Комплексная лабораторная диагностика специфических инфекций урогенитального тракта (хламидиоз, гонорея).

Гонорея - инфекционное заболевание с преимущественным поражением слизистых оболочек мочеполовых органов. Наиболее часто гонококки поражают органы, выстланные цилиндрическим эпителием (уретра, цервикальный канал, конъюнктива глаза и др.). Наиболее распространенным, но менее чувствительным ме­тодом лабораторной диагностики гонореи является бактериоско­пическое исследование, особенно при хронической торпидно протекающей гонорее. Однако при правильном заборе материа­ла, квалифицированном изучении препаратов, использовании провокации возможно успешное выявление гонококков. Также микроскопируют препараты, окрашенные метиленовым синим и по Грамму. Диплококки (гонококки) бобовидной формы, сложены попарно вогнутыми сто­ронами друг к другу; располагаются внугриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках.

При подозрении на гонококковую инфекцию у мужчин ис­следуют отделяемое мочеиспускательного канала, которое берут до мочеиспускания, парауретральных ходов, промывные воды прямой кишки, секрет предстательной железы, мазки из рото­глотки (по показаниям), у женщин материал берут из уретры, цервикального канала, после протирания его ватным тампоном, парауретральных ходов, бартолиниевых желез, прямой кишки, по показаниям из porоглотки. Лабораторная диагностика гонореи ротоглотки возможна лишь при посеве и выделении чистой культуры на питательных средах. При хронически текущей, леченной гонорее, при подтверждении гонорейного процесса у детей и женщин в менопаузе, при установлении излеченности гонореи используется культуральный метод диагностики.

Из каждого очага берут по 2 препарата: один окрашивают 10 г/л водным раствором метиленового синего для ориентировочной микроскопии; другой препарат окрашивают по Граму.

Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашенном метиленовым Ядра клеток окрашены в синий цвет, цитоплазма - в голубой цвет разной интенсивности, до бес­цветной. Бактериальная флора окрашивается в синий цвет разной интенсивности. Диплококки (гонококки) темно-синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, сложены попарно вогнутыми сто­ронами друг к другу; располагаются внугриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках.

Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашениом по модифицированному способу Грама Принцип. Метод основан на свойстве гонококков и других грамотрицательных микроорганизмов при обесцвечивании их в этиловом спирте отдавать основной фиолетовый краситель и до­крашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево-красным.

При правильной окраске препарат оранжево-красного цвета на тонких участках, лилово-фиолетового на толстых. ядра кле­точных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) должны частично удерживать основную фиолетовую окраску, т. е. в цен­тре они должны быть окрашены в фиолетовый цвет, по перифе­рии в оранжево-красный, а гонококки, расположенные в лейко­цитах и на эпителиальных клетках, будут оранжево-красные. Хо­рошее качество окраски обеспечивается своевременным прек­ращением обесцвечивания препарата. При недообесцвечивании, когда ядра клеток интенсивно окрашены в фиолетовый цвет, гонококки могут сохранять фио­летовую окраску. В переобесцвеченных препаратах стафилококки и стрептококки могут быть окрашены в оранжево-красный цвет и приняты за гонококки.

При бактериоскопическом исследовании идентификация го­нококков производится на основании их морфологии, располо­жения и отношения к окраске по способу Грама. Гонококк - это парный кокк, по форме имеющий сходство с кофейными зернами, сложенными вогнугыми сторонами друг к другу. Длина его 1,8 мкм, ширина 0,7-0,8 мкм, между половинками диплококка имеется щель, равная половине одного кокка. При нахождении гонококка внутри лейкоцита характерно их расположение парами или группами под углом друг к другу. Часто гонококки лежат на клетках плос­кого эпителия рядами, располагаясь перпендикулярно друг другу внугри ряда. Частота внутри- и внеклеточного расположения го­нококков зависит от периода заболевания, активности фагоцито­за, от методики взятия материала: При идентификации гонокок­ка необходимо учитывать все три его основных признака. Поло­жительный ответ нужно давать при обнаружении только типич­ных форм гонококков. Следует учитывать, что при приеме анти­биотиков и сульфаниламидов гонококки могуг становиться грамположительными, приобретать округлую или неправильную форму, неравномерную величинУ.

При хронически текущей, леченной гонорее, при подтверждении гонорейного процесса у детей и женщин в менопаузе, при установлении излеченности гонореи используется культуральный метод диагностики.

Урогенитальный хламидиоз - Урогенитальный хламидиоз - одна из самых распространенных инфекций. У мужчин чаще поражается уретра, у женщин ­цервикальный канал, покрытый цилиндрическим эпителием. Ва­гинитов хламидии не вызывают, так как вагина покрыта плос­ким эпителием. Хламидиоз часто протекает бессимптомно. Вы­деления слизистого характера в небольшом количестве. Хлами­дии могут вызывать послеродовый эндометрит, сальпингит, конъ­юнктивит у новорожденных, пневмонии, бесплодие и др.

Хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты с уни­кальным циклом развития, включающим две формы существова­ния. Элементарное тельце - инфекционная форма возбудителя, поражающая клетки (окрашивается в красно-фиолетовый цвет). Ретикулярное тельце является неинфекционной (вегетативной) формой хламидий, образуется в процессе их размножения в клетке (окрашивается в синий цвет). Хламидии растут, раз­множаются и созревают в виде микроколоний в цитоплазматиче­ском пузырьке (вакуоли). В цитоплазме клеток образуются мем­браноограниченные включения - вакуоли (тельца Провачека). Хламидийное тельце оттесняет ядро к периферии и может зани­мать значительную часть цитоплазмы. В цитоплазме одной клетки может быть несколько микроколоний хламидийных включений.

Своевременная диагностика хламидиоза определяет исход за­болевания. Для диагностики хламидиоза может использоваться ряд методов.

1. Серологический метод: реакция связывания комплемента (РСК) выявляет специфические антитела у 50% больных. При лока­лизованных формах хламидиоза получают низкие титры антител: 1: 4-1: 32. Сложна трактовка результатов исследования: трудно решить вопрос, болен обследуемый или уже переболел. РСК мо­жет использоваться для диагностики хламидийных пневмоний, болезни Рейгера.

2. Иммуноферментный анализ (ИФА) с помощью антител к Ig A,G,M может быть использован как скрининговый тест. Этот метод менее чувствительный при хронически протека­ющем хламидиозе.

3. Иммунофлюоресцентные методы (РИФ) имеют чувстви­тельность 80%. Субъективность оценки результатов исследования и частые ложноположительные результаты не делают возможным использование РИФ для контроля за излеченностью. Затрудняет исследование тот факт; что в соскобы не всегда попадает эпите­лий, пораженный хламидиями.

4. Культуральная диагностика с выделением возбудителя,в культуре клеток Мс-Соу и куриных эмбрионах является «золо­тым стандартом». Метод специфичный, но технически сложный, ~(обычно используется для научных исследований.

5. Самыми чувствительными и точными методами выявления хламидийной инфекции являются способы, основанные на по­лимеразной цепной реакции и электронная микроскопия.

6. Исследование препаратов, окрашенных по Романовско­му - Гимзе, позволяет получить только ориентировочные ре­зультаты. Морфологический метод очень трудоемкий и субъек­тивный, выявляемость до 15-20%. Метод позволяет обнаружить окрашенном цилиндрическом эпителии, полученном из церви­кального канала, уретры или в соскобах из конъюнктивы глаз, цитоплазматические включения хламидий. У мужчин соскоб из уретры берут сразу после мочеиспускания на расстоянии 2-4 см от головки члена. У женщин материал берут из цервикального канала ежиком, предварительно удалив пробку из цервикса. В исследуемом материале должен быть цилиндрический эпите­лий, так как многослойный плоский эпителий хламидиями не поражается.

В препарате, окрашенном по Романовскому - Гимзе, хлами­дийные включения следует дифференцировать с зернистыми структурами травмированных ядер (кариорексис), с розовато-си­ними зернами муцина, диффузной зернистостью цитоплазмы, пигментными зернистыми массами, эозинофильными зернами разрушенных клеток.