Проницаемость LowGC грам-положительной клеточной стенки и

Автофлуоресценции продукты кисломолочного

Применимость флуоресцентной in situ гибридизации целых клеток с рРНК-

направленных зондов был с помощью зонда EUB338, со всеми кроме Eubakterien

Planctomycetes положительный сигнал Гибридизации поставляет, и различных справочных

организмов (см. 2.5.1), которые могут попасть в Молоко брожений, показано. После

Permeabilisierung из грам-положительной клеточной стенке с помощью лизоцима были клетки 6

Эталонные штаммы и брожения в образцах, содержащихся неизвестные клетки для

Зонды доступны и поставили сигналы примерно одинаковой интенсивностью. В начале

Брожения были в среднем на 98% по DAPI-окрашивание видимых ячеек для

EUB338-зонд доступно.

Для защиты результатов зонд NON338 был при любой гибридизации

провозить, которая показала, что во всех экспериментах негативные сигналы. Фальсификации

Подсчет результатов за счет флуоресценции молочных белков, который мог путем промывки

Клетки 40мм с NaOH будет противодействовать до фиксации. Благодаря этому

Стиральный шаг был выражает флуоресценции фона во многом.

В противном случае обычное определение общего количества клеток путем фильтрации определенного

Объема на поликарбонатный фильтр мог из-за оставшейся доли Белка из

Брожение остатков не выполняются. Все указанные значения относятся

поэтому на счет неспецифическим окрашиванием клеток с помощью DAPI выявленные количества клеток и

относительные данные.

Фаги титр, метаболически активные клетки окисление и изменение

В первые 7 часов неестественно säuernden брожения B pH уменьшается только

медленно, в среднем на 0,14 pH единиц в час. После 30 минут

Раздражающий перерыв при рН 5,8 в возникает второй, более сильный раздражающий участок,

уменьшая рН вырос на 0,38 единиц в час (рис. 3).

После инокуляции молока с начала культуры менее 10 фаги в мл

необнаружимый (DR. H. Neve, BAfM, личное сообщение). В течение первых 2,5 ч поднимается

Page 56

3. Результаты

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Время [ч]

Ph

agentiter [p

фу

/м

l]

Фаги-

титр

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

pH

рН

из фаги титр на 109 Фаги на мл и остается на протяжении всего брожения

таком высоком уровне.

Рис. 3. Окисление кривой и фаги титр неустойчивой творог брожения.

Чтобы сделать фиксированные ячейки для гибридизации с рРНК-зондов доступны,

клеточные был permeabilisiert стены с лизоцима, который гидролизует пептидогликан,. В

В начале брожения 98% товаров с красителем DAPI распознаваемых клеток с

Зонд EUB338 распознаваемы. В ходе окисление отличались, как из

Рис. 4 видно, что с DAPI-окрашивания клетки цифрами от рассчитанной Общей с

EUB338-зонд подсчитанных клеток числами. После 7 часов почти не раздражающий больше было

поправимо и фаги титр достиг своего апогея, в котором всего около 20%

Клеток с зондом EUB338 были распознаваемы. Поскольку мощность сигнала rRNA-направленного

Зонды напрямую от содержания Рибосом клеток и, следовательно, от их метаболической активности

зависит, был у 80% клеток рибосом зарплату за это время

хуже условия роста очень низка. Только после 8 часов, после начала второго

сильный раздражающий участок, увеличилось число с Eubakterien-зонд распознаваемых клеток

опять до конца брожения.

∆ рН = 0,38

∆ рН = 0,14

∆ рН = 0

Page 57

3. Результаты

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

PH-shift

Время [ч]

Обнаружение в

%

ПОСКОЛЬКУ

ПИ

Eub338

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

pH

рН

Рис. 4. Сравнение активных веществ окисление клеток и активность.

Состав популяции бактерий

Для идентификации содержащихся в творог микроорганизмы принцип стал

иерархически организованные зондов отслеживает. С одного уровня в иерархии подчиненных

Зонд как зонд LGC354 позволяет себя часть родительской зонд EUB338

обнаружить. Как видно из рис. 5 явствует, числа клеток для обоих зондов в рамках

Стандартное отклонение равно. В исследуемом брожения Завершится не так

Eubakterien до, которые не относятся к группе LowGC грамположительных. Чтобы это

Загрязнения с творогом чужих организмов, которые могут привести к неправильному брожений, в

обследованных брожения исключен.

Page 58

3. Результаты

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

L. L. cremoris

в творог

L. L. cremoris

в Whey

L. L. lactis

в творог

L. L. lactis

в Whey

Detek

ние в %

Eub338

Время [ч]

D

Етек

Ния

в

%

D

A

P

I

Время [ч]

Eubakterien

LowGC

Грамположительные

Организмы

Рис. 5. Процент Eubakterien-зонд EUB338 и зонда для LGC354

LowGC грам-положительных бактерий от общего количества клеток.

Сравнение состава Бактерий в сыворотку и творог в пропорции

Брожение показывает, что различия для видов L. lactis ssp. lactis и L. lactis

ПВУ. cremoris найденных клетки цифрами в рамках стандартного отклонения пренебрегать

(рис. 6). По этой причине подсчет результатов обеих долях были для

Общее рассмотрение брожения совокупно.

Рис. 6. Клетки цифры от L. lactis ssp. lactis и L. lactis ssp. cremoris в сыворотки и в

Творог долю брожения.

Page 59

3. Результаты

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Во время брожения доля отдельных штаммов бактерий изменилась на

Популяция существенно общее (рис. 7). В первые три часа скисанием гибридизированного

между 87 и 97% бактерий с L. lactis ssp. cremoris специфическим зондом

LLC68. Только 2-13% были другими в начальный культуры, содержащиеся штаммов L. lactis ssp.

lactis, L. lactis ssp. lactis биовар. diacetylactis и Leuconostoc mesenteroides с другом.

Которые Lactococcus -подвид cremoris было так в начале брожения доминирующей

Организма. После 2 ч окисление Изменение в Populations оказалось-

состав. Доля L. lactis ssp. cremoris взял и составил по 7,5 ч

менее 1% с DAPI распознаваемых клеток. Пока процент L. lactis

ПВУ. lactis в течение всего брожения только очень низкую долю Бактерий

между 1-6% имело значение, увеличивается количество Low G+C грамположительных,

к роду Lactococcus принадлежат, на 26% от общей численности населения. Во втором

Окисление фазы этот показатель оставался стабильно высокая и доля L. lactis ssp. cremoris -

Племена в общей культуре вырос примерно на 40%.

Рис. 7. Процент от Lactococcus lactis ssp. lactis, L. lactis ssp. cremoris и

другие LowGC грамположительных микроорганизмов в нестабильной säuernden

Брожения.

0134,567,58,59,510,5

94,5

87,2

69,1

19,833,4

49,5

47,9

75,6

65,3

38,4

0,9

18,4

33,3

33,2

0,5

3,1

15,4

18,6

21,2

16,1

26,6

13,1

13,7

1,5

0,6

0,7

1,9

6,2

0,2

0,5

2,8

0,2

Обнаружение в %

Dapi

Время [ч]

Low G+C грамположительные,

без Lactococcus

Eubakterien

L. L. ssp. lactis

L. L. ssp. cremoris

Page 60

3. Результаты

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.2. Фаги резистентности у Lactococcus lactis