История развития пистолетов-пулеметов: Предпосылкой для возникновения пистолетов-пулеметов послужила давняя тенденция тяготения винтовок...
Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого...
Топ:
Проблема типологии научных революций: Глобальные научные революции и типы научной рациональности...
Марксистская теория происхождения государства: По мнению Маркса и Энгельса, в основе развития общества, происходящих в нем изменений лежит...
Когда производится ограждение поезда, остановившегося на перегоне: Во всех случаях немедленно должно быть ограждено место препятствия для движения поездов на смежном пути двухпутного...
Интересное:
Влияние предпринимательской среды на эффективное функционирование предприятия: Предпринимательская среда – это совокупность внешних и внутренних факторов, оказывающих влияние на функционирование фирмы...
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Распространение рака на другие отдаленные от желудка органы: Характерных симптомов рака желудка не существует. Выраженные симптомы появляются, когда опухоль...
Дисциплины:
2018-01-29 | 387 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Таким образом, целью данного практического занятия является ознакомление с методикой анализа белков при помощи электрофореза в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях (возможные варианты сокращений, наиболее часто встречающихся в литературе:ДСН‑ПААГ, SDS‑ПААГ, SDS‑PAGE).
Для реализации поставленной цели необходимо:
- приготовить полиакриламидный гель, применимый для разделения белков с соответствующей молекулярной массой;
- приготовить образцы для электрофореза;
- приготовить электродный буферный раствор;
- провести электрофоретическое разделение исследуемых образцов;
- окрасить гель при помощи раствора кумасси ярко-синего
- получить электрофореграмму и проанализировать полученные результаты.
Техника безопасности
Лабораторное занятие проводится при строгом соблюдении правил безопасности при работе в химической лаборатории и эксплуатации электроприборов.
Расходные материалы и оборудование
1. Камера для вертикального электрофореза белков «MiniProteanTetra» (Bio-Rad, США или аналог);
2. Источник тока «Эльф-8» (ДНК-технология, Россия или аналог);
3. Система гель-документирования с функцией детекции в видимой области светового излучения (UVP, США или аналог) – не обязательное оборудование;
4. Электронные аналитические весы (Shimadzu, Япония или аналог) и набор шпателей для взвешивания;
5. Система для получения деионизированной воды milliQ (Millipore, США или аналог);
6. Термостат «Гном» (ДНК-технология, Россия или аналог);
7. Комплект оборудования для формирования геля (Bio-Rad, США или аналог);
8. Настольная центрифуга (Eppendorf, Германия или аналог);
9. рН-метр (Аквилон, Россия или аналог);
10. Холодильник (Стинол, Россия или аналог);
|
11. Шейкер (ELMI, Латвия или аналог);
12. Набор автоматических пипеток (Sartorius, Швейцария или аналог);
13. Магнитная мешалка с нагревом (HeidolphInstruments, Германия или аналог);
14. Набором магнитов для мешалки (HeidolphInstruments, Германия или аналог);
15. Химические стаканы (Simax, Чехия или аналог);
16. Пластиковые пробирки на 1.5, 5 и 50 мл (Corning или аналог);
17. Мерные колбы на 50, 100 и 1000мл (Simax, Чехия или аналог);
18. Мерные цилиндры (50 и 100мл) и мерные стеклянные стаканы (Simax, Чехия или аналог);
19. Стеклянные бутыли для хранения растворов (Simax, Чехия или аналог);
20.; Фильтровальная бумага, парафильм;
21. Носики для автоматических пипеток (Corning или аналог)
22. Носики для автоматической пипетки для нанесения образцов в гель (Corning или аналог), либо шприц многоразовый на 25 мкл (Hamilton, Швейцария или аналог)
2.2 Реактивы:
акриламид, N,N' –метиленбисакриламид, Трис, додецилсульфат натрия (SDS), персульфат аммония, N,N,N',N' – тетраметилэтилендиамин (ТЕМЕД), глицин, глицерин, β-меркаптоэтанол, ЭДТА, бромфеноловый синий, кумассиR250 (Bio-Rad, США или аналог), набор маркеров молекулярных масс белков (15-150 кДа) (ThermoScientific или аналог), уксусная кислота, соляная кислота (х.ч), этанол.
2.3. Прописи для приготовления требуемых растворов:
1%-ный раствор бромфеноловогосинего
Способ приготовления: Навеску бромфенолового синего растворить в воде MilliQ, довести объем раствора до метки. Хранить при комнатной температуре.
Лабораторная пропись для получения 10 мл раствора: 0.1г бромфенолового синего, деионизированная вода.
30%-ный раствор бис-акриламида
Состав: 1% BIS, 29% акриламид, деионизированная вода.
Способ приготовления: Соответствующие навески веществ растворить в воде MilliQ, довести объем раствора до метки. Добавить активированный уголь и оставить для перемешивания на ночь на магнитной мешалке. Профильтровать и хранить при 4 0С.
Лабораторная пропись для получения 100 мл раствора: 1г BIS, 29г акриламида, деионизированная вода.
10%-ный раствор персульфата аммония
|
Состав: персульфат аммония, деионизированная вода.
Способ приготовления: Навеску персульфата аммония растворить в деионизированной воде MilliQ, довести объем раствора до метки. Хранить при ‑200С.
Лабораторная пропись для получения 5 мл раствора: 0.5г персульфата аммония, деионизированная вода.
10%-ная уксусная кислота
Состав: «ледяная» уксусная кислота, деионизированная вода.
Способ приготовления: Разбавить «ледяную» уксусную кислоту водой MilliQ в соотношении 1:9. Хранить при комнатной температуре.
Лабораторная пропись для получения 100мл раствора: 10мл «ледяной» уксусной кислоты, 90 мл деионизированной воды.
М раствор ЭДТА, рН 8.0
Состав: Na2ЭДТА×2H2O, NaOH, деионизированная вода MilliQ.
Способ приготовления: К 186.1 грамму Na2ЭДТА×2H2Oдобавить 350 мл MilliQ. Подвести рН до 8.0 при помощи 10 Мраствора NaOH (примерно 25 мл). Довести объем раствора до 500 мл деионизированной водой MilliQ.
|
|
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
Индивидуальные и групповые автопоилки: для животных. Схемы и конструкции...
Семя – орган полового размножения и расселения растений: наружи у семян имеется плотный покров – кожура...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!