наоборот обесцвечиваются этанолом и поэтому имеют дополнительную окраску.

 

Выявление капсулы по методу Бури-Гинса.

1) на край предметного стекла нанести каплю туши,а рядом каплю исследуемой культуры. Капли быстро перемешать и с помощью шлифованного стекла приготовить тонкий мазок.

2)после высушивания мазок фиксировать над пламенем и окрасить фуксином в течении 1-2 мин.

3)осторожно помыть водой и высушить. Бактерии окрашиваются в красный цвет,капсула не окрашивается и имеет вид светлой зоны вокруг бактерии Га темном фоне. 

Бактериологический метод: посев исследуемого материала на чашки Петри с плотной питательной средой - шпателем(метод Дригальского).

Берут три чашки Петри с плотной питательной средой. На середину первой петлей вносят каплю исследуемого материала и круговыми движениями шпателя производят сплошной посев. Этим же шпателем не стерилизуя его, распределяют материал по второй третьей чашкам.

 

Петлей (по Гольду)

Посев производится следующим способом: делается 4-5 параллельных штрихов в направлении А, затем петля прожигается в пламени горелки и ею проводятся штрихи в направлении Б поперек первоначально нанесенных полос. Петля снова прожигается и делаются штрихи в направлении В а затем Г.

 

Отсев культур в пробирку с плотной питательной средой методом " укола "

Используют высокий столбик плотной или полужидкой питательной среды, полускошанные питательные среды. Во всех случаях бактериальной петлей с посевным материалом делают прокол среды с поверхности до дна. Пробирку держать верх дном чтобы не наступила контаминация среды воздушной микрофлорой.

 

Метод дисков.

На поверхность агара в чашке Петри вылить 1 мл взвеси бактерий и распределить ее по поверхности, остаток культуры убрать пипеткой. После высыхания поверхности чашки на ее сектора нанести пинцетом диски с антибиотиками. Выдержать чашки в течение 30 мин, после чего поместить в термостат.

Метод разведений.

Взять два ряда пробирок: 1-7 физраствора, 2-8 пробирок по 1 мл бульона. В первую пробирку первого ряда внести 1 мл пенициллина, содержащий 160 единиц. Содержимое пробирки перемешать и 1 мл перенести во вторую пробирку, из второй пробирки 1 мл перенести в третью и т.д. таким образом, в пробирках будет 80, 40, 20, 10, 5 единиц и т.д пенициллина в 1 мл.

В каждую пробирку второго ряда (кроме восьмой) внести по 0,2мл разведения пенициллина из соответствующей пробирки первого ряда. Получаем разведения пенициллина 8, 4, 2, 1 и т.д в 1 мл бульона. В каждую пробирку засеять одну петлю суточной бульонной культуры испытуемого микроба.

Результат учитывается через сутки пребывания пробирок в термостате. Отметить наименьшую концентрацию антибиотика (наибольшее его разведение), при которой отсутсвует рост микроба (бактерицидная концентрация), а также ту концентрацию, при которой лишь наблюдается задержка рост культуры (бактериологическая концентрация) по сравнению с контрольной восьмой пробиркой. 

Постановка опыта Бухнера.

На поверхность агара в чашке Петри налить по 1 мл будьнной культуры, равномерно распределить по поверхности, остаток удалить пипеткой. кружочки стерильной бумаги поместить на поверхность агара и осветить открытую чашку прямыми солнечными лучами в течение 1-2 часов, после чего чашку закрыть крышкой и поставить в термостат

S-, R- формы колоний.

Признак S тип R тип

 морфологя                           

1)       подвижность     Изначальная форма          После действия фактора полиморфизм

2)       подвижность     изначальная       Временная потеря подвижности

3)       капсулообразование                         Временная потеря капсулы

колониеобразование         Колонии овальной формы или округлой, с ровными краями с гладкой или блестящей поверхностью    Колонии неправильной формы с неровными краем, шероховатой поверхностью средней или больщой величины

Аг состав           изначальный      Потеря части аг

верулентность   изначальная       Теряет активность

 

Опыт трансформации.

Поместить в пробирку 1 мл раствора ДНК – культуры донора, смесь инкубировать в течение 20 мин при температуре 37 градусов, после чего произвести высев петлей на селективную питательную среду, содержащую 100 ед/мл стрептомицина. Одновременно произвести контрольные высевы культуры- реципиента и раствора ДНК. При учете результатов обратить внимание на наличие роста в вывесе из трансфорамационной смеси при отсутствии роста в контрольных вывесах.

Опыт трансдукции.

В пробирку поместить 1 мл 4-часовой культуры-реципиента, добавить 1 мд суспензии трансдуцирующего фага, содержащего в 1 мл 10 в шестой степени, смесь инкубировать в течение 60 мин при температуре 37 градусов, после чего 0,1 мл смеси нанести на среду Эндо и распределить стеклянным шпателем по поверхности чашки. Контролем служит посев 0,1 мл культуры-реципиента на ту же среду. Чашки инкубировать в термостате. При учете результатов следует определить число выросших колоний, способных расщеплять лактозу (окрашенных в красный цвет).

Простериализаванной бактериологической петлей отбирают материал и наносят его на стенку пробирки у верхнего уровня среды и слегка встряхивав пробирку смывают его средой. Край пробирки и пробку обжигают и быстро закрывают.

Работа с иммерсионной системой.

При работе с иммерсионной системой необходимо соблюдать следующие правила: после нанесения на поверхность препарата небольшой капли иммерсионного под контролем глаза сбоку погрозить в нее фронтальную линзу иммерсионного объектива,затем глядя в окуляр,при помощи макроскопического,а затем микроскопического винта установить препарат в фокусе микроскопа. После работы иммерсионная система и столик должны быть очищены от масла.

 

1.3.Приготовление  нативного препарата"раздавленная капля".

На середину предметного стола нанести каплю жидкой бактериальной культуры. Осторожно покрыть ее покровным стеклом,чтобы не было пузырьков воздуха, после чего микроскопировать с малым с малым сухим, а затем с большим сухим и иммерсионным объективами. 1.3.1.берется из колбы бактериальная культура. 1.3.2.береться из чашки Петри и смешивается с физ.раствором.

 

1.4. Приготовление нативного препарата "висячая капля".

На середину поурочного стекла нанести каплю исследуемой жидкой культуры. Каплей вниз опустить покровное стекло на предметное стекло с углублением(лункой), края которого смазаны вазелином. Капля должна свободно свисать и не касаться дна углубления. Создается такая закрытая камера,в которой бактерии могут наблюдаться 4-6 часов. Микроскопировать с малым сухим,затем с большим сухим и иммерсионным объективами. 1.4.1. Смотри выше. 1.4.2.⬆️