ОПЫТ N 6. Обнаружение фосфорной кислоты в гидролизате нуклеопротеида.

Фосфорную кислоту можно обнаружить с помощью молибдата аммония.

 

Приборы: 1) штатив с пробирками, 2) пипетки, 3) спиртовка.

Реактивы: 1) раствор молибдата аммония в азотной кислоте.

Ход работы:

К 2 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте добавляют 1 мл испытуемого раствора. Смесь слегка нагревают. Отмечают цвет образующегося осадка, по которому судят о наличие в исследуемом растворе фосфорной кислоты.

Делают вывод по результатам проделанной работы.

Лабораторная работа №12

Исследование свойств белка. Аминокислотный состав.

"Агрегация белка"

Сущность метода. Белки являются гидрофильными коллоидами. Реакции осаждения белков из раствора основаны на разрушении сольватной оболочки и нейтрализации электрического заряда коллоидных частиц белка. В зависимости от осадителя реакции осаждения разделяют на обратимые и необратимые.

Обратимые реакции осаждения – белки не подвергаются глубоким изменениям, и получаемые осадки могут быть растворены
в первоначальном растворителе. К обратимым реакциям осаждения относятся реакции высаливания белков, осаждения их спиртом или ацетоном при непродолжительном действии.

Необратимые реакции осаждения – приводят к глубоким изменениям структуры белка, образованиям комплексов с реагентами и частичной деструкции. Осадки не могут быть растворены
в первоначальном растворителе. К необратимым реакциям относятся взаимодействия белков с солями тяжелых металлов,
с концентрированными минеральными кислотами.

В качестве исследуемого белка используются водные растворы: яичного белка (1:4), желатина(1:4). казеина(1:6), а в качестве реагентов – принятые в пищевой промышленности вещества.

Опыт 1. Осаждение белков солями

Реактивы:

Насыщенные растворы следующих солей:

1. Хлорид натрия;

2. Сульфат аммония;

3. Гидрокарбонат натрия;

4 Хлорид аммония.

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

В четыре пробирки, содержащих по 1 мг раствора белка, наливают по 1мл насыщенного раствора одного из электролитов. Пробирки встряхивают, оставляют в штативе на 1-2 мин Наблюдаемые результаты записывают. Разбавляют двойным – тройным количеством воды, встряхивают. Дайте объяснение наблюдаемым изменением.

Опыт 2. Осаждение белков кислотами

Реактивы:

Концентрированные кислоты:

1. Соляная;

2 Уксусная;

3. Муравьиная.

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

В три пробирки наливают 1мл раствора белка. Осторожно добавляют в одну пробирку концентрированной соляной кислоты, так, чтобы; кислота не смешивалась с белком.

В месте соприкосновения двух жидкостей образуется белый хлопьевидный осадок. Повторите этот опыт с концентрированной уксусной и муравьиной кислотами. Сделайте вывод об отношении белка к концентрированным кислотам. Долейте в пробирку воду и встряхните.

Что наблюдаете? Дайте объяснение.

Опыт 3. Осаждение белков спиртом

Реактивы:

Этиловый спирт, 96%-ный

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

В пробирку наливают 1мл раствора белка и добавляют 2 мл этилового спирта. Что наблюдаете? Растворяется ли осадок в воде? Какой вид агрегации наблюдается? Объясните.

Опыт 4. Нагревание раствора белка

Реактивы:

Раствор белка

Оборудование:

1. Пробирки,

2. Спиртовка.

Порядок выполнения работы

Небольшое количество раствора белка нагревают до кипения и наблюдают помутнение жидкости. Что это объясняет?

Разбавьте раствор водой. Растворится ли осадок или нет, почему? Объясните наблюдение.

Подведите итог исследованиям.

 

"Исследование аминокислотного состава белка"

Сущность метода. Исследование позволяет определить наличие или отсутствие в исследуемом белке определенных аминокислот и группировок, характерных для белков. Тестом служат так называемые "цветные реакции".

 

Опыт 1. Тест на пептидные группы (биуретовая реакция)

Реактивы:

1. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор;

2. Сульфат меди, 1%-ный раствор

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

В пробирку берут 5 капель раствора белка, 5 капель гидроксида натрия, 2 капли сульфата меди и все перемешивают. Содержимое пробирки приобретает фиолетовый цвет.

Объясните реакцию. Напишите уравнение реакции.

Примечание: биуретовую реакцию способны давать вещества, содержащие не менее двух пептидных связей.

Опыт 2. Тест на аминогруппы (нингидриновая реакция)

Реактивы:

Нингидрин, 0,5%-ный раствор

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

В пробирку берут 5 капель раствора белка, добавляют 5 капель нингидрина и кипятят 1 – 2 минуты. В пробирке появляется розово-фиолетовое окрашивание, с течением времени раствор синеет.

Объясните реакцию.

Опыт 3. Тест на ароматические аминокислоты (ксантопротеиновая реакция)

Реактивы:

1. Азотная кислота концентрированная;

2. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор;

3. Желатин, 10%-ный раствор.

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

Берут две пробирки и вносят в первую 5 капель исследуемого раствора белка, а во вторую – 5 капель желатина. Затем в обе пробирки добавляют по 3 капли азотной кислоты и осторожно кипятят. В первой пробирке появляется осадок желтого цвета, а во второй – очень слабое окрашивание, так как желатин почти не содержит ароматических аминокислот.

Объясните реакцию. Напишите уравнение реакции.

 

Опыт 4. Тест на аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу (реакция Фоля)

Реактивы:

Реактив Фоля (К 5 – 10%-ному раствору ацетата свинца добавляют 10%-ный раствор гидроксида натрия до растворения).

Оборудование:

Пробирки

Порядок выполнения работы

К пяти каплям раствора белка прибавляют 5 капель реактива Фоля. Кипятят и дают постоять 1 – 2 минуты. При стоянии появляется бурый
или черный осадок сульфида свинца.

Объясните реакцию, напишите уравнение.

Подведите итог исследованиям. Перечислите обнаруженные осадки кислот в исследуемом белке.