Определение резус-фактора крови

Состав крови

 

 

В эритроцитах (красных кровяных тельцах) находится гемоглобин, главным свойством которого является способность легко соединяться с кислородом и переносить его ко всем клеткам организма.

Лейкоциты (белые кровяные тельца) делятся на две большие группы: зернистые (эозинофилы, базофилы, нейтрофилы) и незернистые (агранулоциты). Все виды лейкоцитов выполняют защитные функции организма.

Тромбоциты (кровяные пластинки) играют важную роль в процессе свертывания крови.

Благодаря своему составу кровь в организме осуществляет много функций. Непрерывно циркулируя по сосудам, она приносит всем клеткам тела кислород, которым обогащается в легких (дыхательная функция), и питательные вещества из органов пищеварения (питательная функция). Одновременно она уносит из тканей углекислый газ и другие токсические продукты обмена веществ (выделительная функция). Циркуляция крови обеспечивает перенос гормонов и других физиологически активных веществ от органов, где они образуются, к органам, на деятельность которых эти вещества оказывают влияние, выполняя таким образом гуморальную регуляцию различных органов и систем человека. Кровь содержит специальные клетки и белки, защищающие организм от вредных веществ и микроорганизмов (защитная функция).

Потеря организмом большого объема крови (тяжелая кровопотеря) может привести к резким нарушениям функций органов и систем больного, для восстановления которых требуется восстановление общего объема циркулирующей крови (ОЦК) с помощью переливания цельной крови. К тому же при различных болезнях крови могут возникнуть ситуации, связанные с недостатком в крови ее компонентов – эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, что является показанием к восстановлению компонентного состава крови с помощью вливания недостающих в ней компонентов (эритроцитарной массы, лейкоцитарной массы, тромбоцитарной массы).

На основании этого сформулированы основные показания к гемотрансфузии:

1) потеря организмом большого объема крови (тяжелая кровопотеря);

2) изменение компонентного состава крови, нарушающее функцию важных органов и систем организма

Таким образом, врач любой профессии в своей клинической практике может столкнуться с необходимостью выполнить переливание как цельной крови, так и ее компонентов.

Польский ученый Я.Янский и австрийский К. Ландштейнер в плазме крови обнаружили белковые вещества ˗ агглютинины α и β, а в эритроцитах – агглютиногены А и В. При этом наличие как тех, так и других в крови разных людей было различным, что легло в основу создания учения о группах крови.

По наличию в крови человека агглютининов и агглютиногенов Я.Янский разделил кровь людей на 4 группы:

I группа – в эритроцитах нет агглютиногенов, а в плазме есть агглютинины – 0 (α, β);

II группа – в эритроцитах есть агглютиноген А, а в плазме - агглютинин β ˗ А (β);

III группа – в эритроцитах есть агглютиноген В, а в плазме - агглютинин α ˗ В (α);

IV группа – в эритроцитах есть оба агглютиногена А и В, а агглютининов в плазме нет – АВ (0).

В настоящее время известны разновидности агглютиногена А – А₁ и А₂. Соответственно группа II(A) имеет подгруппы II(А₁) и II(А₂), а группа IV(АВ) – IV(А₁В) и IV(А₂В).

Если при гемотрансфузии происходит соединение вливаемых агглютиногенов (кровь донора) с одноименными аг-глютининами (крови больного), то возникает реакция агглютинации вливаемых эритроцитов, что приводит к развитию гемотрансфузионного шока.

Кроме агглютиногенов А и В в эритроцитах крови человека был обнаружен аглютиноген, который есть в крови обезьян Macacus rhesus, получивший название резус-фактор (Rh-фактор). Система Rh-фактора представлена 6 антигенами (D,d; C,c; E,e). Чаще всего (85%) в эритроцитах встречается Rh-антиген D, обладающий наиболее выраженными антигенными свойствами. Кровь таких пациентов считается резус-положительной.

У остальных 15% пациентов этого фактора нет, и их кровь считается резус-отрицательной.

Было установлено, что если эритроциты резус-поло-жительной крови попадают в резус-отрицательную кровь, то в последней образуются антитела к резус-антигену. При попадании эритроцитов, содержащих резус-антиген, в кровь, содержащую резус-антитела, происходит реакция агглютинации вливаемых эритроцитов, что также приводит к развитию гемотрансфузионного шока.

В эритроцитах крови человека находится и групповая система Келл (Kell). Антигены системы Келл по активности стоят на втором месте после системы резус. Они могут вызвать сенсибилизацию при беременности, переливании крови; служат причиной гемолитической болезни новорождённых и гемотрансфузионных осложнений

В систему Келл входят 2 фактора – Келл (К) (8%) и Челлано (к) (99,85%), образующих 3 генотипа: КК (0,15%), Кк (7,84%), кк (91,98%). Из этих факторов наиболее активен фактор Келл (К). Он может явиться причиной сенсибилизации как во время беременности, так и при трансфузиях крови.

Фактор Келл имеет большое значение при переливании крови и играет важную роль в происхождении гемолитической болезни новорожденных.

Развитие гемотрансфузионного шока является главным опасным осложнением при гемотрансфузии, о котором врач обязан всегда помнить и которое обязан предупредить.

Для предупреждения гемотрансфузионного шока перед гемотрансфузией необходимо:

1) определить группу крови больного и донора;

2) определить резус-принадлежность крови больного и донора;

3) выполнить пробы на групповую и резусную совместимость крови больного и донора.

Определение группы крови

Определение группы крови по системе АВ0 заключается в выявлении антигенов (агглютиногенов) А и В, находящихся в эритроцитах, стандартными антителами. В качестве последних в настоящее время используются цоликлоны анти-А и анти-В.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины, направленные против группоспецифических антигенов А и В человека. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов человека.

Цоликлоны анти-А и анти-В в жидкой форме выпускаются во флаконах или в ампулах и имеют соответствующую окраску: анти-А – розовую, анти-В – синюю. В каждой ампуле содержится от 20 до 200 доз. Срок хранения цоликлонов 2 года при температуре от +2 до +8° С.

Реакция агглютинации и ее выраженность при соединении антигенов А и В с цоликлонами анти-А и анти-В наступает очень быстро.

Для того чтобы определить группу крови больного (или донора), необходимо иметь: 1) цоликлоны анти-А и анти-В, разлитые в специальные флаконы-пипетки; 2) белую тарелку или специальную плоскость; 3) стеклянные палочки или предметные стекла; 4) спирт; 6) иглу Франка (рис.20).

 

 

 

Готовя набор для определения группы крови, необходимо обратить внимание на следующие моменты. Прежде всего надо проверить срок годности используемых цоликлонов и установить их серию. Цоликлоны, срок годности которых истек, и не имеющие серийной принадлежности для определения группы крови использоваться не должны.

Плоскость, на которой будет производиться смешивание эритроцитов исследуемой крови с цоликлонами, должна быть тщательно вымыта, высушена и также промаркирована. Это позволит избежать ошибки при определении группы крови.

Помещение, где проводится определение группы крови, должно иметь хорошее освещение и температуру от +15 до +25° С.

Техника определения группы крови сводится к следующему.

В каждую часть тарелки наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлона анти-А и анти-В (соответственно маркировке частей тарелки). Рядом с каплями цоликлонов помещают каплю исследуемой крови (кровь берут из пальца после прокола кожи или из ампулы) (рис.21). Капля крови по

объему должна быть в 10 раз меньше капли цоликлона. С помощью чистой и сухой стеклянной палочки или уголка предметного стекла смешивают каплю крови с каплей цоликлона и наблюдают за ходом реакции в течение 2-2,5 мин.

 

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается агглютинацией (склеиванием) эритроцитов, содержащих соответствующий агглютиноген (А или В), с антителом определенного цоликлона (анти-А или анти-В). Группа исследуемой крови будет соответствовать полученному результату в каждой капле цоликлона (рис. 22).

Если реакция агглютинации произошла с обоими цоликлонами (исследуемая кровь принадлежит IV группе), необходимо провести контрольное исследование данной крови с изотоническим раствором поваренной соли. Для этого большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора поваренной соли смешивают с маленькой каплей крови. Отсутствие при этом реакции агглютинации подтверждает, что исследуемая кровь относится к IV группе. При наличии во время контроля спонтанной агглютинации надо провести определение группы исследуемой крови по стандартным сывороткам, содержащим известный набор a- и b-агглютининов.

В составе цоликлонов отсутствуют высокомолекулярные добавки, способные вызывать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов. Поэтому нет необходимости проводить контроль с растворителем.

Результаты манипуляции по определению группы крови оформляются протоколом определения группы крови (рис.23). Данный протокол вклеивается в историю болезни больного и является документом, позволяющим в дальнейшем выявить причину ошибочного определения групповой принадлежности исследуемой крови.

 

 

И РЕЗУС-ФАКТОРА КРОВИ

Ошибки при определении группы и резус-фактора крови, а также при проведении проб на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента возникают в результате нарушения техники выполнения исследования или в случаях наличия трудноопределимых групп крови.

 

Технические ошибки

1. Одной из частых причин, которая может привести к ошибке при определении группы и резус-принадлежности исследуемой крови, является ошибочный порядок расположения реагентов (цоликлонов, стандартных сывороток), а также невнимательное отношение к пипеткам, используемым для забора реагентов, и палочкам, применяемым для смешивания крови с реагентом. Поэтому каждый раз при определении группы и резус-фактора крови необходимо проверить расположение реагентов на штативе, визуально оценить их качество (исключить использование помутневших, частично высохших реагентов, а также реагентов с истекшим сроком годности).

2. Несоблюдение температурных условий при определении группы и резус-фактора крови с помощью стандартных сывороток может привести к получению ошибочных результатов. Определение группы крови необходимо проводить при температуре воздуха не ниже 15⁰С, поскольку используемые стандартные сыворотки могут содержать поливалентные холодовые агглютинины, вызывающие неспецифическое склеивание эритроцитов при пониженной температуре. При этом видимая реакция агглютинации бывает обусловлена образованием «монетных столбиков». Эти «монетные столбики», как правило, распадаются после добавления в смесь реагента с кровью 1-2 капель физиологического раствора и перемешивания смеси.

В то же время при использовании в качестве реагента цоликлонов анти-А и анти-В температура воздуха не должна превышать 25⁰С, поскольку находящиеся в цоликлонах антитела в этих условиях утрачивают свою активность.

3. К ошибке оценки реакции агглютинации может привести нарушение соотношения количества реагента и исследуемых эритроцитов. Оптимальное соотношение эритроцитов и используемых тестовых реагентов должно быть 1:10 при применении стандартных сывороток и 2-3:10 при использовании цоликлонов. При избытке эритроцитов реакция агглютинации может быть не замечена. Это обычно имеет место в тех случаях, когда агглютинационные свойства эритроцитов снижены (подгруппа крови А₁). При недостаточном количестве эритроцитов реакция агглютинации может быть замедленной, что также приведет к неправильной трактовке результатов исследования крови.

4. Обычно реакция агглютинации появляется в течение первых 10 с, но наблюдать за ходом реакции следует не менее 5 мин. Особое внимание надо уделять тем смесям, в которых реакция агглютинации отсутствует. Соблюдение этого правила позволит выявить слабый агглютиноген А₂, с которым реакция агглютинации происходит медленно.

 

И осложнения

Гемотрансфузии при тщательном соблюдении правил являются безопасным методом лечения различных патологических состояний человека. Нарушение правил и техники гемотрансфузий может привести к развитию посттрансфузионных реакций и осложнений. Возникновение любого осложнения или подозрение на возможность его развития требует немедленного проведения лечения больного в условиях отделения интенсивной терапии.

Постгемотрансфузионные реакции, как правило, не сопровождаются серьезными нарушениями функций органов и систем больного и не представляют опасности для его жизни.

К постгемотрансфузионным реакциям относятся:

– пирогенные (легкие, средние, тяжелые) – проявляющиеся повышением температуры тела, головной болью, уча-щением пульса и дыхания. Причиной их становятся продукты распада белков плазмы и лейкоцитов донорской крови;

– аллергические – являющиеся следствием сенсибилизации организма больного к Ig. Чаще они возникают после повторных гемотрансфузий и выражаются повышением температуры тела, ознобом, общим недомоганием, крапивницей, одышкой, тошнотой.

Постгемотрансфузионные осложнения встречаются в клинической практике нередко и обусловлены нарушением инструкций по переливанию крови. По статистике эти осложнения наблюдаются в 0,01% гемотрансфузий.

К развитию гемотрансфузионных осложнений приводит:

1. Н есовместимость крови донора и больного (по системе АВ0, резус-фактору, биологическому фактору). При переливании несовместимой крови в сосудистом русле пациента возникает острый гемолиз эритроцитов, проявляющийся развитием гемотрансфузионного шока. Для предупреждения этого осложнения необходимо тщательно проводить пробы на индивидуальную групповую и резусную совместимость крови донора и больного

2. Недоброкачественность переливаемой крови (бактериальное загрязнение, перегревание крови, гемолиз эритроцитов, денатурация белков вследствие длительного хранения крови, нарушение температурного режима при хранении крови). В результате переливания недоброкачественной крови у больного может возникнуть гемолитический и бактериальный шок. Предупредить эти осложнения возможно тщательным осмотром контейнера с гемотрансфузионной средой и проверкой его паспортных данных.

Консервированная кровь считается пригодной для переливания, если не истек срок ее хранения, а пакет, в котором она хранится, герметичен и имеет правильную паспортизацию.

3. Перенос возбудителя инфекционного заболевания с переливаемой кровью (сифилис, малярия, туберкулез, ВИЧ). Для предупреждения этого осложнения следует обратить внимание на паспорт гемотрансфузионной среды, где должен стоять штамп, указывающий на отсутствие возбудителя инфекционного заболевания. Если этого штампа нет, такую среду переливать нельзя.

4. Массивные гемотрансфузии могут привести к цитратной интоксикации (цитрат натрия используется в качестве консерванта крови). Предупредить это осложнение можно введением 5 мл 10% раствора хлорида кальция на каждые 500 мл консервированной крови.

5. Нарушение техники переливания крови (воздушная эмболия, тромбоэмболия, повреждение вены при ее пункции, возникновение флебита). Избежать попадания воздуха в кровеносную систему больного при гемотрансфузии позволяет использование специальной системы для переливания крови, состоящей из прозрачных трубок, которые позволяют видеть пузырьки воздуха. Для предупреждения тромбоэмболии нельзя использовать для гемотрансфузии систему, в которой отсутствует специальный фильтр, вмонтированный в капельницу. Тщательное соблюдение правил асептики позволяет предупредить развитие воспалительного процесса в стенке вены.

Компоненты, препараты крови

И кровезаменители

 

В настоящее время применяют отдельные компоненты крови – эритроцитную, лейкоцитную, тромбоцитную массу, плазму и белковые препараты плазмы, которые получаются методом фракционирования крови.

Нецелесообразно переливать цельную кровь для лечения патологических состояний, вызванных дефицитом тромбоцитов, лейкоцитов, эритроцитов, так как для достижения лечебного эффекта необходимы трансфузии больших доз свежеприготовленной крови, а это вызывает тяжелые осложнения в организме (гиперволемия).

Эритроцитарная масса используется: 1) при выраженной железодефицитной анемии, не поддающейся железотерапии; 2) заболеваниях системы крови (апластическая анемия, анемия при лейкозах, геморрагические диатезы); 3) ане-

мии в акушерско-гинекологической практике; 4) шоке и кровопотере, сопровождающихся острой гипоксией.

Доза переливаемой эритроцитарной массы колеблется в зависимости от целей ее применения и составляет 125-250-500 мл. Интервал между вливаниями 1-2-3 дня.

Тромбоцитарная масса показана при различных заболеваниях, сопровождающихся тромбоцитопенией или тромбоцитопатией с наличием или угрозой геморрагического диатеза.

Лейкоцитарная масса переливается только по строгим показаниям, к которым относится выраженная лейкопения. Отчетливый лечебный эффект появляется через 3-4 дня от начала трансфузии и достигается лишь при массивных дозах препарата.

Плазма крови обладает комплексом лечебных свойств, поэтому она применяется в клинической практике с целью замещения плазмопотери, дезинтоксикации, гемостаза, парентерального питания, стимуляции жизненных сил организма, а также при плазмаферезе.

Белковые препараты плазмы используются с теми же целями, что и сама плазма. К ним относятся: 1) препараты комплексного действия – альбумин, протеин; 2) корректоры свертывающей системы – криопреципитат, протромбиновый комплекс, фибриноген, тромбин, пленка фибринная, тампон биологический антисептический, фибринолизин; 3) препараты иммунологического действия – гамма-глобулин для профилактики кори, иммуноглобулин антистафилококковый, иммуноглобулин противостолбнячный и др.

Кровезаменители – растворы, которые при внутривенном введении могут в определенной мере заменить лечебное

действие донорской крови (табл. 3). Они применяются для тран-

сфузионной терапии различных патологических состояний.

Основные показания к переливанию кровезаменителей:

кровопотеря и шок различного происхождения, интоксикация организма и нарушение белкового обмена.

Таблица 3

Состав крови

 

 

В эритроцитах (красных кровяных тельцах) находится гемоглобин, главным свойством которого является способность легко соединяться с кислородом и переносить его ко всем клеткам организма.

Лейкоциты (белые кровяные тельца) делятся на две большие группы: зернистые (эозинофилы, базофилы, нейтрофилы) и незернистые (агранулоциты). Все виды лейкоцитов выполняют защитные функции организма.

Тромбоциты (кровяные пластинки) играют важную роль в процессе свертывания крови.

Благодаря своему составу кровь в организме осуществляет много функций. Непрерывно циркулируя по сосудам, она приносит всем клеткам тела кислород, которым обогащается в легких (дыхательная функция), и питательные вещества из органов пищеварения (питательная функция). Одновременно она уносит из тканей углекислый газ и другие токсические продукты обмена веществ (выделительная функция). Циркуляция крови обеспечивает перенос гормонов и других физиологически активных веществ от органов, где они образуются, к органам, на деятельность которых эти вещества оказывают влияние, выполняя таким образом гуморальную регуляцию различных органов и систем человека. Кровь содержит специальные клетки и белки, защищающие организм от вредных веществ и микроорганизмов (защитная функция).

Потеря организмом большого объема крови (тяжелая кровопотеря) может привести к резким нарушениям функций органов и систем больного, для восстановления которых требуется восстановление общего объема циркулирующей крови (ОЦК) с помощью переливания цельной крови. К тому же при различных болезнях крови могут возникнуть ситуации, связанные с недостатком в крови ее компонентов – эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, что является показанием к восстановлению компонентного состава крови с помощью вливания недостающих в ней компонентов (эритроцитарной массы, лейкоцитарной массы, тромбоцитарной массы).

На основании этого сформулированы основные показания к гемотрансфузии:

1) потеря организмом большого объема крови (тяжелая кровопотеря);

2) изменение компонентного состава крови, нарушающее функцию важных органов и систем организма

Таким образом, врач любой профессии в своей клинической практике может столкнуться с необходимостью выполнить переливание как цельной крови, так и ее компонентов.

Польский ученый Я.Янский и австрийский К. Ландштейнер в плазме крови обнаружили белковые вещества ˗ агглютинины α и β, а в эритроцитах – агглютиногены А и В. При этом наличие как тех, так и других в крови разных людей было различным, что легло в основу создания учения о группах крови.

По наличию в крови человека агглютининов и агглютиногенов Я.Янский разделил кровь людей на 4 группы:

I группа – в эритроцитах нет агглютиногенов, а в плазме есть агглютинины – 0 (α, β);

II группа – в эритроцитах есть агглютиноген А, а в плазме - агглютинин β ˗ А (β);

III группа – в эритроцитах есть агглютиноген В, а в плазме - агглютинин α ˗ В (α);

IV группа – в эритроцитах есть оба агглютиногена А и В, а агглютининов в плазме нет – АВ (0).

В настоящее время известны разновидности агглютиногена А – А₁ и А₂. Соответственно группа II(A) имеет подгруппы II(А₁) и II(А₂), а группа IV(АВ) – IV(А₁В) и IV(А₂В).

Если при гемотрансфузии происходит соединение вливаемых агглютиногенов (кровь донора) с одноименными аг-глютининами (крови больного), то возникает реакция агглютинации вливаемых эритроцитов, что приводит к развитию гемотрансфузионного шока.

Кроме агглютиногенов А и В в эритроцитах крови человека был обнаружен аглютиноген, который есть в крови обезьян Macacus rhesus, получивший название резус-фактор (Rh-фактор). Система Rh-фактора представлена 6 антигенами (D,d; C,c; E,e). Чаще всего (85%) в эритроцитах встречается Rh-антиген D, обладающий наиболее выраженными антигенными свойствами. Кровь таких пациентов считается резус-положительной.

У остальных 15% пациентов этого фактора нет, и их кровь считается резус-отрицательной.

Было установлено, что если эритроциты резус-поло-жительной крови попадают в резус-отрицательную кровь, то в последней образуются антитела к резус-антигену. При попадании эритроцитов, содержащих резус-антиген, в кровь, содержащую резус-антитела, происходит реакция агглютинации вливаемых эритроцитов, что также приводит к развитию гемотрансфузионного шока.

В эритроцитах крови человека находится и групповая система Келл (Kell). Антигены системы Келл по активности стоят на втором месте после системы резус. Они могут вызвать сенсибилизацию при беременности, переливании крови; служат причиной гемолитической болезни новорождённых и гемотрансфузионных осложнений

В систему Келл входят 2 фактора – Келл (К) (8%) и Челлано (к) (99,85%), образующих 3 генотипа: КК (0,15%), Кк (7,84%), кк (91,98%). Из этих факторов наиболее активен фактор Келл (К). Он может явиться причиной сенсибилизации как во время беременности, так и при трансфузиях крови.

Фактор Келл имеет большое значение при переливании крови и играет важную роль в происхождении гемолитической болезни новорожденных.

Развитие гемотрансфузионного шока является главным опасным осложнением при гемотрансфузии, о котором врач обязан всегда помнить и которое обязан предупредить.

Для предупреждения гемотрансфузионного шока перед гемотрансфузией необходимо:

1) определить группу крови больного и донора;

2) определить резус-принадлежность крови больного и донора;

3) выполнить пробы на групповую и резусную совместимость крови больного и донора.

Определение группы крови

Определение группы крови по системе АВ0 заключается в выявлении антигенов (агглютиногенов) А и В, находящихся в эритроцитах, стандартными антителами. В качестве последних в настоящее время используются цоликлоны анти-А и анти-В.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины, направленные против группоспецифических антигенов А и В человека. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов человека.

Цоликлоны анти-А и анти-В в жидкой форме выпускаются во флаконах или в ампулах и имеют соответствующую окраску: анти-А – розовую, анти-В – синюю. В каждой ампуле содержится от 20 до 200 доз. Срок хранения цоликлонов 2 года при температуре от +2 до +8° С.

Реакция агглютинации и ее выраженность при соединении антигенов А и В с цоликлонами анти-А и анти-В наступает очень быстро.

Для того чтобы определить группу крови больного (или донора), необходимо иметь: 1) цоликлоны анти-А и анти-В, разлитые в специальные флаконы-пипетки; 2) белую тарелку или специальную плоскость; 3) стеклянные палочки или предметные стекла; 4) спирт; 6) иглу Франка (рис.20).

 

 

 

Готовя набор для определения группы крови, необходимо обратить внимание на следующие моменты. Прежде всего надо проверить срок годности используемых цоликлонов и установить их серию. Цоликлоны, срок годности которых истек, и не имеющие серийной принадлежности для определения группы крови использоваться не должны.

Плоскость, на которой будет производиться смешивание эритроцитов исследуемой крови с цоликлонами, должна быть тщательно вымыта, высушена и также промаркирована. Это позволит избежать ошибки при определении группы крови.

Помещение, где проводится определение группы крови, должно иметь хорошее освещение и температуру от +15 до +25° С.

Техника определения группы крови сводится к следующему.

В каждую часть тарелки наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлона анти-А и анти-В (соответственно маркировке частей тарелки). Рядом с каплями цоликлонов помещают каплю исследуемой крови (кровь берут из пальца после прокола кожи или из ампулы) (рис.21). Капля крови по

объему должна быть в 10 раз меньше капли цоликлона. С помощью чистой и сухой стеклянной палочки или уголка предметного стекла смешивают каплю крови с каплей цоликлона и наблюдают за ходом реакции в течение 2-2,5 мин.

 

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается агглютинацией (склеиванием) эритроцитов, содержащих соответствующий агглютиноген (А или В), с антителом определенного цоликлона (анти-А или анти-В). Группа исследуемой крови будет соответствовать полученному результату в каждой капле цоликлона (рис. 22).

Если реакция агглютинации произошла с обоими цоликлонами (исследуемая кровь принадлежит IV группе), необходимо провести контрольное исследование данной крови с изотоническим раствором поваренной соли. Для этого большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора поваренной соли смешивают с маленькой каплей крови. Отсутствие при этом реакции агглютинации подтверждает, что исследуемая кровь относится к IV группе. При наличии во время контроля спонтанной агглютинации надо провести определение группы исследуемой крови по стандартным сывороткам, содержащим известный набор a- и b-агглютининов.

В составе цоликлонов отсутствуют высокомолекулярные добавки, способные вызывать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов. Поэтому нет необходимости проводить контроль с растворителем.

Результаты манипуляции по определению группы крови оформляются протоколом определения группы крови (рис.23). Данный протокол вклеивается в историю болезни больного и является документом, позволяющим в дальнейшем выявить причину ошибочного определения групповой принадлежности исследуемой крови.

 

 

Определение резус-фактора крови

 

Для определения резус-принадлежности крови она направляется в гематологическую лабораторию. При направлении крови в гематологическую лабораторию врач заполняет специальный бланк (рис. 24).

 

 

 

Поскольку в эритроцитах исследуемой крови больного может отсутствовать Rh-антиген (кровь больного резус-отри-

цательная), но он мог быть сенсибилизирован Rh-антигеном при переливании ему резус-положительной крови (беременная женщина могла быть сенсибилизирована Rh-антигеном

плода) и в плазме его крови могут находиться rh-антитела, при заполнении этого бланка особое внимание уделяется гемотрансфузионному и сенсибилизационному анамнезу (ана-мнез гемотрансфузий и анамнез протекающих беременностей).

Если окажется, что кровь резус-отрицательная, то будет произведено исследование ее на наличие антител и определен их титр.

В гематологической лаборатории определение резус-фактора крови проводится с помощью цоликлона анти-D супер в желатиновой среде. Для этого в 2 пробирки помещают взвесь (0,02-0,03 мл) эритроцитов исследуемой крови и 2 капли (0,1 мл) 10% желатина. Затем в одну пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) цоликлона анти-D, в другую (контрольную) – 2 капли (0,1 мл) физиологического раствора. Содержимое обеих пробирок встряхивают и помещают на 15 мин. в водяную баню или термостат при температуре +46 – +48⁰С. По истечении указанного времени в обе пробирки добавляют 5-8 мл физиологического раствора и перемешивают их содержимое путем двукратного переворачивания пробирок.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Появление реакции агглютинации в пробирке с цоликлоном анти-D и отсутствие ее в другой пробирке свидетельствует о том, что исследуемая кровь резус-положительная. Отсутствие реакции агглютинации в обеих пробирках указывает на отсутствие в исследуемой крови Rh-антигена – кровь резус-отрицательная.

Кроме того, в гематологической лаборатории исследуемая кровь будет проверена на групповую принадлежность. Если окажется, что группа крови определена неправильно, об этом будет сообщено врачу для повторного определения группы крови больного.

В настоящее время в гематологической лаборатории определение групп крови и Rh-фактора производят перекрестным способом с помощью стандартных эритроцитов А и В (рис.25).

Цоликлон анти-А Цоликлон анти-В

	Рис. 25. Определение групп и Rh-фактора крови перекрестным способом

 

Цоликлон D-super

 

Эритроциты крови больного

 

Сыворотка крови больного

Эритроциты крови больного

 

Стандартные эритроциты А

Стандартные эритроциты В