Мероприятия по предотвращению заражения людей и контаминации окружающего оборудования.

При работе с бактериями необходимо тщательно выполнять следующие меры предосторожности.

1. Держать двери лаборатории закрытыми.

2. Дезинфицировать рабочие поверхности ежедневно и каждый раз после проливания растворов, содержащих бактерии.

3. Перед мытьем или повторным употреблением загрязненные предметы, такие, как лабораторная посуда, оборудование используемое в боксовой работе, клетки для животных должны быть автоклавированы или дезинфицированы.

4. Использовать механические устройства для набирания жидкости в пипетки.

5. Не есть, не пить и не курить в лаборатории.

6. Часто мыть руки и всегда-перед выходом из лаборатории.

7. Все процедуры и манипуляции выполнять осторожно, сводя к минимуму образование аэрозолей.

8. На соответствующих лабораторных дверях установить знаки биологической опасности. Морозильники, холодильники и другие места хранения патогенных бактерий также должны быть снабжены этим знаком.

9. Надевать нательное лабораторное белье, защитную одежду или халаты. Не носить эту одежду вне лаборатории.

10. Избегать по возможности использования игл и шприцев.

 

 

1 –                            Bio Hazard

2 - ADMITTANCE TO AUTHORIZED PERSONNEL ONLY

3 - Hazard identity:                                             

4 - Responsible Investigator:

5 - In case of emergency call:

6 - Daytime phone

7 - Home phone

8 - Authorization for entrance must be obtained from the responsible Investigator named above.

Рис. 2. Знак биологической опасности, предназначенный
для вывешивания в местах возможного заражении.
Перевод с англ.: 1- биоопасность: 2-вход разрешен только сотрудникам, имеющим допуск; 3-вид опасности; 4-ответственный; 5- в экстренном случае звонить; 6-рабочий телефон; 7-домашний телефон; 8-допускаются только получившие разрешение у ответственного.

            Специальные лабораторные процедуры безопасности

Личная гигиена

Еду, конфеты, жевательную резинку и напитки нельзя хранить и употреблять в лабораторных комнатах.

Курение в рабочих помещениях запрещено.

Нежелательно, чтобы работающие в лаборатории имели бороду, во-первых, потому что в бороде могут сохраняться частички с бактериями и, во-вторых, потому что маска или респиратор к чисто выбритому лицу прилегает гораздо лучше, чем к лицу с бородой.

Руки не следует подносить близко ко рту, носу, глазам, лицу и волосам, чтобы предотвратить самозаражение.

Личные вещи, такие, как пальто, шляпы, плащи, уличную обувь, зонты и кошельки, необходимо хранить вне лабораторных помещений.

После снятия защитных перчаток следует немедленно вымыть руки. Проверочные опыты показывают, что, даже когда используют перчатки, не исключено попадание на руки бактерий. Бактерии могут проникнуть через незаметные маленькие дырочки, трещины или разрывы или попасть через край перчатки, прилегающий к запястью.

Руки нужно мыть, сняв запачканную защитную одежду, перед выходом из лаборатории, перед едой иди курением и в течение дня через интервалы, определяемые. характером работы. Желательно мыть руки в дезинфицирующем растворе или погружать их в него, но при этом, конечно, не следует допускать огрубения, чрезмерного высушивания или раздражения кожи.

К работе с бактериями нельзя допускать людей со свежим или старым порезом, ссадиной, повреждением кожи или любой открытой раной, включая образовавшуюся после удаления зуба.

Работа с пипетками

Чтобы уменьшить возможность заражения, следует использовать безопасные способы применения пипеток. Насасывание раствора пипеткой было причиной бактериального заражения в лабораторных условиях более чем в 17% всех известных случаев.

Наиболее распространенный способ, при котором подвергаются опасности в работе с пипеткой – это насасывание ртом. Бактерии могут также попасть в рот, если загрязненным пальцем дотронуться до верхнего конца пипетки. Кроме того, если в пипетках нет ватных пробок, то заражение может произойти путем вдыхания аэрозолей, возникающих в процессе работы с жидкими суспензиями, даже в том случае, когда жидкость не попадает в рот. Дополнительная опасность действия аэрозолей возникает, когда жидкость из пипетки капают на рабочую поверхность, перемешивают культуру чередованием всасывания и выдувания, интенсивно выдувают культуру в чашку или выдувают последнюю каплю из пипетки.

Чтобы использование пипеток было безопасным, применяют дополнительные приспособления, предотвращающие опасность заглатывания, и стараются обращаться с ними осторожно. Существует множество приспособлений к пипеткам – от простых шаровидных груш и поршневых насасывателей до сложных конструкций, имеющих свои собственные насосы, создающие вакуум. При выборе приспособления надо иметь в виду тип операции, которую требуется выполнить, легкость выполнения, а также ее точность. Предварительно следует отработать технику использования пипеток, чтобы уменьшить возможность образования аэрозолей.

В верхнюю часть пипетки вставляют кусочки ваты и стараются избегать быстрого смешивания жидкостей путем чередования всасывания и выдувания их из пипеток. Нельзя с силой выдувать раствор из пипетки и допускать попадания пузырьков воздуха в жидкость, набираемую пипеткой. Предпочтительнее использовать пипетки, при работе с которыми не требуется выдувания последней капли. Необходимо также следить за тем, чтобы культуральный материал не капал из пипетки. Можно при работе с суспензиями, содержащими патогенные бактерии, на рабочую поверхность класть полотенце, пропитанное дезинфицирующим веществом. Жидкость из пипеток выливают таким образом, чтобы кончик пипетки находился почти над уровнем жидкости или агара в сосуде-приемнике или раствор стекал по его стенке. Нельзя вносить раствор из пипетки в сосуд каплями, падающими с высоты. Грязные пипетки помещают в емкости с дезинфицирующим раствором, полностью погружая в него.

Применение шприцев и игл

Причиной наибольшего количества из всех известных случаев бактериальных заражений в лабораторных условиях является использование игл и шприцев. Для того чтобы уменьшить вероятность неблагополучной инъекции, образования аэрозоля или проливания суспензий бактерий, лучше избегать их применения. Для введения суспензий бактерий животным через рот или нос рекомендуется пользоваться тупой иглой или канюлей на шприце и не рекомендуется применять шприц и иглу как заменитель пипетки.

Существуют следующие правила использования игл и шприцев для парентеральных инъекций.

Пользуются биологически безопасным боксом и избегают быстрых лишних движений рукой, держащей шприц.

Проверяют стеклянные шприцы на присутствие сколов и трещин, а иглы-на наличие зазубрин и проходимость. Это делают перед стерилизацией и перед употреблением.

Пользуются только шприцами с иглами и удостоверяются, что игла закреплена надежно. Используют хирургические или другие резиновые перчатки. Шприцы заполняют осторожно, чтобы в набираемом растворе было как можно меньше пузырьков воздуха и пены.

Излишки воздуха, жидкости и пузырьки удаляют, держа шприц в вертикальном положении, в ватный тампон, смоченный дезинфицирующим веществом, или в маленькую бутылочку, наполненную стерильной ватой.

Шприц не применяют для внесения инфекционной жидкости в открытый пузырек или пробирку с целью смешивания. Смешивание с помощью шприца разрешается только в том случае, если конец иглы находится ниже поверхности жидкости в пробирке.

Если раствор набирают шприцем из пробирки, то стараются не загрязнить втулку иглы, так как это может привести к попаданию инфекционного материала на пальцы.

Когда вынимают шприц и иглу из бутыли с резиновой пробкой, иглу и пробку заворачивают в ватный тампон, смоченный соответствующим дезинфектантом. Если есть опасность загрязнения дезинфектантом чувствительного к нему материала, используемого в эксперименте, применяют стерильный сухой тампон, который сразу же помещают в дезинфицирующий раствор.

Во время прививки животному руку держат сзади иглы во избежание укалывания.

Перед прививкой убеждаются в том, что животное хорошо фиксировано, и принимают меры предосторожности в случае неожиданных движений.

Место прививки перед инъекцией и особенно после нее протирают дезинфицирующим веществом.

После использования грязные стеклянные шприцы многоразового пользования с надетыми на них иглами погружают в емкость с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют. Чтобы уменьшить возможность заражения, иглы должны оставаться на шприцах до конца автоклавирования. Шприцы с надетыми на них иглами помещают в отдельный лоток, в котором нет других использованных материалов,

Иглы и шприцы одноразового пользования помещают в лоток с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют. Емкости с надписью «Шприцы и иглы» после соответствующей упаковки и разрушения содержимого можно выбрасывать в обычный контейнер для отходов. После стерилизации иглы и шприцы специально портят и разбивают, чтобы их не использовали наркоманы.

В тех случаях, когда после использования иглу нужно поместить в защитный футляр, ее берут пинцетом, чтобы уменьшить вероятность случайного укола пальца. Шприцы и иглы многоразового и одноразового пользования складывают в отдельные лотки с дезинфектантом, чтобы не возникало проблемы их сортировки. Шприцы и иглы никогда не кладут в лотки, содержащие пипетки и другую стеклянную посуду.

Вскрытие емкостей

С пробирками, содержащими бактериальные суспензии, необходимо обращаться осторожно. Такие простые операции, как удаление пробки из пробирки или перенесение культуры из одной емкости в другую, могут вызывать образование аэрозолей. Следует четко метить пробирки и штативы с пробирками, содержащими биологически опасный материал. Чтобы уменьшить проливание из разбитых пробирок, рекомендуется пользоваться безопасными подставками для пробирок вместо обычных штативов. В такой безопасной подставке каждая выемка для пробирки имеет достаточно высокие стенки, так что если пробирка разобьется, все ее содержимое останется в выемке. Аэрозоль с большим содержанием жидкости образуется при энергичном встряхивании жидких культур, тогда как при вращательном движении сосудов образование аэрозоля минимально, а получаемая суспензия достаточно гомогенна. По окончании ресуспендирования жидкой культуры следует несколько минут выждать и только затем открывать емкость; это способствует снижению образования аэрозоля.

Брызги аэрозоля могут появляться при погружении стерильной горячей петли или иглы в жидкую культуру или в косяк. Чтобы уменьшить образование аэрозолей, петле дают остыть либо на воздухе, либо при соприкосновении с внутренней стенкой емкости или поверхностью агара, где до этого заведомо не росла культура. После использования петли и иглы ее стерилизуют нагреванием на открытом пламени. В продаже имеются петли для внесения инокулята одноразового пользования, которые проще обеззараживать погружением в дезинфицирующий раствор, чем нагреванием.

При посеве штрихом на неровную поверхность агара происходит вибрация петли или иглы, что приводит к образованию аэрозоля. Как правило, этой проблемы не существует, если посев делают на гладкую поверхность агара, поэтому рекомендуется не высевать культуру в чашки с неровной поверхностью агара.

Вода, появляющаяся в чашках Петри в результате синерезиса, образует в перевернутой чашке пленку между ребром чашки и крышкой в которой могут содержаться жизнеспособные бактерии. При открывании чашки эта пленка разрывается, в результате чего возникают аэрозоли. Чашки следует открывать в боксе.

Менее вероятно высвобождение аэрозолей при открывании бутылей с завинчивающимися пробками или закрытых тампонами пробирок. Но все же это может произойти, когда во время открывания разрывается пленка между краем и прокладкой. Аэрозоли образуются при удалении ватных пробок или крышек с колб, бутылей и центрифужных стаканов сразу же после взбалтывания или центрифугирования. Опасно вынимать пробки, намокшие в результате невертикального положения колбы или центрифужного стакана. Пробки могут слегка увлажняться при центрифугировании, если в ходе его происходит незначительное вспенивание. В связи с этим все жидкие культуры с инфекционным материалом необходимо открывать в безопасном боксе, надев перчатки и лабораторную одежду с длинными рукавами.

Аэрозоль может образовываться при вскрытии запечатанной ампулы с лиофилизованной или жидкой культурой, поэтому ампулы следует вскрывать только в боксе. Собирая осколки ампулы, необходимо позаботиться о том, чтобы не порезать перчатки или руки, чтобы разбитое стекло не попало в глаза, на лицо или не осталось неубранным. После вскрытия ампулы суспензия бактерий не должна загрязняться посторонними микроорганизмами или дезинфицирующими веществами. Этого добиваются, работая в безопасном боксе в перчатках. Для того чтобы вскрыть ампулу, прежде всего делают насечку пилкой около шейки ампулы. Саму ампулу оборачивают ватой, пропитанной дезинфицирующим веществом, и вскрывают надломом в месте насечки, предварительно убедившись, что держат ее вертикально. Другим способом в месте насечки делают трещину, прикладывая к нему накаленную проволоку или стеклянную палочку, затем оборачивают ампулу пропитанной в дезинфицирующем веществе ватой и открывают ее надломом. Вату и верхушку ампулы немедленно бросают в дезинфицирующий раствор. Содержимое ампулы растворяют путем медленного добавления жидкости, стараясь не допускать образования аэрозоля. Раствор перемешивают, следя за тем, чтобы не было пузырьков, и переносят в приготовленную емкость.

Для удобства открывания выпускаются ампулы с предварительно нанесенной насечкой, однако такие ампулы менее надежны: они могут разбиваться во время работы с ними или при хранении. Ампулы с жидкими культурами вскрывают аналогичным образом.

Сбор культур, выращиваемых на куриных эмбрионах, весьма опасен. При его проведении сильно загрязняются скорлупа и подносы с яйцами, окружающая среда и руки экспериментатора. Работу подобного рода следует выполнять в безопасных боксах, часто пользуясь подходящим дезинфицирующим веществом.

Центрифугирование

При центрифугировании инфекционных бактериальных суспензий следует пользоваться безопасными центрифужными гильзами, а настольные центрифуги должны находиться только в боксах

Центрифужные стаканы и гильзы наполняют и открывают в безопасном боксе. Если центрифугируют вне бокса, то применяют защитную гильзу. После заполнения и запечатывания ее протирают или окунают в дезинфицирующий раствор. По истечении необходимого времени гильзу обмывают чистой водой, поскольку некоторые дезинфицирующие вещества вызывают коррозию.

Перед центрифугированием проверяют стаканы, и если находят трещины или сколотые края, то такими стаканами не пользуются. Внимательно осматривают внутреннюю поверхность гильз и ликвидируют шероховатости или приставшие частицы. Проверяют также состояние резиновых прокладок.

Между стаканом и гильзой заливают дезинфицирующий раствор, чтобы в том случае, если разобьется стакан, материал подвергся дезинфекции. К тому же это создает хорошую амортизацию. Следует позаботиться о том, чтобы культуральный материал не загрязнился дезинфицирующим веществом. Рекомендуется также не забывать о том, что если стакан разобьется, то из-за высокой концентрации клеток и большого разбавления дезинфицирующего вещества инфекционный материал может дезинфицироваться не полностью.

Надосадочную жидкость лучше не выливать из центрифужных стаканов, а отсасывать. Если ее необходимо слить, протирают внешний край стакана дезинфицирующим раствором, так как, если этого не сделать, на следующей стадии может образоваться аэрозоль.

Центрифужный стакан заполняют таким образом, чтобы край, крышка или ватная пробка не становились влажными от культуры. Завинчивающиеся крышки или крышки, охватывающие края сверху, безопаснее крышек, входящих внутрь. В последнем случае между крышкой и краем стакана обычно собирается некоторое количество жидкости. Даже стаканы с завинчивающимися крышками небезопасны: если края запачканы и неплотно прилегают к крышке, некоторое количество жидкости может попасть на внешнюю стенку стакана.

Не рекомендуется закрывать центрифужные стаканы алюминиевой фольгой, потому что при центрифугировании она часто слетает или рвется.

Стаканы и гильзы необходимо тщательно уравновешивать. Не следует смешивать гильзы, стаканы и пластмассовые вкладыши из разных наборов. Если на этих предметах не указан вес, удобно пометить каждый комплект своей краской.

Металл, из которого сделаны высокоскоростные роторы, постепенно изнашивается, и если их используют на разных центрифугах, то для каждого заводят тетрадь, в которой отмечают количество часов работы на предельной или пониженной скорости. Если это не соблюдается, может произойти опасная и дорогостоящая поломка. Чтобы предотвратить коррозию или другие дефекты, которые могут привести к развитию трещин, необходимы частые проверки роторов, их очистка и сушка. Если ротор обрабатывают дезинфицирующим раствором, то после этого его промывают водой и высушивают. Регулярно проверяют состояние резиновых колец и крышек центрифужных стаканов и смазывают их в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя. Если стаканы сделаны из различных материалов {например, целлулоидные, полипропиленовые, из нержавеющий стали), следят за тем, чтобы использовались крышки, предназначенные для соответствующих типов. Крышки часто внешне похожи, но если их надевают на несоответствующие им стаканы, последние могут давать течь. При хорошем хранении стаканов и роторов и правильном с ними обращении этого не происходит.