Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни...
Топ:
Теоретическая значимость работы: Описание теоретической значимости (ценности) результатов исследования должно присутствовать во введении...
Определение места расположения распределительного центра: Фирма реализует продукцию на рынках сбыта и имеет постоянных поставщиков в разных регионах. Увеличение объема продаж...
Техника безопасности при работе на пароконвектомате: К обслуживанию пароконвектомата допускаются лица, прошедшие технический минимум по эксплуатации оборудования...
Интересное:
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Инженерная защита территорий, зданий и сооружений от опасных геологических процессов: Изучение оползневых явлений, оценка устойчивости склонов и проектирование противооползневых сооружений — актуальнейшие задачи, стоящие перед отечественными...
Как мы говорим и как мы слушаем: общение можно сравнить с огромным зонтиком, под которым скрыто все...
Дисциплины:
2017-08-24 | 366 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Готовят восемь пробирок одинакового диаметра, высоты и конфигурации дна (6 опытных и 2 контрольных). Далее делают последовательные двукратные разведения сыворотки. Сыворотку больного при серодиагностике разводят в соотношении от 1:50 до 1:1600. Иммунную сыворотку при серотипировании разводят до титра или до половины титра (титр указан на этикетке).
Для приготовления исходного разведения сыворотки в разведении 1:50 смешивают 0,1 мл. сыворотки с 4,9 мл. физиологического раствора. Это разведение в количестве 1 мл. вносят в первую, вторую пробирки и в шестую - контроль сыворотки. Далее во вторую и все последующие пробирки (кроме контроля сыворотки) наливают по 1 мл. физиологического раствора. Разведения производят, начиная со второй пробирки. Тщательно перемешав содержимое второй пробирки, из неё отбирают 1 мл. и переносят в третью пробирку. Смешав содержимое третьей пробирки, так же отбирают 1 мл. и переносят в следующую. Так делают разведения во всех опытных пробирках (по шестую включительно). Из шестой пробирки 1 мл. выливают
дезинфицирующий раствор. В каждой опытной пробирке должен содержатся 1 мл. сыворотки в соответствующем разведении. Седьмая пробирка является контролем сыворотки (сыворотка в разведении 1:50), в эту пробирку антиген не вносят. Восьмая пробирка является контролем антигена и содержит 1 мл. физ. раствора, в неё добавляется антиген.
После того, как сделаны соответствующие разведения сыворотки, во все пробирки (кроме контроля сыворотки) вносят по 2 капли (0,1 мл.) антигена - диагностикума (при серодиагностике) или свежеприготовленную взвесь микробов (при серотипировании). При этом в пробирках должна появляться небольшая равномерная муть.
|
Схема постановки развёрнутой РА.
Ингредиенты в мл. | Пробирки | |||||||||||||||||
Опыт | Контроль | |||||||||||||||||
7 сыворотки | 8 антигена | |||||||||||||||||
Изотонический раствор NaCl. | - | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | - | 1,0 | ||||||||||
|
|
|
|
| ||||||||||||||
Сыворотка 1:50. | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | - | ||||||||||
Полученные разведения. | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | 1:50 | - | ||||||||||
Диагностикум О или Н. | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | - | 0,1 |
Пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат при 37° С. Учитывают результат реакции через 18-20 часов для безжгутиковых бактерий (с О-антигеном) и на два часа - для жгутиковых (с Н-антигеном). Для учёта реакции необходимы безукоризненные результаты контролей: равномерное помутнение в контроле антигена и полная прозрачность в контроле сыворотки.
Учитывать результат можно невооруженным глазом, при помощи лупы или в агглютиноскопе.
При положительном результате реакции в пробирках появляются мелкие хлопья склеивающихся клеток, которые оседают на дно пробирки. Жидкость над осадком при этом просветляется. При встряхивании осадка (агглютината) видны хлопья, плавающие в прозрачной жидкости.
По характеру осадка различают мелко- и крупнозернистую (хлопьевидную) агглютинацию.
Крупнозернистая агглютинация происходит при склеивании подвижных микробов под влиянием жгутиковых Н-антител. Мелкозернистая агглютинация получается при работе с О-сыворотками. Крупнозернистая агглютинация наступает быстрее мелкозернистой, образующийся при этом осадок очень рыхлый и легко разбивается при встряхивании.
Интенсивность реакции агглютинации можно выразить знаком плюс:
++++ все клетки находятся в осадке, жидкость в пробирке совершенно прозрачна - результат резко положительный;
+++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости
- результат положительный;
++ осадок ещё меньше и жидкость ещё мутнее - результат слабоположительный;
+ осадок незначительный, жидкость мутная - результат сомнительный; - отсутствие осадка, жидкость равномерно мутная - результат отрицательный.
|
В случае определения антигена реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. При серодиагностике оценивают динамику нарастания титра антител в парных сыворотках, полученных в начале заболевания и спустя несколько суток.
|
|
Состав сооружений: решетки и песколовки: Решетки – это первое устройство в схеме очистных сооружений. Они представляют...
Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
Семя – орган полового размножения и расселения растений: наружи у семян имеется плотный покров – кожура...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!