Определение Rh принадлежности крови.

Регламентированным является способ определения резус принадлежности с использованием стандартного универсального реагента антирезус Rhо (D). Первично отрицательные образцы дополнительно исследуются с использованием стандартного универсального реагента анти-Rhо (DС) и со стандартной сывороткой - Rhо (DСЕ). Резус-отрицательными считают образцы крови, которые не содержат ни одного из этих трех антигенов (D,С,Е). Указанный способ эффективно и широко использовался до разработки диагностикумов на основе моноклональных антител.

Определение резус принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева)

Оснащение.

-стандартный универсальный реагент антирезус анти-D

-33% раствор полиглюкина

-стандартные эритроциты Rh+ rh- для контроля

-пробирки вместимостью 10 мл

-лупа с2-4 кратным увеличением

Предварительная обработка крови не требуется. Кровь может быть с консервантом и без, может использоваться осадок эритроцитов в пробирке после образования свертка крови, взятой без стабилизатора.

Техника реакции.

В штатив устанавливают два ряда пробирок по числу исследуемых образцов и по 2 пробирки резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. На пробирках надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется.

Во все пробирки первого ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) универсального реагента антирезус.

Во все пробирки второго ряда вводят по 1 капле (0,05 мл) 0,9% раствора натрия хлорида и по 1 капле 33% раствора полиглюкина.

В каждую пару одинаково маркированных пробирок вводят, согласно маркировке, по 1 капле исследуемой крови.

В пробирки, предназначенные для контроля, вводят стандартные резус- положительные и резус-отрицательные эритроциты.

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по ее стенкам. Это делает реакцию более выраженной. Экспозиция – 3 мин.

По истечении 3 мин. в пробирки добавляют 0,9% раствор натрия хлорида до образования розового окрашивания и перемешивают 2-3 кратным перевертыванием пробирок, не встряхивая.

Трактовка результатов.

Содержимое пробирок просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу. Результат оценивают по наличию или отсутствию аггрютинации.

При наличии агглютинатов на фоне просветленной жидкости, исследуемые образцы крови считают резус-положительной.

При отсутствии агглютинатов – гомогенное окрашивание, исследуемые образцы крови считают резус-отрицательными.

Однако эти результаты учитываются как истинные только после оценки контрольных образцов, т.е. при положительной реакции со стандартными резус- положительными эритроцитами и отрицательной реакции со стандартными резус- отрицательными эритроцитами, а так же после просмотра результатов во втором (контрольном) ряду. Здесь агглютинации быть не должно.

Более обоснованным представляется двухэтапный способ определения резус принадлежности крови. На первом этапе используют цоликлон «Анти-D-супер» (моноклональные анти D антитела класса IgM). На втором этапе резус-принадлежность определяют в пробирке, применяя стандартный универсальный реагент для определения резус-фактора Rhо (D), либо в желатиновом тесте с использованием цоликлона «Анти-D» (моноклональные анти- D-антитела класса IgG).

Реакция гемагглютинации на плоскости с помощью анти-D IgM (полные антитела) моноклонального реагента.

Определение производят в нативной крови, стабилизированной с помощью консервантов; в крови без антикоагулянта, в том числе взятой из пальца. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов и температуре около 37°С, поэтому желательно применять подогретую пластинку.

Ход определения: