Особенности сооружения опор в сложных условиях: Сооружение ВЛ в районах с суровыми климатическими и тяжелыми геологическими условиями...
Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим...
Топ:
Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов...
Определение места расположения распределительного центра: Фирма реализует продукцию на рынках сбыта и имеет постоянных поставщиков в разных регионах. Увеличение объема продаж...
Техника безопасности при работе на пароконвектомате: К обслуживанию пароконвектомата допускаются лица, прошедшие технический минимум по эксплуатации оборудования...
Интересное:
Как мы говорим и как мы слушаем: общение можно сравнить с огромным зонтиком, под которым скрыто все...
Наиболее распространенные виды рака: Раковая опухоль — это самостоятельное новообразование, которое может возникнуть и от повышенного давления...
Финансовый рынок и его значение в управлении денежными потоками на современном этапе: любому предприятию для расширения производства и увеличения прибыли нужны...
Дисциплины:
2022-10-05 | 44 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Принцип метода напоминает РИФ, но вместо флуоресцирующей метки используется ферментная (чаще фермент пероксидаза).
1-ый вариант ИФА (направлен на обнаружение антигенов)
l Цели постановки:
1. Сероиндикация (АГ – молекулы на поверхности бактериальных клеток или вирусных частиц);
2. Идентификация вирусов (на третьем этапе вирусологического метода диагностики);
3. Определение уровней цитокинов, белков системы комплемента, онкомаркеров в сыворотке крови (в данном случае АГ – это сами молекулы цитокинов, онкомаркеров, белков системы комплемента и т.д.);
4. Иммуногистохимические исследования (определение специфических рецепторов на поверхности клеток тканевых срезов – антигенов).
Ставится в лунках планшета, ко дну которых заранее адсорбированы известные АТ против определённых АГ. Вносят исследуемый образец, инкубируют в шейкере, промывают буферным раствором. Далее в лунки вносят вторые антитела, меченные ферментом, вновь инкубируют в шейкере и промывают. После второй отмывки в лунки вносят субстрат-индикаторную систему, состоящую из субстрата для пероксидазы (перекись водорода) и цветового индикатора (например, ТМБ – тетраметилбензидин – окрашивает образец в синий цвет или ОФДА – ортофенилендиамин – окрашивает образец в коричневый цвет). Останавливают реакцию добавлением стоп-реагента (слабый раствор соляной или серной кислоты). Учёт реакции – по измерению оптической плотности содержимого лунок планшета с помощью спектрофотометра или ИФА-анализатора. Количество АГ в образце определяется по калибровочной кривой (график, где определённому содержанию АГ соответствует определённое значение оптической плотности раствора, измеряемое спектрофотометром или ИФА-анализатором). Калибровочные кривые строят предварительно по стандартам (фабричные растворы, содержащие заведомо известное количество того или иного АГ).
|
2-ой вариант ИФА (направлен на выявление антител)
l Цели постановки:
1. Серодиагностика (определение количества АТ против бактериальных, вирусных, протозойных, грибковых АГ в сыворотке крови);
2. Определение уровней иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови и других биологических жидкостях;
3. Определение уровней аутоагрессивных антител в сыворотке крови и других биологических жидкостях (используется в диагностике аутоиммунных заболеваний).
К дну лунок планшета адсорбированы известные АГ (диагностикумы) к ним добавляют сыворотку крови пациента. (биологическую жидкость). Инкубируют в шейкере, промывают. Далее в каждую лунку вносят антиглобулиновую сыворотку (АГС), содержащую АТ к человеческим иммуноглобулинам, меченные пероксидазой, инкубируют в шейкере, затем промывают и вносят субстрат-индикаторную систему. Реакцию останавливают добавлением стоп-реагента (слабый раствор соляной или серной кислоты). Учёт реакции – с помощью спектрофотометра или ИФА-анализатора по измерению оптической плотности содержимого лунки планшета. Количество АТ в сыворотке крови определяется по калибровочной кривой (график, где определённому содержанию АТ соответствует определённое значение оптической плотности раствора, измеряемое спектрофотометром или ИФА-анализатором). Калибровочные кривые строят предварительно по стандартам (фабричные растворы, содержащие заведомо известное количество тех или иных АТ)
Реакция гемагглютинации (РГА)
¨ Используется только для индикации вирусов, содержащих гемагглютинины
¨ Ставится в лунках планшета
¨ Компоненты:
¡ жидкая питательная среда, в которой культивировали культуру клеток,
¡ взвесь эритроцитов
|
¨ Учет – по характеру осадка эритроцитов:
¡ при наличии вируса с гемагглютининами – “зонтик”,
¡ при отсутствии – “пуговка”.
¨ Если вирус обнаружен, то жидкость называется вируссодержащей жидкостью (ВСЖ)
РТГА для идентификации вируса
¨ ставится в лунках планшета
¨ компоненты реакции:
1. ВСЖ
2. специфическая противовирусная сыворотка
3. эритроциты
¨ Учет:
если сыворотка подходит к вирусу, то его гемагглютинины блокируются антителами, а значит не вызывают агглютинацию эритроцитов - осадок в виде “пуговки” (положительная реакция)
если сыворотка не подходит к вирусу, он агглютинирует эритроциты – осадок в виде “зонтика” (отрицательная реакция)
РТГА с целью серодиагностики ставится с «парными» сыворотками и считается положительной, если произошло увеличение титра АТ не менее чем в 4 раза. РТГА ставится только при вирусных инфекциях.
|
|
Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
Типы оградительных сооружений в морском порту: По расположению оградительных сооружений в плане различают волноломы, обе оконечности...
Наброски и зарисовки растений, плодов, цветов: Освоить конструктивное построение структуры дерева через зарисовки отдельных деревьев, группы деревьев...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!