Принято в печать: 2 марта 2009 года

DOI 10.1211/jpp/61.06.0009

ISSN 0022-3573

Защитное действие препарата JBP485 при повреждениях печени у мышей, вызванных приемом конканавалина А

Тао Ян^а, Цзинцзин У^а, Чанюань Ван^а, Ци Лю^а, Сяочи Ма^а, Цзиньюн Пэн^а, Тайичи Каку^б, Кэсинь Лю^а

а – фармацевтический институт, Далянский медицинский институт, Далянь, Ляонин, Китай и b Джапан Байопродактс Индастри Ко Лтд, Томигая, Сибуа-ку, Токио

Резюме

Цели исследования. Впервые цикло-транс-4-L- гидроксипропил- L – серин (JBP485)был выделен из препарата «Лаеннек» (Laennec) (гидролизат плаценты человека). Мы решили оценить противогепатитный механизм препарата JBP485, чтобы разработать новый препарат для лечения гепатита.

Методы. Мы исследовали гепатопротекторное действие препарата JBP485 при иммунно-опосредованном поражении печени у мышей, вызванном приемом конканавалина А (Кон А). Мыши получали препарат JBP485 до и после инъекции Кон А (10 мг/кг). Через восемь часов после введения Кон А определяли активность цитозольных ферментов (аланин аминотрансфераза, лактат дегидрогеназа) в сыворотке крови, а также активность или концентрацию ферментов (супероксиддисмутаза, малоновый диальдегид, миелопероксидаза, оксид азота) в гомогенате печени. Гистологические изменения исследовали путем анализа срезов печени. С помощью иммунногистохимического анализа определяли влияние препарата JBP485 на фактор некроза опухоли альфа (ФНО-α) и молекулу межклеточной адгезии - 1 (ICAM-1, intercellular adhesion molecule - 1) в печени. Фрагментацию ДНК гепатоцитов исследовали методом агарового электрофореза, а транскрипцию генов bax и bcl-2 определяли с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией.

Основные результаты. Кон А повышал активность цитозольных ферментов и ферментов в гомогенате печени, а также концентрацию ФНО-α и ICAM-1, однако прием препарата JBP485 снижал эти показатели. Кроме этого, прием препарата JBP485 значительно подавлял повышение фрагментации ДНК и уменьшение мРНК bcl-2/bax, вызванное приемом Кон А.

Выводы. Полученные результаты показывают, что иммунно-опосредованное повреждение печени можно предотвратить с помощью JBP485 благодаря иммунномодулирующему воздействию на Т-клетки молекулы адгезии, а также благодаря антиоксидантному действию и подавлению апоптоза.

Ключевые слова: апоптоз, конковалин А, гепатит, JBP485, Лаеннек.

Введение

Экстракт человеческой плаценты (ЭЧП) используют для лечения ряда заболеваний печени, в том числе гепатита и цирроза⁽¹⁾. Лаеннек (торговое наименование гилролизата человеческой плаценты) производится компанией Джапан Байопродактс Индастри Ко Лтд (Токио, Япония) путем очищения экстракта человеческой плаценты. В Японии препарат используют в медицине для лечения хронического повреждения печени в результате гепатита в течение более, чем 40 лет⁽²⁾. Препарат JBP485 (Рисунок 1), дипептид, одно из соединений, выделенных из Лаеннека; его получают химическим путем методом энантиоселективного синтеза. Наш предварительный эксперимент показал, что препарат JBP485 отлично всасывается из желудочнокишечного тракта⁽²⁾ и обладает противогепатитным действием при токсическом поражении печени, вызванном препаратом конканавалин А (Кон А)⁽³⁾. Это позволяет предположить, что препарат JBP485 распознается системой транспортировки пептидов в желудочнокишечном тракте. Таким образом, важно подробно исследовать противогепатитный молекулярный механизм препарата JBP485 для последующей разработки нового противогепатитного препарата для приема внутрь.

Исследование проводили на хорошо описанной мышиной модели: вызывали Т-зависимое повреждение печени путем инъекции Т-клеточного митогенного растительного лектина – конканавалина (Кон А), - что приводило к развитию молниеносного гепатита в течение 8 часов⁽⁴⁾. Модель повреждения печени, вызванного инъекцией Кон А мышам, считается подходящей для изучения иммунно-опосредованного заболевания печени.

В настоящем исследовании мы изучали гепатопротекторное действие препарата JBP485 при иммунно-опосредованном повреждении печени у мышей для определения противогепатитного молекулярного механизма.

Рисунок 1. Химическая структура препарата JBP485.

Материалы и методы

Реактивы

Препарат JBP485 закупили в компании Джапан Байопродактс Индастри Ко Лтд (Токио, Япония). Кон А и коллагеназу приобрели в компании Вако Пьюэ Кемикал Индастриз Лтд (Осака, Япония). Антитела к фактору некроза опухоли альфа (ФНО-α) и молекуле межклеточной адгезии - 1 (ICAM-1) приобрели в компании Бостер Байотекнолоджи Ко Лтд (Ухань, Китай). Реагенты для фрагментации ДНК и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) приобрели в компании ТаКаРа Байотекнолоджи (Далянь) Ко Лтд (Далянь, Китай). Информация о других реактивах будет приведена далее.

Животные

Самок мышей линии BALB/c с массой тела 20-24 г (получены из Центра экспериментальных животных Далянского медицинского университета, Далянь, Китай) содержали при температуре 23±2^оС, 12-ти часовом световом цикле, при относительной влажности 50±5% на протяжении всего исследования. У всех мышей был свободный доступ к воде и корму. Все протоколы эксперимента были одобрены Этическим комитетом по вопросам обращения с животными Далянского медицинского университета в соответствии с китайским правительственным Комитетом по контролю и надзору за экспериментами с участием животных.