Проливание бактериальных суспензий

При проливании бактериальной суспензии внутри биологически безопасного бокса опасность для персонала, находящегося в помещении, невелика. Тем не менее, чтобы избежать распространения инфекции, рекомендуется сразу же провести химическую дезинфекцию, причем это делают при включенной вентиляционной системе бокса. Стены, рабочие поверхности и оборудование опрыскивают или протирают дезинфицирующим составом. Смесь дезинфектанта с детергентом очищает поверхности, как от грязи, так и от бактерий. Подходящим в данном случае является 3%-ный раствор какого-либо иодофора (например, вескодин) или разведенный в соотношении 1:100 отбеливатель, используемый в домашнем хозяйстве (например, хлорокс), с добавлением 0,7% неионного детергента. Все процедуры выполняют в перчатках. Для обработки используют достаточное количество дезинфицирующего раствора так, чтобы он попал в сточные лотки и емкости под рабочей поверхностью. Поднимают переднюю решетку и поддон и протирают все поверхности. Протирают также сточный резервуар и дезинфицирующий раствор из него сливают в контейнер. Дезинфицирующий раствор, перчатки, обтирочную ткань и губки помещают в лоток и автоклавируют. При этом не продезинфицированными остаются лишь фильтры, вентилятор, воздушные ходы и другие внутренние части бокса.

Если требуется продезинфицировать бокс изнутри, то это делают с помощью газообразного формальдегида. Отвешивают 0,3 г хлопьевидного параформальдегида на 0,03 м³ пространства бокса и на электроплитке вносят его внутрь бокса так, чтобы питающий шнур плитки выходил наружу. Влажность внутри бокса поднимают примерно до 70%, выпаривая на плитке воду. Температуру нагрева плитки с параформальдегидом поддерживают на уровне 292°С. Окно бокса закрывают полиэтиленовой пленкой, закрепляя ее клейкой лентой. Если воздух из бокса выходит в комнату, то к вытяжному отверстию бокса прикрепляют гибкий шланг и подводят его к вентиляционной решетке комнаты. Когда в здании используется система рециркуляции воздуха, шланг прикрепляют к открытому окну или двери. Если же воздух из бокса поступает непосредственно в вытяжную систему здания, то задвижку тяги закрывают. Для деполимеризации параформальдегида включают плитку. После того как деполимеризуется половина параформальдегида, примерно на 3 с, включают вентилятор бокса, чтобы формальдегид распространился по всему объему. После полной деполимеризации вновь включают вентилятор на 3 с. Затем оставляют бокс, по крайней мере, на 1 ч. После этого открывают задвижку тяги бокса, обеспечивая поступление воздуха в гибкий шланг, разрезают полиэтиленовую пленку, закрывающую окно, и включают вентилятор бокса. Бокс вентилируют в течение нескольких часов, чтобы удалить все следы формальдегида.

Проливание потенциально опасного биологического материала в лаборатории вне биологически безопасного бокса может подвергнуть риску тех, кто там находится. Если это произошло, прежде всего, надо избежать вдыхания любого материала, находящегося в воздухе, для чего задерживают дыхание и покидают лабораторию. Те, кто находился в помещении, предупреждают остальных об опасности и идут под душ или в раздевалку. Когда известно или есть подозрение, что заражена одежда, ее осторожно снимают, складывая зараженными местами внутрь, а затем кладут в мешок или загружают непосредственно в автоклав. Моют предположительно подвергшиеся заражению места, а также руки и лицо. Не заходят вновь в лабораторию в течение 30 мин, чтобы дать возможность осесть образовавшимся при проливании капелькам аэрозоля. Перед тем как войти в лабораторию, чтобы вымыть место, где была пролита суспензия, надевают защитную одежду (резиновые перчатки, обувь, которую можно автоклавировать, накидку и респиратор). Если суспензия была пролита на пол, не рекомендуется надевать хирургический халат, который может соприкасаться с полом при нагибании. Рядом с местом, где пролили суспензию, ставят контейнер для отходов, переносят туда крупные куски зараженного материала и закрывают его крышкой. Место, где виден пролитый материал, и вокруг него осторожно поливают раствором гипохлорита, содержащим 1000 ч. на млн. доступного хлора, раствором йодофора, содержащим 1600 ч. на млн. йода или другим подходящим дезинфицирующим агентом. Обработку производят в течение 15 мин, избегая брызг. Затем бумажным или матерчатым полотенцем вытирают дезинфицирующий раствор и пролитый материал по направлению к центру. Грязные полотенца сразу же бросают в контейнер для отходов. Контейнер для отходов, особенно дно, протирают снаружи полотенцем, смоченным в дезинфицирующем растворе, и помещают его и другие материалы в автоклав для стерилизации. Снимают обувь, верхнюю накидку, респиратор и перчатки и стерилизуют их в автоклаве. Моют руки и лицо и, если можно, принимают душ.

Инструменты

Зараженные шприцы, инструменты, термометры, пипетки и стеклянная посуда перед новым использованием должны быть обеззаражены. Если возможно, конечную обработку следует проводить паром для жаропрочных предметов или окисью этилена для неустойчивых к нагреванию и чувствительных к влаге материалов. В тех случаях, когда перед употреблением необходимо обеззараживание, для дезинфекции используют раствор 2%-ного глутарового альдегида. Предметы полностью погружают в раствор на 20-30 мин. При этом полная безопасность не гарантируется, если предмет не был предварительно вымыт или если раствор уже использовали ранее. Перед повторным употреблением инструменты необходимо тщательно прополоскать в дистиллированной воде, а если они предназначены для работы в полости тела животного или на его поверхности, то в стерильной дистиллированной воде.

Лабораторные пипетки обеззараживают погружением в дезинфицирующий раствор, например 2%-ный о-фенилфенол, налитый в вертикальную или горизонтальную емкость. Стеклянную посуду погружают полностью. Перед использованием стеклянную посуду стерилизуют паром.

Руки

Для обычного мытья рук в лаборатории, когда не имеют дела с инфекционными агентами, можно применять разные моющие средства. Тщательное мытье рук в течение 15-20 с дезинфектантом приводит к сокращению числа бактерий более чем на 50%.

Мыло в кусках использовать не рекомендуется не только из-за грязи в мыльнице, но также потому, что некоторые микроорганизмы сохраняют жизнеспособность на мыле в течение некоторого времени. Если в резервуар с жидким мылом не добавлять предохраняющих средств, то там могут постепенно вырасти многочисленные популяции бактерий. В этом случае резервуар следует вымыть обычным способом и налить туда новое мыло. Порошковые и листовые мыла имеют то преимущество, что они не загрязняются бактериями и бактерии не способны расти на них.

Быструю дезинфекцию рук после загрязнения производят одним из следующих способов:

1) моют руки щеткой 30-60 с смесью дезинфектанта и детергента и ополаскивают их водой;

2) моют руки щеткой 30-60 с смесью 4%-ного хлоргексидина и детергента и ополаскивают водой;

3) моют руки 20-30 с смесью фенольного дезинфектанта и детергента и затем ополаскивают водой (некоторые фенольные производные при слишком частом использовании в слишком больших концентрациях могут вызвать депигментацию смуглой кожи);

4) смачивают руки спиртом (50-70%) на 20-30 с, затем моют их щеткой с мылом в течение 10-15 с и ополаскивают водой.

 

                                        3. Общие положения при работе.

Работа с патогенными биологическими агентами (ПБА) проводится в специфических условиях, которые могут отрицательно влиять на здоровье работающих. Важнейшей особенностью этой работы является риск заражения патогенными микроорганизмами лабораторных работников и лиц, непосредственно контактирующих с ними, а также загрязнения окружающей среды.

Все это обусловливает необходимость создания в лабораториях условий, обеспечивающих безопасность персонала и окружающей среды от возможного воздействия патогенных агентов. Поэтому параллельно развитию микробиологии постоянно разрабатываются и и совершенствуются методы безопасной работы и средства защиты персонала и окружающей среды.

Существующие в настоящее время приемы и правила работы с ПБА (защитные устройства, противоэпидемические и технические мероприятия, определенный уровень автоматизации) в значительной мере обеспечивают предотвращение внутрилабораторных заражений, но полностью исключить их не могут, на что указывают периодически возникающие случаи заболевания вследствие заражения при лабораторной работе.

Обеспечение биологической безопасности при работе с ПБА включает два основных фактора: человеческий и технический.

Правильность действий человека в комплексе мер, обеспечивающих безопасное проведение работ с биоматериалом, в значительной степени обусловлена уровнем профессиональной подготовки и характерологическими особенностями индивидуума. Готовность сотрудника к самостоятельным действиям в случаях непредвиденных обстоятельств (авариях) может быть повышена соответствующей подготовкой и тренировкой. Хорошее знание основ обеспечения биологической безопасности, представление о возможных источниках заражения, свойствах используемых агентов, принципах функционирования защитных устройств и приспособлений, причинах возникновения аварий, а также владение навыками предупреждения и устранения таких ситуаций позволяет свести к минимуму значение «человеческого фактора» в возникновении лабораторных заражений.

Технический осмотр (оборудование, планировка, защитные системы, средства индивидуальной защиты, безопасные методы работы и др.) поддается совершенствованию, ведению контроля и страховочных механизмов. Необходимость четкой регламентации условий и организации работы с ПБА обусловила потребность в разработке соответствующей классификации микроорганизмов по степени их опасности непосредственно работающему («индивидуальная опасность») и окружающим («общественная безопасность»).

В соответствии с санитарными правилами (СП 1.3.1285-03) все микроорганизмы разделены на 4 группы патогенности (отдельные микроорганизмы приведены в приложении 1):

I группа – высокая индивидуальная и общественная опасность (высокая контагиозность инфекции, отсутствие эффективного лечения и профилактики, тяжелое течение заболевания, высокая летальность);

II группа – высокая индивидуальная опасность (возможность распространения инфекции ограничена);

III группа – невысокая опасность для окружающих; IV группа – условно- патогенные микроорганизмы(как правило они не вызывают заболевания у работающих с ними лиц).

В ветеринарной практике кроме названной выше используется классификация микроорганизмов, основанная на степени их опасности для животных. При определении уровня защиты персонала необходимо руководствоваться классификацией микроорганизмов, патогенных для человека.

Классификация патогенных биологических агентов, принятая в РФ, отличается от классификации в других странах, где наиболее опасные агенты отнесены к IV группе, а наименее опасные к I группе.

 

 

Лабораторные заражения

Причина инфицирования – это совокупность условий, ведущих к нарушению изоляции инфекционного материала в результате аварий или несоблюдения правил работы, что создает возможность заражения персонала или распространения инфекции в лаборатории, а также ее выхода в окружающую среду.

Анализ случаев лабораторного заражения или аварий имеет важное практическое значение. Он позволяет выявить наиболее опасные процедуры, источники и причины инфицирования персонала, а также пути распространения инфекции. На основе анализа должна проводиться разработка необходимых мероприятий, направленных на обеспечение безопасности персонала и охрану окружающей среды.

Существенную роль в оценке опасности внутрилабораторных заражений играют пути и способы переноса и распространения патогенных агентов.

Источники, пути и причины заражения лабораторного персонала весьма разнообразны. Потенциальным источником инфекции в лабораторных условиях является любой инфекционный материал (культуры, пробы, экспериментальные животные, отработанный материал и т.д.).

Анализу источников инфекции при лабораторном заражении посвящено много публикаций, в основном зарубежных авторов (A.Wedum, R.Pike, C.Collins и д.р.). Источники инфекции могут быть разделены на две группы – первичные и вторичные. Первичные источники связаны непосредственно с объектами исследований; вторичные – опосредованно, как результат неконтролируемого выхода инфекции и загрязнения поверхностей, оборудования, воздуха и т.д.

Пути поступления патогенных агентов в организм человека различны (через рот, органы дыхания, кожу, слизистые).

Для оценки относительной опасности инфицирования человека различными патогенными агентами важно знать заражающую дозу каждого агента, то есть число микроорганизмов, вирусных частиц или других агентов, приводящее к заражению. Заражающие дозы варьируют в больших пределах, и величина дозы зависит от пути поступления и состояния организма человека.

 

ЗАРАЖАЮЩИЕ ДОЗЫ НЕКОТОРЫХ ПАТОГЕННЫХ

БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ

R.Clarke, C.Collins

 

Патогенный биологический агент	Путь заражения	Доза
Лихорадка Денге	Ингаляционный	2,0*100
Лихорадка Цуцугамуши	Внутрикожный	3,0*100
Лихорадка Ку	Ингаляционный	1,0*101
Туляремия	Ингаляционный	1,0*101
Шигелла Флекснера	Скармливание	1,8*102
Сибирская язва	Ингаляционный	1,3*103
Сап	Ингаляционный	3,2*103
Холера	Скармливание	1,0*108
Кишечная палочка	Скармливание	1,0*108

 

Заражение человека микроорганизмами, с которыми ведется работа в лаборатории, регистрируются на протяжении всего периода существования микробиологии и рассматриваются как убедительное подтверждение профессиональной опасности и профессионального риска, связанного с работой в лаборатории.

К сожалению, в России статистика лабораторных заражений в доступной литературе отсутствует.

Первые случаи документированных лабораторных заражений исследователей (брюшным тифом) относятся к 1885г., а сообщение о них было опубликовано в 1915г. В последующие годы число зарегистрированных случаев возрастало пропорционально расширению исследований с патогенным материалом.

R.Pike провел обстоятельный анализ 3921 случая внутрилабораторных заражений, имевших место в 1930-74 годы в США и некоторых европейских странах. Из опубликованных данных следует, что лабораторные заражения были вызваны более чем 160 видами микроорганизмов, в том числе бактериями – 37, вирусами – 90, риккетсиями – 9, хламидиями – 3, грибками – 9, простейшими – 16.

Заболевания, вызванные бактериями, составили 42,6% (1669 случаев, из них с летальным исходом – 4,1%); вирусами – 26,7% (1049 случаев, летальных – 5,1%); риккетсиями – 14,6% (573 случая, летальных – 5,6%). Наибольшее число заболеваний зарегистрировано вследствие заражения бруцеллезом – 423 человека (10,8%). Высокая летальность отмечена автором при лабораторных заражениях гепатитом В – 71%, чумой – 40%, холерой – 33%, желтой лихорадкой – 22%, пятнистой лихорадкой скалистых гор – 18%, лептоспирозом – 15%.

 По данным R.Pike и J.Richardson отмечены редко встречающиеся групповые внутрилабораторные заражения в одной и той же лаборатории: из 423 случаев заражения бруцеллезом – 45, из 60 случаев болезни Кьясанурского леса – 53, из 45 случаев кожной формы сибирской язвы – 23.

Описаны вспышки заболеваний натуральной оспой в Англии (1979г.) и ФРГ (1980г.); туберкулеза – США (1980г.); лихорадки Ку – США и ФРГ (1982г.). Большинство из них связано с выносом инфекции за пределы лабораторий и заболеванием лиц, не имеющих непосредственного отношения к экспериментальным исследованиям.

Из всех лабораторных заражений на долю аварий пришлось только 17,9% и, таким образом, аварии не могут рассматриваться как ведущая причина их возникновения. Аэрозоль являлся причиной документально подтвержденных заражений в 13,3% случаев. Контакт с зараженными животными и эктопаразитами обусловил возникновение 16,8% случаев инфицирования; проливание и разбрызгивание инфицированной жидкости – 26,7%; аварии со шприцами и иглами – 25,2%. К настоящему времени показано, что при работе с животными одним из основных источников инфекции является аэрозоль, образующийся из-за распыления высыхающих инфицированных частиц выделений животных. В значительной части случаев (827 или 21,1%) в качестве заражения указан только факт работы с инфекционным материалом. С большей долей вероятности можно предположить, что источником заражений явился аэрозоль. Случаи лабораторных заражений, в которых аэрозоль явился установленной причиной заражения, или его роль можно предполагать, составляют большинство – 71,2% (по данным других авторов – 75%). Некоторые факторы риска, связанные с использованием технических средств и инструментов, приведены в таблицах (1,2)

 

Таблица 3

 

Вид оборудования, инструментария	Фактор риска
Шприцы для инъекций, иглы	Укол, образование аэрозоля, утечка материала
Центрифуга	Аэрозоль, разбрызгивание материала, повреждение пробирок
Анаэробные стаканы	Взрыв, разбрызгивание инфекционного Материала
Гомогенизаторы, измельчители Тканей	Аэрозоль, протечка
Культуральные мешалки и Шейкеры	Аэрозоль, разбрызгивание, Разливание
Аппараты лиофильной сушки	Аэрозоль
Ферментаторы	Аэрозоль, разбрызгивание, разливание
Пипетирующие средства	Аэрозоль, разбрызгивание
Боксы биологической безопасности	Аэрозоль (при нарушении правил пользования)

 

    Многочисленными исследованиями показано, что образованием инфекционного аэрозоля сопровождается большинство манипуляций, проводимых и инфицированным материалом. По данным отдельных авторов при исследовании по определению количественных показателей образования инфекционного аэрозоля при выполнении различных видов лабораторных работ проведены расчёты для каждой манипуляции фактора распыления (отношение количества частиц вирусов или бактерий, выбрасываемых в воздух за 1 мин., к их концентрации в 1 мл исходного материала). Приводимые авторами факторы распыления для отдельных манипуляций имеют следующие значения: работа пипеткой с образованием пузырьков жидкости – 1*10⁴, с каплями жидкого инфекционного материала – 3*10⁵; внутриносовое заражение белых мышей – 2*10⁷; удаление пробки из пробирки с инфекционным материалом – 2*10⁹.

    Ниже представлены следующие отдельные причины и частота лабораторных заражений при проведении различных работ.

Таблица 4

№ п/п	Вид происшествия (аварийная ситуация)	%
1	2	3
1	Случайное попадание в организм заразного материала в результате укола или пореза (иглы, скальпели, бой посуды и т.д.)	41,1
1	2	3
2	Заглатывание материала при пипетировании ртом, прием пищи в лабораториях, курение и т.д.	13,1
3	Разбрызгивание инфицированной жидкости, что обычно бывает при нарушении правил работы с микроорганизмами (недостаточном закреплении иглы в шприце, падение капли с пипетки на рабочую поверхность стола, ненадлежащей фиксации животных и т.д.	25,2
4	Работа с экспериментальными или экспериментально инфицированными животными: 1) приматы являются носителями гепатита В в 1-3%, и лабораторное заражение им характеризуется тяжелым течением и высокой летальностью; 2) кормление животных, перемещение, укусы, царапины, укус эктопаразитов, вдыхание высохших экскрементов, слюны и т.д. - укусы, царапины; - частота выделения микроорганизмов из мочи и фекалий лабораторных животных при   - сибирской язве, бруцеллезе и мелиоидозе;   - лихорадке Ку;   - пситтакозе;   - венесуэльском энцефаломиелите лошадей;   - клещевом энцефалите	87,5   13,5     100 72,7 75 50 80
5	Использование оборудования и инструментария, способных создать потенциальную опасность заражения
6	Вторичные (опосредованные) источники заражения, к которым относятся: - контаминированный персонал; - аэрозоль, проникающий из других помещений; - средства индивидуальной защиты; - неисправное оборудование; - системы водоснабжения, вентиляции, кондиционирования воздуха, канализации; - жидкие отходы; - мусор; - и.т.д.

 

Одними из наиболее опасных за последние годы (2004 – 2005 гг.), по официальным сообщениям (Приложение к ЕИКЗР «ООИ в мире» 2004 г.) внутрилабораторными заражениями явились случаи заражения связанные с вирусом Эбола:

- 2004 г. (февраль): Форт Детрик, Мэриленд (США) – ранение при проколе иглой (выздоровление);

- 2004 г. (май): Государственный исследовательский центр вирусологии и биотехнологии (Вектор), Кольцово, РФ – ранение при проколе иглой (летальный исход 19 мая)

Таким образом, к настоящему времени достаточно изучены возможные источники и пути заражения персонала микробиологических лабораторий, а также пути попадания инфекционного агента в окружающую среду. Эти данные должны использоваться для оптимизации техники лабораторной работы и надлежащей организации технологического процесса с целью обеспечения соответствующего уровня биологической безопасности.

      Необходимо отметить, что основной причиной, обеспечивающей эффективность мероприятий по профилактике внутрилабораторных заражений персонала и недопущения эпидемиологических осложнений, является «человеческий фактор», т.е. квалификация и дисциплинированность сотрудников.

Проблема профилактики внутрилабораторных заражений и предотвращение попадания контаминированного материала в окружающую среду имеет важное противоэпидемическое и социально-экономическое значение. Изучение и оценка различных аспектов опасности при работе с микроорганизмами должны являться одной из главных задач санитарно-эпидемиологической службы. Только на основе этих данных можно обоснованно и грамотно разрабатывать комплекс санитарно-гигиенических, профилактических и противоэпидемических мероприятий, направленных на защиту персонала и окружающей среды. Эти данные также могут служить основой для объективной оценки организации работ с микроорганизмами.

В России разработан комплекс организационных мероприятий по обеспечению биологической безопасности при работе с микроорганизмами I-II групп патогенности. Эти мероприятия изложены в документах, перечисленных в разделе 2 «Нормативные ссылки». В дополнение к регламентированному комплексу мероприятий в последние годы в учреждениях с целью своевременного выявления специфических заболеваний, ретроспективного подтверждения факта воздействия ПБА на персонал и контроля динамики уровня специфических антител за рубежом создаются банки сывороток крови сотрудников, а при оформлении на работу с ПБА – определяться чувствительность сотрудников к специфическим лечебным препаратам (антибиотикам, иммуноглобулинам и т.д.).

В настоящее время имеется реальная возможность использования ПБА в качестве биологического оружия в террористических целях. В учреждениях, проводящих работы с ПБА, имеются условия по наработке микробной массы. Для предупреждения наработки ПБА в непроизводственных целях и их несанкционированной передачи, для осуществления Госсанэпиднадзора на объектах, использующих микроорганизмы I-II групп патогенности, необходимо в обязательном порядке проводить контроль учета условий хранения, целевого использования ПБА согласно пояснительной записке по организации работ с ними.

 

Общие правила.

Базовые лаборатории – уровни