Серологический метод – выявление антител IgG к HР в плазме крови.

Колонизация НР вызывает системный иммунный ответ. Через 3–4 нед после инфицирования в крови больных появляются антитела к НР Эти антитела определяются путем ИФА. Поскольку инфекция является хронической и ее спонтанный клиренс невозможен, то положительные серологические тесты у нелеченых пациентов указывают на наличие текущей инфекции. Специфичность метода – 93–94%, чувствительность – 59–71%.

Самым распространенным серологическим методом является ИФА. Метод неинвазивный и косвенный – в крови больного определяют антитела к НР. Чувствительность данного метода 87-98 %, специфичность около 75-100 %. В настоящее время в распоряжении клинической лабораторной диагностики имеются наборы для серологического анализа, позволяющие оценивать патогенность штаммов НР. Такие штаммы характеризуются наличием гена Cag A, на основе которого продуцируется цитотоксический белок. Метод ИФА позволяет обнаружить АТ к этому белку в крови больных. Диагностическая чувствительность тест-систем для обнаружения АТ к белку Cag A НР составляет 90-100 %, специфичность – 76-90 %.
При обнаружении АТ к НР, проводят количественное исследование. На основании снижения титра антител после проведенной терапии судят об эффективности подобранной антибиотикотерапии.
Очень распространены стали экспресс-тесты АТ Ig. Время выполнния 10 минут.
Другим высокоспецифичным методом диагностики НР инфекции является Western-blot – встречная преципитация в геле АТ сыворотки крови больного с различными белками НР, меченными зондами, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу.

Цитологическое исследование

Для цитологического исследования используются мазки-отпечатки (1-2 и более), полученные при эндоскопии из биоптатов слизистой оболочки (СО) антрального отдела желудка. Биоптат берется прицельно из участков с наиболее выраженными визуальными отклонениями от нормы (гиперемия, отек), но не из дна язв и эрозий. Высушенные мазки окрашиваются.
Применяемые паноптические методы окраски позволяют выявить морфологические особенности строения ядер и цитоплазмы клеток слизистой оболочки, наличие Helicobacter pylori, ориентировочно оценить количество микроорганизмов. Как правило, НР располагаются в слизи, имеют спиралевидную, изогнутую форму, могут быть S-образными. иметь вид «крыльев летящей чайки».
При изучении в цитологических препаратах можно выделить три степени обсеменённости слизистой оболочки: слабая {+) — до 20. средняя (++) — до 40, высокая (+++) — более 40 микробных тел в поле зрения при увеличении х360.
При обнаружении в мазках-отпечатках Helicobacter pylori выявляется также и клеточная инфильтрация, характеризующаяся наличием лимфоцитов, плазматических клеток, нейтрофилией и эозинофилией.
По преобладанию тех или иных клеточных элементов можно косвенно судить об активности и выраженности воспаления, кроме того, цитологическое исследование позволяет выявить в клетках слизистой оболочки наличие пролиферативных процессов и слепень их выраженности, метаплазии (кишечной в желудке и желудочной в дуоденуме), дисплазии и её степени тяжести, злокачественного новообразования. Однако цитологический метод не дает информации о структуре исследуемой слизистой оболочки.

Дыхательный Хелик-тест.

Суть этого метода выявления хеликобактер так же основана на способности бактерии выделять уреазу, но для анализа в качестве реактива применяется раствор с 0,5 г карбамида. Уреазная активность бактерии проявится гидролизом этого вещества, а результаты очень быстро считываются при помощи анализа выдыхаемого воздуха индикаторной трубкой (за 15 минут) или цифровым аппаратом (за 9 минут). При этом измерительная аппаратура фиксирует в выдыхаемом пациентом воздухе не пары меченого углеводорода (как при С-уреазном тесте), а количественное содержание паров аммиака.

• При использовании индикаторной трубки итоги обследования оцениваются по цвету индикаторной композиции и фиксируются на бланке анализа вручную.
• При применении цифрового аппарата данные сохраняются автоматически в базе прибора и на компьютере.

Для проведения Хелик-теста требуется минимальная подготовка пациента, и он, как и С-уреазный тест, не имеет никаких противопоказаний. Такая методика выявления хеликобактер обладает высокой долей достоверности и позволяет за считанные минуты выявить заражение бактерией в принципе. Этот базовый тест стоит дешевле, но он менее информативен, чем С-уреазный. Подобный анализ нередко применяется гастроэнтерологами, терапевтами, педиатрами и семейными врачами для подтверждения инфицирования хеликобактер. Достоверность Хелик-теста составляет около 75 %.

Для сдачи Хелик-теста следует выполнить следующие действия:

1. Пациент удобно располагается в положении сидя.

2. Врач предлагает ему подышать в обычном режиме в пластиковую трубку на протяжении 6 минут. Дыхание не должно форсироваться, а используемая трубка не должна касаться языка и неба, так как при попадании в нее слюны результаты исследования могут искажаться. Тест-системы с индикаторной трубкой более подвержены к случайному затеканию слюны, чем системы с цифровыми аппаратами, снабженные специальными мундштуками. При попадании слюны в трубку исследование следует начать заново через 30-40 минут.

3. Специалист фиксирует данные первого этапа обследования. При использовании цифрового аппарата эти результаты считываются и запоминаются автоматически.

4. После этого врач дает пациенту принять 0,5 г карбамида, который предварительно растворяется в 50 мл воды.

5. Далее больной вновь дышит в трубку, но с другой стороны. Этот этап анализа занимает около 6 минут.

6. После завершения второй части обследования результаты вновь фиксируются.

7. Обработка данных и составление заключения проводится специалистом, и результаты анализа не доставляются в лабораторию.

Результаты исследования, проводимого при помощи индикаторной трубки, оцениваются врачом визуально по специальной шкале. При применении тест-систем с цифровыми аппаратами итоги анализа фиксируются автоматически.

Результаты Хелик-теста могут получаться мгновенно или через 30 минут после исследования (в зависимости от используемой тест-системы). Они не показывают количественных результатов и указывают только на присутствие или отсутствие инфицирования пациента хеликобактер.

Б)Оценка эффективности лечения.

Оценку необходимо осуществлять с помощью дыхательного теста с мочевиной, меченной 13С, или определения антигена H. pylori в кале лабораторным способом не ранее чем через 4 нед после окончания курса антигеликобактерной терапии либо после окончания лечения сопутствующих заболеваний любыми антибиотиками, препаратом висмута или антисекреторными средствами.Серологические методы определения антител к H. pylori в этой ситуации не применяют.В отсутствие возможности использовать референсные методы диагностики целесообразно комбинировать доступные диагностические тесты или (в случае применения методов непосредственного обнаружения бактерии в биоптате слизистой оболочки желудка — бактериологического, морфологического, быстрого уреазного теста) исследовать хотя бы два биоптата из тела желудка и один биоптат из антрального отдела.

¹³ С-уреазный дыхательный тест.

¹³С-уреазный дыхательный тест основан на способности H. pylori продуцировать фермент уреазу, который активирует реакцию гидролиза мочевины с образованием углекислого газа и аммиака. В ходе теста (процедуру см. выше) пациент принимает мочевину, содержащую углерод ¹³С. ¹³С является стабильным (нерадиоактивным) изотопом углерода, который природно в организме человека составляет 1,11% от общего количества, сравнительно с 98,89% углерода в форме ¹²С. Если в желудке присутствуют бактерии H. pylori, мочевина под действием вырабатываемой этими бактериями уреазы гидролизуется, углекислый газ, содержащий метку ¹³С, всасывается в кровь и выделяется в составе выдыхаемого воздуха. Проводят отбор и анализ проб выдыхаемого пациентом воздуха до и после приема мочевины с меткой ¹³С. С применением инфракрасного анализа в них исследуют относительное содержание ¹³С/¹²С, на основании чего можно сделать вывод о наличии или отсутствии инфицирования H. рylori.

Непосредственно перед исследованием пациенту необходимо выпить 200 мл апельсинового или грейпфрутового сока, чтобы замедлить эвакуацию из желудка. Через 5-10 минут производится взятие контрольной пробы воздуха – пациент делает выдох в специальный герметичный пакет, который затем закрывается и маркируется соответствующим образом. Для обеспечения точности теста особенно важно выдыхать последнюю (альвеолярную) часть воздуха. Затем пациенту дают выпить 50 мл раствора мочевины, меченной изотопом углерода ¹³С. Это раствор без вкуса и запаха, его прием не сопровождается никакими неприятными ощущениями. Раствор готовится непосредственно перед приемом, его необходимо выпить в течение пяти минут после приготовления. Взрослые выпивают приготовленный раствор полностью (50 мл), а дети от 5 до 12 лет – половину. Затем в течение получаса следует находиться в спокойном состоянии, чтобы на результаты исследования не повлиял углекислый газ, выделяющийся при физической нагрузке. Через 30 минут производится взятие второй пробы воздуха, пакет с которой также герметично закрывается и маркируется. Затем пробы воздуха анализируют на инфракрасном спектрометре для определения изотопного соотношения ¹³С/¹²С. Если пациент инфицирован Helicobacter pylori, то во второй пробе воздуха появится увеличенное количество ¹³СО₂ по сравнению с его содержанием в первой (контрольной) пробе.