Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций...
Состав сооружений: решетки и песколовки: Решетки – это первое устройство в схеме очистных сооружений. Они представляют...
Топ:
Оценка эффективности инструментов коммуникационной политики: Внешние коммуникации - обмен информацией между организацией и её внешней средой...
Проблема типологии научных революций: Глобальные научные революции и типы научной рациональности...
Характеристика АТП и сварочно-жестяницкого участка: Транспорт в настоящее время является одной из важнейших отраслей народного...
Интересное:
Что нужно делать при лейкемии: Прежде всего, необходимо выяснить, не страдаете ли вы каким-либо душевным недугом...
Берегоукрепление оползневых склонов: На прибрежных склонах основной причиной развития оползневых процессов является подмыв водами рек естественных склонов...
Финансовый рынок и его значение в управлении денежными потоками на современном этапе: любому предприятию для расширения производства и увеличения прибыли нужны...
Дисциплины:
2017-09-30 | 344 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Принцип метода. Пировиноградную кислоту осаждают в виде 2,4-динитрофенилгидразона; осадок этого гидразона очищают от примесей гидразонов других кетокислот последовательной экстракцией толуолом и содой. В содовом экстракте определяют пировиноградную кислоту колориметрическим методом.
Реактивы: 1) 5%-ная трихлоруксусная кислота;
2) 0,2%-нын 2,4-kинитрофенилгндразин;
3) 2 н. соляная кислота;
4) 10%-пая сода;
5) толуол;
6) пируват лития или натрия;
7) 1.5 н. едкий натр
Ход определения
Для количественного определения пировиноградной кислоты берут навески тканей 0,8 - 1,0 г, белки осаждают 9-кратным количеством охлажденной 5%-ной трихлоруксусной кислоты, смесь тщательно взбалтывают, охлаждают и через 10 - 15 мин центрифугируют. Прозрачный центрифугат осторожно декантируют; 4 мл его, что соответствует 0,4 г ткани, переносят в конусные пробирки, содержащие 1мл0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, и после 10 - 15-минутного стояния при комнатной температуре (для лучшего образования гидразона пировиноградной кислоты) смесь помещают в водяную баню (35 - 37°) на 10 - 15 мин. После охлаждения производят извлечение 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты с примесью гидразонов некоторых других кетокислот. Для этого к реакционной смеси добавляют 4 млтолуола, смесь тщательно перемешивают воздухом при помощи водоструйного насоса в течение 3 - 5 мин; экстракцию можно вести одновременно в нескольких пробирках, соединенных последовательно с водоструйным насосом. После расслоения смеси нижний водный слой, свободный от гидразонов, осторожно отсасывают. Если водный слой после экстракции толуолом окрашен, то необходимо повторить экстракцию добавлением 1 - 2 млтолуола. Верхний слой, содержащий извлеченные гидразоны, подвергают обработке 4 мл10%-ного раствора соды, который избирательно извлекает из толуола 2,4-динитрофенилгидразон пировиноградной кислоты; полная экстракция достигается энергичным перемешиванием смеси вышеуказанным способом. Для полноты извлечения 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты рекомендуется производить повторную экстракцию толуоловой смеси 2 млсодового раствора, оба содовых экстракта соединить. После расслоения смеси верхний толуоловый слой, уже не содержащий гидразона пировиноградной кислоты, отсасывают, остатки толуола удаляют фильтровальной бумагой, а в содовом экстракте (нижний слой) определяют количество гидразона пировиноградной кислоты. Для этого к 3 мл(или к 4,5 млв случае повторной экстракции) содового экстракта, что соответствуем 0,3 г ткани, прибавляют 3 мл(или 4,5 мл)1,5 н. раствора едкого натра (конечная концентрация щелочи должна быть не менее 0,75 н.). При этом развивается красно-бурая окраска, специфичная для 2,4-днннтрофенилгидразона пировиноградной кислоты. По мнению Фридемана и Хаугена, окраску обусловливает то, что вторая нитрогруппа 2,4-динитрофенилгидразона находится в параположении. Поскольку в содовом экстракте находится некоторое количество гидразонов кетоглутаровойи щавелевоуксусной кислот, то рекомендуется начинать фотометрирование через 20 мин после прибавления щелочи, так как окраска этих гидразонов нестойка и за что время исчезает.
|
Фотометрирование производят при светофильтре с длиной волны 465 нм.По величинам экстинкции с помощью калибровочной кривой определяют содержание пировиноградной кислоты в фотометрируемыхпробах. Калибровочную кривую строят на основании данных фотометрирования различных количеств стандартного раствора пирувата натрия, содержащего 20 мкг пировиноградной кислоты в 1 мл раствора.
Калибровочную кривую можно строить также на основании данных фотометрирования различных количеств стандартного раствора 2,4-динитрофенилгидразона пировииоградной кислоты.
|
Величина экстинкции находится в прямой зависимости от концентрации пировиноградной кислоты. По величинам экстинкции испытуемых проб с помощью калибровочной кривой определяют содержание пировиноградной кислоты в 3 мл(или 4,5 мл) содового экстракта, соответствующего 3 млбезбелкового фильтрата или 0,3 гткани. Расчет количества пировиноградной кислоты производят по уравнению:
где А - количество пировиноградной кислоты (в мг%),
р - количество пировиноградной кислоты (в мкг),соответствующее 0,3 г ткани и определенное по калибровочной кривой.
Лабораторная работа №7
|
|
Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...
Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого...
Индивидуальные очистные сооружения: К классу индивидуальных очистных сооружений относят сооружения, пропускная способность которых...
Своеобразие русской архитектуры: Основной материал – дерево – быстрота постройки, но недолговечность и необходимость деления...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!