Методика взятия венозной крови

Обследуемый сидит или лежит. Его положение должно быть удобным, рука свободно вытянута вперед и прочно лежит на подушке. Вены пережимаются манжетой или жгутом на время не более 30 с, при этом пульс должен прощупываться. Место пережатия должно быть выше места прокола на 8-10 см. После наложения манжеты кисть руки пациента должна быть сжата “в кулак”, после этого проводится промывание тампоном со спиртом места прокола. После высыхания кожи (несколько секунд) левой рукой обхватывается рука пациента, большим пальцем придерживается вена (кожа должна быть натянута против касания), а правой рукой в вену вводится игла вакуумной пробирки или шприца. Игла острием направлена вниз, заточенная сторона – вверх. Кожа прокалывается под углом 15-20⁰. Кровь должна литься свободно. Пережатие освобождается после правильной установки иглы. После получения необходимого количества крови, тампоном со спиртом накрывается место взятия, игла осторожно удаляется. Руку не следует сгибать в течение 15-20 с. После этого накладывается стерильная повязка или пластырь. Если после пункции кровь не появилась, проводится повторная пункция. При слабовыраженных венах рекомендуется многократное сжимание и разжимание кулака обследуемого, согревание места взятия, легкое похлопывание, опускание руки вниз. При “бегающих” венах необходимо придерживать вену большим пальцем руки, при тонких – использовать более тонкие иглы.

 

Условия транспортировки венозной крови

Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре -40С-60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.

Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий. При транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики. Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты. Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.

 

МЕТОДИКА ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ (без использования разделительных или вспомогательных средств для центрифугирования)

Оборудование:

1. Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.

2. Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).

3. Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).

 

Приготовление сыворотки

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки. Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.

 

Центрифугирование

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 g (максимально до 1500 g) в течение 10 минут.

В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 6000-15000 g в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки. Сыворотка не должна быть гемолизированной.

Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови. В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличае от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.

Наряду с коммерческими системами для получения сыворотки при взятии венозной крови широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза. Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.

 

МЕТОДИКА ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАЗМЫ (без коммерческих разделительных устройств)

Оборудование

1. Центрифужные стеклянные, химически чистые, сухие пробирки.

2. Центрифуга, обеспечивающая центрифугирование до 1500 xg.

3. Химически чистые, сухие химические пробирки.

4. Крышки для пробирок или лабораторная пленка типа “Парафильм”.

 

Приготовление плазмы

Венозную кровь, полученную с антикоагулянтом немедленно после взятия перемешивают переворачиванием пробирок с кровью, закрытых крышками, не менее 5 раз. Перемешивание должно осуществляться без встряхивания и пенообразования. Время между началом наложения жгута и смешиванием крови с антикоагулянтом не должно превышать 2 минут. После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой.